參藿五味顆粒制備工藝及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

劉 明， 張美玉， 吳泳錫， 王一竹， 孫玥琦， 劉 智， 鄭 飛， 越 皓

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林省人參科學(xué)研究院，吉林 長(zhǎng)春 130117)

參藿五味顆粒是長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床驗(yàn)方，由醋五味子、紅參、炙淫羊藿3味中藥組成。方中五味子醋制后酸澀收斂作用增強(qiáng)，善于滋養(yǎng)肝腎，為君藥[1-3]；人參蒸制后為紅參，其功偏溫補(bǔ)、補(bǔ)氣安神、滋陰生津，為臣藥[4-6]；淫羊藿由羊油炮制后其藥性由寒轉(zhuǎn)溫，補(bǔ)益腎陽(yáng)、溫散寒邪、溫腎助陽(yáng)為佐藥[7-10]，三藥配伍，可增強(qiáng)補(bǔ)益氣血、壯陽(yáng)益腎的功效，從而起到緩解體力疲勞、提高免疫力的作用[11-16]。

課題組前期用超高壓技術(shù)對(duì)參藿五味顆粒的提取工藝進(jìn)行研究，在此基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)對(duì)其成型工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究，以期為今后工業(yè)化生產(chǎn)及保健食品申報(bào)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器 Thermo U-3000型高效液相色譜儀(美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州智博瑞儀器制造有限公司)。

1.2 試劑與藥物 乳糖、淀粉、糖粉、糊精購(gòu)自山東聊城華陽(yáng)醫(yī)藥輔料有限公司。醋五味子、紅參、炙淫羊藿購(gòu)自安徽援康中藥飲片股份有限公司，經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)王淑敏教授鑒定為2020年版《中國(guó)藥典》收載品種。五味子醇甲對(duì)照品(批號(hào)110857～201815)，五味子、人參、淫羊藿對(duì)照藥材(批號(hào)110703～201933、120917～201712、121632～201502)購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；五味子甲素、五味子乙素(批號(hào)R12O8F45508、Y26F11Y17148)對(duì)照品購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司。甲醇、乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；水為超純水。

2 制備工藝

2.1 提取物制備 前期采用超高壓提取技術(shù)進(jìn)行制備，最佳提取工藝為提取溶劑70%乙醇，提取壓力300 MPa，料液比1∶40，保壓時(shí)間5 min。

2.2 成型工藝優(yōu)化

2.2.1 藥物與輔料比例 分別選擇糊精、乳糖、糖粉作為輔料，結(jié)果見(jiàn)表1。由此可知，藥物與糊精比例為1∶4、1∶5時(shí)顆粒成型性最好，故以糊精為輔料，兩者比例為1∶4。

表1 藥物與輔料比例考察結(jié)果

2.2.2 潤(rùn)濕劑(乙醇)體積分?jǐn)?shù) 表2顯示，75%乙醇制粒效果最好，故以75%為乙醇體積分?jǐn)?shù)。

表2 乙醇體積分?jǐn)?shù)考察結(jié)果

2.3 制備工藝 見(jiàn)圖1。

2.4 中試試驗(yàn) 將醋五味子、紅參、炙淫羊藿進(jìn)行適度破碎后，按“2.3”項(xiàng)下制備工藝進(jìn)行3批中試試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。由此可知，3批中試產(chǎn)品的成品率接近，印證了該制備工藝的可行性及所得成品的穩(wěn)定性，并符合大生產(chǎn)一般要求。

表3 3批中試產(chǎn)品生產(chǎn)數(shù)據(jù)(n=3)

3 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

3.1 TLC定性鑒別

3.1.1 五味子 取本品3 g，加20 mL三氯甲烷超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，加1 mL三氯甲烷溶解，即得供試品溶液；取五味子對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液；除去五味子，按處方制成陰性樣品，同法制成陰性樣品溶液；取五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲對(duì)照品適量，甲醇制成1 mg/mL對(duì)照品溶液。吸取上述4種溶液，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(30～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，置于254 nm紫外燈下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖2。由此可知，供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。

取上述4種溶液適量，分別點(diǎn)于不同來(lái)源(青島海洋化工廠(chǎng)、上海盛亞化工有限公司)同一硅膠GF254薄層板上，考察方法專(zhuān)屬性和條狀點(diǎn)樣，結(jié)果見(jiàn)圖3。

取上述4種溶液適量，分別點(diǎn)于高溫高濕、低溫低濕條件下同一硅膠GF254薄層板上，以考察方法耐用性，結(jié)果見(jiàn)圖4。

3.1.2 紅參 取本品5 g，加1 mL水?dāng)嚢杈鶆颍偌铀柡驼〈?0 mL超聲處理30 min，取正丁醇層，加3倍量氨試液(400→1 000)，振搖，靜置分層，取正丁醇層蒸干，加1 mL甲醇溶解，作為供試品溶液；取紅參對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液；除去紅參，按處方制成陰性樣品，同法制成陰性樣品溶液；取人參皂苷Rb1、Re、Rf、Rg1對(duì)照品適量，甲醇制成2 mg/mL對(duì)照品溶液。吸取上述4種溶液，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，噴10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃下加熱至斑點(diǎn)清晰，分別在日光、365 nm紫外燈下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖5。由此可知，供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。

取上述4種溶液適量，分別點(diǎn)于不同來(lái)源(青島海洋化工廠(chǎng)、上海盛亞化工有限公司)同一硅膠G薄層板上，以考察方法專(zhuān)屬性和條狀點(diǎn)樣，結(jié)果見(jiàn)圖6。

取上述4種溶液適量，分別點(diǎn)于高溫高濕、低溫低濕條件下同一硅膠G薄層板上，以考察方法耐用性，結(jié)果見(jiàn)圖7。

3.1.3 淫羊藿 取本品0.5 g，加10 mL乙醇溫浸30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，加1 mL乙醇溶解，作為供試品溶液；取淫羊藿對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液；除去淫羊藿，按處方制成陰性樣品，同法制成陰性樣品溶液；取淫羊藿苷對(duì)照品適量，甲醇制成1 mg/mL對(duì)照品溶液。吸取上述4種溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(15∶10∶10)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，噴三氯化鋁試液，在365 nm紫外光燈下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖8。由此可知，供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同熒光斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。

取上述4種溶液適量，分別點(diǎn)于不同來(lái)源(青島海洋化工廠(chǎng)、上海盛亞化工有限公司)同一硅膠G薄層板上，以考察方法專(zhuān)屬性和條狀點(diǎn)樣，結(jié)果見(jiàn)圖9。

取上述4種溶液適量，分別點(diǎn)于高溫高濕、低溫低濕條件下同一硅膠G薄層板上，以考察方法耐用性，結(jié)果見(jiàn)圖10。

3.2 檢查 按2020年版《中國(guó)藥典》規(guī)定，進(jìn)行水分、裝量差異、粒度、微生物限度檢查，結(jié)果見(jiàn)表4，可知均符合相關(guān)要求。

3.3 含量測(cè)定

3.3.1 色譜條件 Thermo Scientific Syncronis C18反相色譜柱(150 mm×3.0 mm，5 μm)；流動(dòng)相乙腈(A)-水(B)，梯度洗脫，程序見(jiàn)表5；體積流量0.3 mL/min；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)217 nm；進(jìn)樣量10 μL。

表4 顆粒檢查結(jié)果

表5 梯度洗脫程序

3.3.2 對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取各對(duì)照品適量，置于量瓶中，甲醇定容，即得(含五味子醇甲10.20 μg/mL、五味子甲素4.95 μg/mL、五味子乙素6.50 μg/mL)。

3.3.3 供試品溶液 精密稱(chēng)取本品0.25 g，置于20 mL量瓶中，精密加入18 mL甲醇，超聲處理20 min，放冷，甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

3.3.4 陰性樣品溶液 按處方制備不含五味子的陰性樣品，按“3.3.3”項(xiàng)下方法制備，即得。

3.3.5 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品、供試品、陰性樣品溶液適量，在“3.3.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖11。由此可知，分離度符合要求，陰性無(wú)干擾。

3.3.6 線(xiàn)性關(guān)系考察 精密吸取“3.3.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12 μL，在“3.3.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定。以溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行回歸，結(jié)果見(jiàn)表6，可知各成分在各自范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

表6 各成分線(xiàn)性關(guān)系

3.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，于0、2、4、8、12、24 h在“3.3.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面積RSD分別為0.14%、0.06%、0.01%，表明溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.3.8 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，在“3.3.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定6次，測(cè)得五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面積RSD分別為0.86%、2.64%、1.94%，表明儀器精密度良好。

3.3.9 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取同一批本品約0.25 g，共6份，按“3.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“3.3.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面積RSD分別為1.68%、1.24%、1.39%，表明該方法重復(fù)性良好。

3.3.10 加樣回收率 取各成分含量已知的本品約0.2 g，加入對(duì)照品溶液(五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素質(zhì)量濃度分別為2.598、0.412、0.510 mg/mL)，置于50 mL量瓶中，精密加入48 mL甲醇，超聲處理20 min，放冷，甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，在“3.3.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率，見(jiàn)表7。

表7 各成分加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

3.3.11 中試產(chǎn)品含量測(cè)定 取中試產(chǎn)品3批，每批5 g，按“3.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“3.3.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量，見(jiàn)表8，可知均符合2020年版《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)。

表8 各成分含量測(cè)定結(jié)果(mg/g，n=3)

4 討論

4.1 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇 本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描時(shí)發(fā)現(xiàn)，五味子醇甲在217 nm處有較大吸收。由于五味子甲素、五味子乙素最大吸收波長(zhǎng)五味子醇甲其相差不大[17-19]，故確定兩者檢測(cè)波長(zhǎng)也為217 nm。

4.2 中試生產(chǎn) 為了保證生產(chǎn)工藝的可行性，本實(shí)驗(yàn)對(duì)參藿五味顆粒進(jìn)行3批中試生產(chǎn)，以實(shí)際成品率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察其制備生產(chǎn)工藝中各環(huán)節(jié)及參數(shù)。結(jié)果，該工藝穩(wěn)定可行，適合工業(yè)化生產(chǎn)，所制備的成品符合相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。

5 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)確定了參藿五味顆粒的制備工藝，并進(jìn)行3批中試生產(chǎn)，發(fā)現(xiàn)該工藝穩(wěn)定性良好。同時(shí)，建立了參藿五味顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)TLC法能清晰分辨出各藥材特征斑點(diǎn)，而HPLC法簡(jiǎn)便快速，重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可為今后該制劑工業(yè)化生產(chǎn)及保健食品申報(bào)提供理論依據(jù)。