檸檬酸對(duì)草魚腸道組織形態(tài)的影響

王思樂(lè)

(濰坊市高崖水庫(kù)運(yùn)營(yíng)維護(hù)中心，山東濰坊 262402)

檸檬酸(Citric acid，2-羥基-均丙三羧酸，C6H8O7)作為有機(jī)酸的一種，具有高效、低殘留、無(wú)耐藥等特點(diǎn)，在畜禽養(yǎng)殖生產(chǎn)中可以替代抗生素的使用[1-3]。動(dòng)物養(yǎng)殖生產(chǎn)中使用檸檬酸可以通過(guò)促進(jìn)機(jī)體對(duì)飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，而提高生長(zhǎng)性能。在肉兔的生產(chǎn)中使用適量的檸檬酸與酶制劑聯(lián)合使用，可以有效提高肉兔機(jī)體的免疫功能，降低腹瀉率，改善生長(zhǎng)性能[4]。在犢牛養(yǎng)殖中使用1.0g/d～1.5g/d的檸檬酸可以提高犢牛的采食量，提高養(yǎng)分表觀消化率[5]。郭春蘋[6]研究發(fā)現(xiàn)，在鯉魚生產(chǎn)中添加使用適量的檸檬酸可以提高其生長(zhǎng)性能，且檸檬酸的最適添加量為0.2%。在異育銀鯽和草魚養(yǎng)殖生產(chǎn)中，使用適量的檸檬酸可以顯著促進(jìn)機(jī)體對(duì)餌料中養(yǎng)分的消化吸收，進(jìn)而促進(jìn)其生長(zhǎng)發(fā)育[7-8]。目前，關(guān)于檸檬酸對(duì)動(dòng)物的影響研究主要集中在動(dòng)物生長(zhǎng)性能方面，在腸道形態(tài)及消化酶方面的研究較少，尤其在水產(chǎn)動(dòng)物方面的研究甚少。因此，該試驗(yàn)以草魚(Ctenopharyngodonidella)為研究對(duì)象，探討不同劑量的檸檬酸對(duì)其腸道形態(tài)及消化酶活性的影響，并確定檸檬酸在草魚養(yǎng)殖中的最適添加量，為檸檬酸在水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖中的高效利用提供參考意見(jiàn)。

1 材料和方法

1.1 檸檬酸

該試驗(yàn)中使用的檸檬酸購(gòu)自當(dāng)?shù)卦鲜袌?chǎng)，其有效純度大于99%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選擇健康、體況較好、體重?zé)o顯著性差異的草魚320尾，隨機(jī)分成4組，每組80尾草魚。對(duì)照組草魚飼喂基礎(chǔ)飼料，試驗(yàn)1組草魚飼喂基礎(chǔ)飼料+0.2%的檸檬酸，試驗(yàn)2組草魚飼喂基礎(chǔ)飼料+0.4%的檸檬酸，試驗(yàn)3組草魚飼喂基礎(chǔ)飼料+0.6%的檸檬酸。試驗(yàn)周期為60d。試驗(yàn)結(jié)束后，采集各組草魚的腸道，檢測(cè)腸道形態(tài)及消化酶的活性。試驗(yàn)草魚基礎(chǔ)飼料配方見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)草魚基礎(chǔ)飼料配方 %

1.3 養(yǎng)殖管理

草魚在網(wǎng)箱中進(jìn)行試驗(yàn)，正式試驗(yàn)開始前7d進(jìn)行馴化，使草魚適應(yīng)養(yǎng)殖環(huán)境。每日草魚被飼喂3次，分別在7:30、12:00、17:00各投喂一次，每日的投喂量約為草魚體重的3.5%。養(yǎng)殖期間持續(xù)供氧，每4d～5d換水一次，每次換水量約為1/3。試驗(yàn)期間，嚴(yán)格檢測(cè)水質(zhì)環(huán)境，pH值約為7.6，水溫約為28℃，氨氮濃度小于0.1mg/L，溶解氧大于5mg/L。

1.4 測(cè)定項(xiàng)目和方法

從每組中選擇8尾草魚麻醉后解剖，分離腸道，排空食糜，取1.5cm的前腸，采用生理鹽水沖洗干凈，-80℃冷凍保存，用于腸道形態(tài)及消化酶活性的檢測(cè)。

草魚腸道組織使用乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片，染色，封片后，使用光學(xué)顯微鏡拍照，檢測(cè)絨毛高度、絨毛寬度及肌層厚度等形態(tài)指標(biāo)。

將草魚腸道解凍后，加入4倍劑量的生理鹽水進(jìn)行勻漿，取上清液檢測(cè)蛋白酶活性和淀粉酶活性，參考試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。試劑盒由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。

1.5 數(shù)據(jù)分析

各組草魚的腸道形態(tài)及消化酶數(shù)據(jù)，使用SPSS25進(jìn)行分析，采用單因素方差和LSD分析顯著性，數(shù)據(jù)結(jié)果以平均值表示，P<0.05表示數(shù)據(jù)差異顯著。

2 試驗(yàn)結(jié)果

不同劑量的檸檬酸對(duì)草魚腸道形態(tài)及消化酶活性的影響見(jiàn)表2，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組草魚腸道淀粉酶活性和蛋白酶活性顯著提高(P<0.05)。試驗(yàn)組草魚腸道絨毛高度顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，且試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組顯著高于試驗(yàn)1組(P<0.05)；試驗(yàn)組草魚腸道肌層厚度均高于對(duì)照組(P<0.05)，但試驗(yàn)組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

表2 不同劑量的檸檬酸對(duì)草魚腸道形態(tài)及消化酶活性的影響

3 討論

腸道的絨毛高度、肌層厚度及消化酶活性可以反映魚類機(jī)體對(duì)飼料的消化吸收情況。在羅非魚生產(chǎn)中使用1.0g/kg～1.6g/kg的蘋果酸使其腸道前腸的絨毛高度及密度得到顯著改善[9]。程卓等[10]研究表明，在草魚生產(chǎn)中使用適量的檸檬酸可以提高草魚的蛋白酶和淀粉酶活性，改善腸道絨毛形態(tài)，提高腸道肌層厚度，促進(jìn)了腸道健康，且檸檬酸的最適添加量為0.3%。該試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，0.4%和0.6%檸檬酸組草魚腸道淀粉酶活性和蛋白酶活性顯著提高，檸檬酸組草魚腸道絨毛高度、肌層厚度均高于對(duì)照組，與上述研究結(jié)論類似。檸檬酸改善草魚腸道健康可能是因?yàn)闄幟仕峤档土孙暳系膒H值，改善了飼料的適口性，調(diào)節(jié)了腸道菌群結(jié)構(gòu)；并參與三羧酸循環(huán)，為腸道組織的生長(zhǎng)發(fā)育提供更多的能量，進(jìn)而改善了腸道健康。

4 結(jié)論

該試驗(yàn)研究表明，在草魚養(yǎng)殖生產(chǎn)中添加適量的檸檬酸可以一定程度地提高腸道淀粉酶活性和蛋白酶活性，并能提高絨毛高度及肌層厚度，改善了腸道健康，且檸檬酸的最適添加量為0.4%。