ELISA法與TRUST法檢測梅毒螺旋體感染的作用

陳昱文，謝歡

1.廣東省梅州市疾病預防控制中心 微生物檢驗科，廣東 梅州 514071；2.嘉應學院醫學院附屬醫院 檢驗科，廣東 梅州 514000

0 引言

梅毒屬于臨床常見的一種性傳染病，其傳染性較強，存在較大危害性，是由梅毒螺旋體感染導致的，在我國各個地區的乙類傳染病中其發病率都比較靠前，有些地區的發病率甚至已經超過乙肝、肺結核等疾病，嚴重影響人們的身體健康以及生命安全[1]。因此，需及時診治梅毒。臨床梅毒診斷的實驗室方法常用血清學檢測，主要通過TRUST法（甲苯胺紅不加熱血清試驗）對梅毒螺旋體進行檢驗，以往被稱作梅毒檢驗的金標準，但該方法檢驗易出現假陽性結果[2]。ELISA法（酶聯免疫吸附試驗法）是通過固相載體同可溶性抗原結合，按照抗原抗體結合專一性原則開展檢驗，在臨床中應用效果比較好[3]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經本院倫理會批準，選擇2018年1月-2020年12月間廣東省梅州市疾病預防控制中心的3270份血液標本，患者年齡18～61歲，平均（40.35±4.62）歲；男1850例，女1420例；172例患者確診梅毒，58例是一期患者，62例是二期患者，52例是三期患者。納入標準：生殖器周圍有丘疹患者斑塊存在的患者；觸診時發現腹股溝處淋巴結明顯腫大的患者；自愿參與本研究，且簽署知情同意書的患者。排除標準：合并其他內分泌疾病、血液系統疾病的患者；合并其他腫瘤的患者。

1.2 方法

TRUST法：3～5mL的血液標本，分離得到血清，嚴格按試劑盒說明進行操作。ELISA法：3～5mL的血液標本，分離得到血清，嚴格按試劑盒說明進行操作。

1.3 觀察指標

樣品OD值S/CO≥1是梅毒抗體陽性；＜1是梅毒抗體陰性[4]。以梅毒螺旋體明膠凝集檢測結果當作金標準，分析酶聯免疫吸附法以及TRUST法的檢測結果。準確度=[（真陰性+真陽性）份數/總份數]×100.0%；敏感度=真陽性/陽性×100.0%；特異度=真陰性/陰性×100.0%；陽性預期值=真陽性/診斷的陽性結果×100.0%；陰性預期值=真陰性/診斷的陰性結果×100.0%。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 總結ELISA法的診斷結果

在本課題的3270份血液標本中，172份標本確診陽性，3098份標本確診陰性。經ELISA法檢驗出171份陽性、3099份陰性，見表1。

表1 總結ELISA 法的診斷結果

2.2 總結TRUST法的診斷結果

在本課題的3270份血液標本中，經TRUST法檢驗出156份陽性、3114份陰性，見表2。

表2 總結TRUST 法的診斷結果

2.3 兩種方法診斷效能對比

在梅毒螺旋體感染診斷中，ELISA法和TRUST法的特異度、陽性預測值差異不顯著（P＞0.05）；ELISA法的準確度、敏感度、陰性預測值高于TRUST法（P＜0.05），見表3。

表3 兩種方法診斷效能對比

3 討論

梅毒是梅毒螺旋體感染導致的一種系統性、慢性性傳播疾病，在全世界都比較流行。目前，我國梅毒在迅速增長，是報告病例數最多的一種性病。在我國所報告梅毒病例中，大都是潛伏梅毒，一期、二期梅毒也比較常見。梅毒屬于人類獨有的一種疾病，其傳染源是顯性梅毒患者以及隱性梅毒患者，梅毒患者的皮損、分泌物以及血液中都含梅毒螺旋體，機體感染梅毒螺旋體后頭兩年傳染性最高，四年后經性傳播的風險明顯下降[5]。而且，梅毒螺旋體能夠通過胎盤傳染給胎兒，導致胎兒宮內感染，可致使早產、流產、死胎以及分娩胎傳梅毒兒。通常情況下，孕婦梅毒的病期越早，傳染給胎兒的風險就越高。

梅毒患者的表現：

（1）獲得性隱性梅毒：人們后天感染梅毒螺旋體后沒有顯性梅毒形成而無癥狀，抑或顯性梅毒活動期后患者癥狀暫時消退，腦脊液檢查正常、梅毒血清試驗陽性，是隱性梅毒。

（2）妊娠梅毒：孕期顯性梅毒或者隱性梅毒，由于孕婦小動脈炎致使胎盤組織壞死，而發生流產、早產以及死胎等，且梅毒螺旋體可經臍靜脈或者胎盤傳給胎兒，分娩出胎傳梅毒兒，只有少數的孕婦才可分娩出健康兒。

（3）先天性顯性梅毒：①早期，新生兒出生時比較瘦小，約3周出現癥狀，患兒全身淋巴結腫大，大都發生梅毒性鼻炎。約6周有皮膚損害出現，斑丘疹、水皰-大皰型皮損、丘疹鱗屑性損害，大都肝腫大、脾腫大，骨膜炎、骨軟骨炎，貧血、血小板減少。②晚期，2歲以后發生，一種是早期病變導致的眼、骨、神經、齒、皮膚等永久性的損害，沒有活動性；另一種是仍存在活動性損害，出現神經性耳聾、角膜炎、神經系統表現異常、肝脾腫大、腦脊液變化、關節積水、鼻或顎樹膠腫、指炎、皮膚黏膜損害、骨膜炎等。

（4）先天潛伏梅毒：分娩于梅毒孕婦，未治療，沒有臨床表現，但是梅毒血清反應呈陽性。

（5）獲得性顯性梅毒：①一期梅毒，臨床特征主要是硬下疳，大都單發、橢圓形或者圓形、無痛無癢、邊界清晰的潰瘍；②二期梅毒，主要特征是二期梅毒疹，出現全身癥狀，通常是硬下疳消退后的一段無癥狀期后再發生。梅毒螺旋體隨血液循環，導致多部位損害以及多樣病灶，對皮膚、骨骼、黏膜、心血管、內臟、神經系統等造成侵犯。二期梅毒患者的梅毒血清學試驗陽性率很高，幾乎是100%。皮疹出現前出現全身癥狀，頭痛、發熱、肝脾腫大、骨關節酸痛、淋巴結腫大，3～5d好轉，之后有梅毒疹出現。二期梅毒主要表現是皮膚梅毒疹（疹型多樣、反復發生、不痛不癢、廣泛、對稱、愈后大都不留瘢痕，且經驅梅治療后會迅速消退）、復發性梅毒疹（主要是環狀丘疹）、黏膜損害（在口唇、咽喉、扁桃體發生，黏膜炎或者黏膜斑，灰白膜或者有滲出物，黏膜紅腫）、骨關節損害（骨炎、骨膜炎、關節炎、骨髓炎，伴有疼痛）、梅毒性脫發（大都是稀疏性，邊界不清，少數彌漫樣）、二期神經梅毒（大都沒有明顯癥狀）、二期眼梅毒（虹膜睫狀體炎、梅毒性虹膜炎、視網膜炎、脈絡膜炎）、全身淺表淋巴結腫大、腦脊液異常[6]；③三期梅毒，皮膚黏膜損害，頭皮、背部、肩胛、四肢兩側等易發結節性梅毒疹，小腿部易發樹膠樣腫，形成深潰瘍，上額部組織穿孔、壞死，鼻中隔者骨質破壞，馬鞍鼻形成，陰道潰瘍，膀胱陰道漏或者直腸陰道漏形成，舌部穿鑿性潰瘍。心血管梅毒，侵犯主動脈弓部位，導致主動脈瓣閉鎖不全，發生梅毒性心臟病。近關節結節，皮下纖維結節，大小不等、對稱、不活動、質硬、不破潰、無炎癥、無痛、表皮正常、可自消。神經梅毒可無癥狀，也可出現腦血管梅毒、梅毒性腦膜炎、麻痹性癡呆、腦膜樹膠樣腫。

臨床尚未明確梅毒致病機制，但可以確定的是梅毒的傳染性較強，發生梅毒螺旋體感染后，會對患者生活產生影響，且帶給患者心理困擾和生理困擾，倘若是晚期梅毒，就存在致死的可能[7]。所以，要盡早檢出梅毒螺旋體感染，確保盡早給予患者針對性治療。

臨床可通過多種方法對梅毒進行診斷：①孕產婦梅毒感染史、不安全性接觸史、輸注血液史；②存在各期梅毒相應表現，但潛伏梅毒沒有明顯的表現；③暗視野顯微鏡檢查，取濕丘疹、硬下疳以及扁平濕疣等可疑皮損，在暗視野下經顯微鏡進行檢查，發現可運動的梅毒螺旋體就可確診；血清學試驗，所用抗原可分成非螺旋體抗原以及梅毒螺旋體特異性抗原，梅毒螺旋體特異性抗原有TPPA（梅毒螺旋體顆粒凝集試驗）、TP-ELISA（梅毒螺旋體酶聯免疫吸附試驗）等，具有較強的特異性強，可對梅毒螺旋體感染進行確診。非螺旋體抗原有TRUST、RPR（快速血漿反應素環狀卡片試驗）等，能夠做定量試驗，可對療效判斷、對病情的活動程度判斷；梅毒螺旋體免疫球蛋白M抗體檢測，在機體感染梅毒后，免疫球蛋白M抗體最先出現，隨疾病的發展，隨后出現免疫球蛋白G抗體，在有效治療后機體的免疫球蛋白M抗體消失，而繼續存在免疫球蛋白G抗體，梅毒螺旋體免疫球蛋白M抗體無法通過胎盤，當嬰兒的梅毒螺旋體免疫球蛋白M抗體呈陽性就說明嬰兒梅毒螺旋體感染，所以，梅毒螺旋體免疫球蛋白M抗體對于嬰兒胎傳梅毒存在重要的診斷意義；腦脊液檢查，對于出現了神經癥狀的梅毒患者來說，或者經驅梅治療無效的患者來說，應進行腦脊液檢查，對于神經梅毒的診治、預后判斷等存在幫助作用，主要檢查項目是總蛋白測定、細胞計數、快速血漿反應素環狀卡片試驗，以及梅毒螺旋體顆粒凝集試驗等[8]。其中，最常用的是梅毒血清學試驗。

TRUST屬于一種非梅毒螺旋體抗原血清試驗，在梅毒篩選以及療效觀察中比較適用。但有一些研究發現，TRUST法所使用的抗原沒有特異性，所以，除了梅毒螺旋體感染患者之外，也有部分非梅毒患者也長期的或者暫時的存在反應素，比如麻風病、傳染性單核細胞增多癥、結核病、類風濕性關節炎、紅斑狼瘡、一些發熱性疾病等[9]。同時，對于孕婦、吸毒者以及老年人來說，也可能出現生物學假陽性。基于此，臨床越來越少通過TRUST對梅毒螺旋體感染進行診斷。

隨現代醫學技術不斷發展，早期梅毒螺旋體感染診斷的正確率在不斷提高，ELISA法是應用最廣的一種酶免疫測定技術，是將已知的抗體或者抗原在固相載體的表面吸附，經酶標記抗原抗體在固相表面發生反應，通過洗滌法對液相中游離成分進行洗除。所以，可通過底物顏色反應對有無相應免疫反應進行判斷[10]。但是需要注意：顏色反應深淺同標本抗體或者抗原量成正比，也就是說標本抗體或者抗原量越高則顏色反應越深，反之亦然。

ELISA法是將酶化學反應敏感性以及抗原抗體反應特異性結合，從而成為既敏感又特異的一種檢測方法。同時，ELISA法不需特殊設備、操作簡單、能夠普及等優勢，在梅毒螺旋體感染診斷中應用價值很高。不過，在ELISA法的實際應用中，其檢驗結果會受到操作人員工作素質、標本處理等影響，可能出現一定的假陰性以及假陽性結果，

綜上所述，通過ELISA法對梅毒螺旋體感染進行診斷可得到較好的應用效果。