慢性乙型肝炎患者HBV-DNA載量、免疫球蛋白與肝纖維化相關(guān)性分析

吳丹

廣東省東莞市中醫(yī)院 檢驗科，廣東 東莞 523000

0 引言

肝纖維化指在慢性肝臟疾病中，由肝細(xì)胞反復(fù)損傷破壞引起的機(jī)體慢性修復(fù)過程，其病理改變主要表現(xiàn)為以膠原纖維為主的細(xì)胞外基質(zhì)過度增生并沉積于匯管區(qū)及肝小葉內(nèi)，可進(jìn)一步發(fā)展并逐漸演變?yōu)楦斡不痆1]。在我國人群中，慢性乙型肝炎是導(dǎo)致肝組織破壞并進(jìn)展為肝纖維化乃至肝硬化的最常見原因[2]。目前臨床多以肝臟穿刺活檢結(jié)果作為評價肝纖維化程度金標(biāo)準(zhǔn)，但其創(chuàng)傷性使其應(yīng)用價值受到影響，而在無創(chuàng)性評估中，透明質(zhì)酸酶（HA）、層粘連蛋白（LN）等肝纖維化四項檢查可良好反映肝纖維化進(jìn)展[3]，此外，有研究提出慢性乙肝患者乙肝病毒脫氧核糖核酸（HBV-DNA）載量及血清免疫球蛋白（Ig）水平可能與肝臟病變進(jìn)展有關(guān)[4]，但兩者與肝纖維化程度的關(guān)系目前尚無統(tǒng)一定論，因此本研究針對慢性乙肝患者進(jìn)行上述指標(biāo)檢測，以分析其與肝纖維化的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入本院2018年1月-2021年5月診治的60例慢性乙肝患者作為觀察組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①病程在6個月以上，符合慢性乙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)者[5]；②既往未進(jìn)行抗病毒或抗纖維化等治療者；③年齡18～70周歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肝細(xì)胞癌者；②藥物、乙醇、寄生蟲等其他原因引起肝臟損傷者；③其他肝炎病毒所致肝炎。另選取同期院內(nèi)體檢健康者30例作為對照組。觀察組男36例，女24例；年齡23～68歲，平均（44.28±10.36）歲。對照組男17例，女13例；年齡25～67歲，平均（45.81±9.64）歲。兩組一般資料對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。本研究已通過醫(yī)學(xué)倫理委員會審批，并獲取受試者知情同意。

1.2 方法

（1）進(jìn)行HBV-DNA檢測。采用圣湘生物試劑盒檢測，血清樣本的采集：用無菌注射器抽取患者靜脈血2mL，注入無菌收集管，以1600rpm離心5min，隨后分離血清置于滅菌離心管備用。樣本處理：（陰性對照、陽性對照、定量參考品與待測樣本同步處理）每個PCR反應(yīng)管中加入HBV-核酸釋放劑5μL（深吸淺打避免出現(xiàn)氣泡），隨后加入待檢樣本、陰性對照、陽性對照以及定量參考品各5μL，吸打3～5次混勻后放置10min以上，每管加入PCR混合液40μL，采用ABI7500熒光定量PCR儀行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后自動保存結(jié)果，根據(jù)分析后圖像記錄定量結(jié)果。入組患者根據(jù)檢測結(jié)果分為低載量組（HBV-DNA載量＜1000IU/mL，33例）及高載量組（HBV-DNA載量≥1000IU/mL，27例）。

（2）進(jìn)行血清Ig檢測。取患者部分血液樣本，置于離心機(jī)中以3000rpm速度離心5min，取上層清液以上海科華免疫比濁法試劑盒檢測血清IgG、IgA、IgM水平，選擇貝克曼AU5800全自動生化分析儀及配套檢測試劑盒，嚴(yán)格參照使用說明進(jìn)行試劑配置，隨后將待檢樣本置于生化分析儀檢測。

（3）進(jìn)行肝纖維化血清標(biāo)志物檢測。采用iFlash3000化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，以亞輝龍化學(xué)發(fā)光法試劑盒檢測患者血清Ⅲ型前膠原（PCⅢ）、Ⅳ型膠原（CⅣ）、LN、HA。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

檢測數(shù)據(jù)均采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，其中計量指標(biāo)表示為（），行t檢驗，計數(shù)指標(biāo)表示為例（%），行χ2檢驗，以Spearman檢驗進(jìn)行相關(guān)性分析，P＜0.05為對比差異存在統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Ig與肝纖維化血清標(biāo)志物結(jié)果對比

觀察組IgG、IgA、IgM水平及PCⅢ、CⅣ、LN、HA均明顯高于對照組（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組Ig 與肝纖維化血清標(biāo)志物結(jié)果對比（）

表1 兩組Ig 與肝纖維化血清標(biāo)志物結(jié)果對比（）

2.2 不同HBV-DNA載量患者肝纖維化血清標(biāo)志物對比

高載量組PCⅢ、CⅣ、LN、HA水平均明顯高于低載量組（P＜0.05）。見表2。

表2 不同HBV-DNA 載量患者肝纖維化血清標(biāo)志物對比（）

表2 不同HBV-DNA 載量患者肝纖維化血清標(biāo)志物對比（）

2.3 HBV-DNA載量、Ig與肝纖維化相關(guān)性分析

HBV-DNA 載量、IgG、IgA、IgM 水平均與P CⅢ、CⅣ、LN、HA 存在明顯正相關(guān)（P＜0.05）。見表3。

表3 HBV-DNA 載量、Ig 與肝纖維化相關(guān)性分析

3 討論

肝纖維化可由病毒性肝炎、酒精性肝病、寄生蟲感染等多種疾病引起，其病理基礎(chǔ)在于長期肝細(xì)胞損傷導(dǎo)致以膠原纖維、糖蛋白等成分為主的細(xì)胞外基質(zhì)增生，有較多研究顯示PCⅢ、CⅣ、LN、HA與肝臟損傷及纖維化進(jìn)程存在密切聯(lián)系[7]，可作為反映肝纖維化情況的潛在評估指標(biāo)，同時也應(yīng)繼續(xù)探索更多無創(chuàng)檢測手段以提高肝纖維化評估準(zhǔn)確性，及時防止疾病進(jìn)展。

慢性乙肝屬免疫介導(dǎo)性肝臟損傷，患者在感染HBV后可經(jīng)歷病毒耐受期、病毒消除期及靜止期[8]，病毒耐受期HBV處于大量復(fù)制增殖階段，導(dǎo)致HBV-DNA水平持續(xù)增高，但該時期幾乎不引起機(jī)體免疫應(yīng)答，肝組織受損較小，肝功能大多正常[9]，而隨著病情進(jìn)一步發(fā)展，大量HBV可激活機(jī)體非特異性免疫并引起肝細(xì)胞進(jìn)行性損傷壞死，進(jìn)而激活肝星狀細(xì)胞，產(chǎn)生大量膠原、蛋白多糖等基質(zhì)成分并沉積于肝小葉內(nèi)，促使肝纖維化發(fā)生，而HA作為蛋白多糖主要成分，細(xì)胞外基質(zhì)大量沉積可使血清HA水平明顯增高，PCⅢ、CⅣ及LN可反映基質(zhì)膠原纖維合成情況，與肝纖維化進(jìn)展密切相關(guān)。HBV的大量增殖可引起DNA抗原載量明顯升高，同時引發(fā)肝細(xì)胞免疫損傷，進(jìn)而導(dǎo)致PCⅢ、CⅣ、LN、HA等肝纖維化血清指標(biāo)明顯上升[10]。羅艷[11]研究指出，慢性乙肝患者PCⅢ、CⅣ、LN、HA等指標(biāo)水平在不同HBV-DNA載量分組中存在明顯差異，與上述機(jī)制相符。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高HBV-DNA載量組PCⅢ、CⅣ、LN、HA水平均明顯高于低載量組（P＜0.05），且相關(guān)性分析結(jié)果顯示HBVDNA載量與上述肝纖維化血清指標(biāo)水平存在明顯正相關(guān)，提示慢性乙肝患者HBV-DNA載量可隨肝纖維化程度不斷加重而逐漸升高。

據(jù)研究顯示，慢性乙肝患者多發(fā)生體液免疫紊亂，導(dǎo)致血清Ig水平上升[12]，其機(jī)制仍未明確，有學(xué)者指出，HBV可暴露干細(xì)胞表面特異性脂蛋白[13]，后者可作為抗原激活免疫應(yīng)答，進(jìn)而導(dǎo)致自身抗體形成，促使肝細(xì)胞損傷，此外隨著肝組織纖維化不斷加重，肝功能逐漸降低，可致庫普弗（Kupffer）細(xì)胞活性異常，使其對抗原及細(xì)胞碎片等物質(zhì)清除作用減弱[14]，可進(jìn)一步導(dǎo)致血清Ig升高。既往研究顯示血清Ig可良好反映肝臟炎癥活動水平及纖維化程度[15]，其機(jī)制在于血清Ig水平升高可促進(jìn)自然殺傷細(xì)胞對肝細(xì)胞介導(dǎo)的促凋亡作用，進(jìn)而導(dǎo)致肝細(xì)胞進(jìn)一步損傷，且可刺激肝組織間質(zhì)細(xì)胞，使其分泌PCⅢ、CⅣ、LN、HA增多，從而促進(jìn)肝纖維化進(jìn)程，本研究發(fā)現(xiàn)觀察組IgG、IgA、IgM水平及PCⅢ、CⅣ、LN、HA均明顯高于對照組（P＜0.05），且IgG、IgA、IgM均與上述肝纖維化血清標(biāo)志物存在明顯正相關(guān)，證明慢性乙肝患者Ig水平與肝纖維化存在密切聯(lián)系，可作為反映肝纖維化情況的良好指標(biāo)。

綜上所述，慢性乙肝患者HBV-DNA載量及血清Ig水平與肝纖維化血清標(biāo)志物具有明顯相關(guān)性，對上述指標(biāo)進(jìn)行檢測可有效評估患者肝纖維化程度，進(jìn)而指導(dǎo)臨床治療。