淋必通顆粒對慢性非細菌性前列腺炎大鼠的影響

劉 瑾， 楊宗統， 袁 敏， 梁瑞雪

(山東省中醫藥研究院，山東 濟南 250014)

慢性前列腺炎是男科常見病，患者以成年男性為主[1]，約50%男性在一生中的某個階段會受前列腺炎的困擾[2]，其中慢性非細菌性前列腺炎約占90%～95%[3]，且呈逐年上升趨勢[4-5]。慢性前列腺炎臨床癥狀復雜多變且缺乏特異性，導致病情纏綿難愈、病程遷延，從而成為男性難治疾病之一。目前西醫治療慢性前列腺炎尚缺乏特異性的治療藥物和方法，多以抗生素[6-7]、α受體阻滯劑[8-9]和非甾體抗炎藥[10-11]為主，臨床療效并不理想。中醫藥治療慢性前列腺炎具有明顯的優勢，其在改善臨床癥狀、消退局部炎癥等方面優于西醫治療。

淋必通顆粒是臨床應用多年的經驗方，由蒲公英、苦地丁、金錢草、石韋、綿萆薢、王不留行、益母草、皂角刺、牛膝組成，具有清熱利濕、散結通淋之功效，臨床用于治療慢性非細菌性前列腺炎效果顯著。本課題組前期研究表明，淋必通顆粒對角叉菜膠所致大鼠慢性前列腺炎有較好的治療作用[12]，為了進一步探討淋必通顆粒對慢性前列腺炎的治療效果，本實驗采用大鼠前列腺內注射消痔靈注射液的方法建立動物模型，觀察不同劑量淋必通顆粒對大鼠前列腺組織病理形態學及IL-6、IL-10水平影響，初步探討其治療慢性非細菌性前列腺炎的作用機制，以期為其臨床應用提供實驗依據。

1 材料

1.1 試劑與藥物 淋必通顆粒(本院中藥制劑室自制，批號20190529)；普樂安片(陽性對照，云南白藥集團股份有限公司，批號ZAC1910)；消痔靈注射液(吉林省集安益盛藥業股份有限公司，批號18031806，臨用時以生理鹽水配制)。戊巴比妥鈉(國藥集團化學試劑上海有限公司，批號05-01-02)；0.9%氯化鈉注射液(山東華魯制藥有限公司，規格250 mL，批號SA19112010)；甲醛(天津市大茂化學試劑廠，批號20191205)。IL-6、IL-10 ELISA試劑盒(杭州聯科生物技術股份有限公司，批號A306H91234、A310H91124)。

1.2 動物 健康雄性Wistar大鼠64只，SPF級，體質量(200±20)g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，實驗動物生產許可證號SCXK(京)2016-0011。

1.3 儀器 X-30R全能高速冷凍離心機(美國Beckman公司)；FA1204B電子天平(上海精科天美科學儀器有限公司)；xMark酶標儀(美國Bio-Rad公司)；RM2235病理石蠟切片機(德國Leica公司)；Excelsior AS病理全自動組織脫水機、CTM6全自動封片機、Gemini AS全自動染色機、Histostar包埋機、PrintMate 150包埋盒打號機、SlideMate玻片打號機(美國Thermo Fisher公司)；生物組織攤烤片機(孝感市亞光醫用電子技術有限公司)；CX31生物顯微鏡、DP27顯微鏡專用數碼相機、cellSens v 1.18成像分析系統(日本Olympus公司)。

2 方法

2.1 模型制備 參考《藥理實驗方法學》進行操作[13]。大鼠適應性飼養7 d，禁食不禁水12 h后稱定體質量，根據體質量隨機選取12只作為假手術組，剩余52只用于造模。大鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)進行麻醉，碘伏和酒精對腹部皮膚進行消毒，沿腹中線切口，剪開皮膚直達腹腔，提出膀胱及兩側精囊，暴露出前列腺背側葉，注入25%消痔靈注射液0.2 mL，每側0.1 mL，將精囊及膀胱送回原位置，縫合腹壁肌肉、皮膚；假手術組于同樣部位注射0.9%氯化鈉注射液0.2 mL。術后第7天，隨機選取造模組、假手術組大鼠各2只進行病理切片，若造模組前列腺間質高度充血、水腫、呈疏松網狀，纖維細胞增生，有多量中性粒細胞浸潤等病理變化，表明造模成功。

2.2 分組與給藥 造模成功后，將造模組大鼠隨機分為模型組、普樂安片組及淋必通顆粒低、中、高劑量組，每組10只，淋必通顆粒各劑量組灌胃給予含藥混懸液10 mL/kg(分別相當于2.7、5.4、10.8 g/kg藥物)，普樂安片組灌胃給予含藥混懸液10 mL/kg(相當于1.08 g/kg生藥)，假手術組、模型組灌胃給予蒸餾水10 mL/kg，每天1次，連續30 d。

2.3 前列腺指數檢測 連續給藥30 d后，大鼠禁食不禁水12 h，稱定體質量，解剖取前列腺組織，生理鹽水沖洗，濾紙吸取多余水分，電子天平稱定濕質量，計算前列腺指數[14-15]，公式為前列腺指數=(前列腺濕質量/大鼠體質量)×100%，腫脹率=[(造模組大鼠前列腺指數-假手術組大鼠前列腺指數)/假手術組大鼠前列腺指數]×100%，腫脹抑制率=[(模型組腫脹率-用藥組腫脹率)/模型組腫脹率]×100%。

2.4 前列腺組織IL-6、IL-10水平檢測 取大鼠左側前列腺組織，稱定質量，加入2倍生理鹽水進行勻漿，靜置，3 000 r/min離心15 min，取上清，采用ELISA法檢測前列腺組織勻漿液中IL-6、IL-10水平。

2.5 前列腺組織形態學觀察 取大鼠右側前列腺組織，置于10%甲醛中固定，常規脫水，石蠟包埋、切片，蘇木精-伊紅(HE)染色，光鏡下觀察其形態學變化，按照病變程度分為3個等級進行定量評價，對各項病理變化評分，計算總和作為整體評分，評分標準[16]為(1)腺體形態，腺上皮單層細胞結構完整，排列整齊，細胞呈柱狀、立方形，腺體上皮向管腔內折疊形成皺襞，計為2分；腺上皮輕度增生，有損傷，腺體上皮皺襞減少，計為4分；腺上皮受損變形嚴重，腺上皮皺襞減少或無，計為6分；(2)炎癥表現情況及炎性細胞浸潤程度，腺腔偶見炎性細胞，計為2分；腺腔中度炎性細胞浸潤，計為4分；腺腔充滿炎性細胞，伴有充血現象，計為6分；(3)纖維組織增生程度，極少纖維組織增生，計為2分；纖維組織增生程度較輕，計為4分；腺體周圍有大量纖維組織增生，包被腺體，計為6分。

3 結果

3.1 淋必通顆粒對大鼠體質量、前列腺濕質量、前列腺指數的影響 各組大鼠體質量比較，差異無統計學意義(P>0.05)，表明造模和給藥對大鼠體質量增長無明顯影響。與假手術組比較，模型組大鼠前列腺濕質量、前列腺指數升高(P<0.01)，表明造模成功；與模型組比較，淋必通顆粒中、高劑量組和普樂安片組大鼠前列腺濕質量、前列腺指數、前列腺腫脹率降低(P<0.05)，呈劑量依賴性，見表1。

表1 淋必通顆粒對大鼠前列腺指數的影響

3.2 淋必通顆粒對大鼠前列腺組織IL-6、IL-10水平的影響 與假手術組比較，模型組大鼠前列腺組織IL-6水平升高(P<0.01)，IL-10水平降低(P<0.01)，表明造模成功；與模型組比較，淋必通顆粒中、高劑量組和普樂安片組大鼠前列腺組織IL-6水平降低(P<0.05，P<0.01)，淋必通顆粒高劑量組和普樂安片組IL-10水平升高(P<0.05)，見表2。

表2 淋必通顆粒對大鼠前列腺組織IL-6、IL-10水平的影響

3.3 淋必通顆粒對大鼠前列腺組織形態學變化的影響 造模第7天，造模組大鼠前列腺間質高度充血、水腫、呈疏松網狀，有較多中性粒細胞浸潤，腺上皮細胞增生等病理變化；假手術組大鼠腺體松散分布、形態正常，腺腔大小均勻、量少、寬窄不一，間質疏松未見炎癥細胞浸潤和纖維組織增生，表明造模成功，見圖1。

連續給藥30 d后，假手術組大鼠前列腺腺體形態正常，腺腔大小均勻，間質未見炎癥細胞浸潤和纖維組織增生；與假手術組比較，模型組大鼠前列腺部分腺腔閉鎖呈實體狀，腺上皮增生、受損嚴重(P<0.01)，腺腔內分泌物減少甚至消失，腺腔內可見嚴重炎癥細胞浸潤(P<0.01)，間質水腫增寬，纖維組織增生明顯(P<0.01)；與模型組比較，普樂安片組和淋必通顆粒高劑量組大鼠腺體變形明顯改善，腺上皮受損變形較輕，腺上皮皺襞增多，腺體形態正常(P<0.01)，前列腺腺腔擴大，腺腔內分泌物增多，炎癥細胞浸潤減少(P<0.01)，纖維組織增生得到較好改善(P<0.01)；淋必通顆粒中、低劑量組大鼠腺腔部分恢復正常，部分腺腔內分泌物增多，炎癥細胞浸潤有一定減輕，纖維組織增生也有一定程度緩解，但差異無統計學意義(P>0.05)，見圖2、表3。

4 討論

慢性前列腺炎是男科常見病，其發病機制尚未完全明確，目前多數學者認為慢性前列腺炎是由免疫炎癥細胞及細胞因子介導的局部免疫炎癥反應，導致前列腺局部免疫功能異常增強[17]。IL-6為促炎性細胞因子，可促進趨化因子、環氧合酶-2、細胞間粘附分子的釋放，對局部組織造成損傷并引起疼痛，是慢性前列腺炎臨床癥狀的重要發生機制之一[18]。甘進等[19]研究表明IL-6水平在慢性前列腺炎患者精液中升高，并且和慢性前列腺炎癥狀指數癥狀評分呈正相關性，推測可能參與患者疼痛癥狀的產生。IL-10是抗炎性細胞因子，可抑制Th0細胞向Th1細胞的轉化，對炎癥細胞遷移和致炎細胞因子產生起到抑制效應，發揮了較強的抗炎及免疫抑制活性[20]。

表3 淋必通顆粒對大鼠前列腺組織間質增生和腺體形態的影響

本實驗結果顯示，與假手術組比較，模型組大鼠前列腺組織勻漿中IL-6水平升高，IL-10水平降低，表明慢性前列腺炎模型大鼠存在前列腺局部的免疫功能紊亂。與模型組比較，中、高劑量淋必通顆粒可以降低慢性前列腺炎模型大鼠前列腺組織IL-6水平，高劑量淋必通顆粒可以有效提高慢性前列腺炎模型大鼠前列腺組織IL-10水平，表明淋必通顆粒可以有效升高抗炎性細胞因子IL-10水平，抑制促炎性細胞IL-6的釋放，緩解慢性前列腺炎模型大鼠前列腺局部的炎癥反應。大鼠前列腺組織病理形態學觀察也顯示，淋必通顆粒中、低劑量組炎癥細胞浸潤有一定減輕，纖維組織增生也有一定程度緩解；淋必通顆粒高劑量組炎癥細胞浸潤減少，纖維組織增生得到明顯改善，說明淋必通顆粒可以改善消痔靈注射液所致大鼠前列腺組織病理形態學改變，減輕前列腺組織局部的炎癥反應。本結果為臨床應用淋必通顆粒治療慢性前列腺炎提供了實驗依據，但淋必通顆粒多靶點、多途徑治療慢性前列腺炎的作用機制還需要進一步探討。