不同姜炙方法對姜梔子揮發性成分的影響

鐘 瑞， 付小梅， 高 莎， 黃 瀟， 潘玲玲， 劉 婧

(江西中醫藥大學藥學院，江西 南昌 330004)

梔子是茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis的干燥成熟果實，性寒，味苦，具有瀉火除煩、涼血解毒、清熱利濕、消腫止痛的功效，是臨床常用中藥，姜炙是其主要炮制方法之一，利用姜辛溫之性來抑制梔子寒性，同時增強其和胃止嘔的作用。

目前，姜梔子廣泛應用于中醫臨床及中藥復方制劑中[1-3]，如2020年版《中國藥典》收載的導赤丸、黃連上清丸、加味逍遙丸、小兒肝炎顆粒以及常用的清熱劑“龍膽瀉肝丸”“牛黃解毒丸”和祛痰劑“二母寧嗽丸”等均以姜梔子組方配伍入藥。然而，各地炮制規范中的姜梔子姜炙方法均不相同，導致流通于市場中的姜梔子飲片品質有所差異，先前研究大多圍繞一些常見成分(如梔子苷、二萜色素類[4-5])進行分析，但忽略了揮發油也是主要藥效成分。因此，本實驗探討不同姜炙方法對姜梔子中揮發性成分的影響，以期為其質量評價標準建立提供依據和支撐。

1 材料

GCMS-TQ8040 NX型三重四級桿氣相色譜-質譜聯用儀(日本島津公司)；YP20002型電子天平(上海光正醫療儀器有限公司)。梔子采自江西新干梔子GAP種植基地，生姜購于江西(產地江西)，經江西中醫藥大學藥學院范崔生教授鑒定分別為茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis的果實、姜科植物姜ZingiberofficinaleRoscoe的新鮮根莖，憑證標本保存于江西中醫藥大學中藥鑒定學科組，梔子按2020年版《中國藥典》方法進行干燥，即除去果梗和雜質，蒸至上氣或置沸水中略燙，取出，干燥，放入自封袋中保存備用。乙酸乙酯、無水硫酸鈉均為分析純。

2 方法與結果

2.1 姜汁制備

2.1.1 生姜榨汁 生姜洗凈切片，加其15%用量的水壓榨4次，過濾，低溫旋轉濃縮，定容至1 g/mL，即得。

2.1.2 生姜煮汁 生姜洗凈切片，加5倍量水煎煮3次，每次30 min，合并汁液，濾過，濃縮至1 g/mL，即得，供5號樣品炮制用。

2.2 姜梔子制備 按照表1中炮制規范中要求進行炮制，得到樣品1～8。

表1 各地姜梔子炮制規范

2.3 揮發油提取 取表1姜梔子各100 g，過40目篩，加6倍量水浸泡過夜，加熱并保持微沸狀態，采用水蒸氣蒸餾法分別提取7 h至揮發油不再增加，收集揮發油，500 μL乙酸乙酯溶解，無水硫酸鈉脫水干燥。結果，1～8號樣品揮發油含量分別為0.9、1.2、1.4、1.3、1.4、1.2、1.5、1.4 μL/g。

2.4 分析條件 DB-5MS色譜柱(0.25 mm×30 m，0.25 μm)；程序升溫(初始溫度60 ℃，保持3 min，5 ℃/min升至250 ℃，保持5 min)；載氣高純氦氣；體積流量1.4 mL/min；進樣量1 μL；氣化溫度250 ℃；分流進樣，分流比10∶1。El離子源70 eV；離子源溫度200 ℃；全掃描采集模式，質量范圍m/z50～500。

2.5 GC-MS分析 采用NIST Version 1.7圖譜庫檢索，結合保留時間確認化學成分，按峰面積歸一法進行計算，見圖1、表2。

表2 揮發油GC-MS分析結果

2.6 數據分析

2.6.1 主成分分析 以共有峰峰面積為變量，采用SPSS 19.0軟件進行主成分分析，結果見表3，可知前2種主成分累積貢獻率達98.803%，即能反映揮發油98.803%的信息，其中第一主成分特征值為6.923，貢獻率為86.538%；第二主成分特征值為0.981，貢獻率為12.265%。再經方差最大正交旋轉后的因子載荷矩陣分析，篩選出有實際意義的鑒別因子，結果見表4，可知第一主成分與樣品1～4、6～8呈高度正相關，可聚為一類；第二主成分與樣品5呈高度正相關，單獨聚為一類。

表3 共有峰特征值

表4 旋轉變化后的因子矩陣

2.6.2 判別分析 以8個樣品所有色譜峰為因變量，采用SPSS 19.0軟件進行判別分析，將樣品1～4、6～8作為組別1，樣品5作為組別2，判別函數的相關性為0.873，結果見表5。由此可知，各樣品能按照預設的組別進行正確判別，樣品1～4、6～8可聚為一類，樣品5單獨聚為一類，表明不同姜炙方法存在一定差異性，能區分為2類。

表5 判別函數分類結果

3 討論與結論

本實驗按照8種姜炙方法對梔子進行炮制，并通過GC-MS法對其揮發性成分進行分析，從中分別檢出48、47、44、47、42、48、46、48種成分，其中共有成分16種，分別為2-正戊基呋喃、2,2,5,5-四甲基-3環戊烯-1-酮、異佛爾酮、4-亞甲基異佛爾酮、(E)-2-癸烯醛、茴香腦、(E,Z)-2,4-癸二烯醛、(E,E)-2,4-癸二烯醛、(+)-β-瑟林烯、2,4-二叔丁基酚、2-十五烷酮、棕櫚酸甲酯、鄰苯二甲酸二丁酯、bicyclo[9.3.1]pentadeca-3,7-dien-12-ol，4,8,12,15,15-pentamethyl-,[1R-(1R*,3E,7E,11R*,12R*)]、亞油酸甲酯、(E)油酸甲酯，占揮發油總量的69.80%～81.81%。

與生品揮發性成分進行比較，發現姜炙品中共有成分種類不變，但含量變化明顯，如2-正戊基呋喃、(E)-2-癸烯醛、茴香腦、(E,Z)-2,4-癸二烯醛、(E,E)-2,4-癸二烯醛等均呈現降低趨勢，占揮發油總量的6.91%～52.03%；2,4-二叔丁基酚、2-十五烷酮、棕櫚酸甲酯、鄰苯二甲酸二丁酯、bicyclo[9.3.1]pentadeca-3,7-dien-12-ol、亞油酸甲酯、4,8,12,15,15-pentamethyl-,[1R-(1R*,3E,7E,11R*,12R*)]、(E)油酸甲酯等呈升高趨勢，占揮發油總量的11.65%～69.56%。另外，8種姜炙品中來源于生品的成分數量分別為34、34、35、34、21、38、36、32種；與生姜比較，姜炙品中大多數揮發性成分不再出現，并且種類較少，僅分別為7、5、7、4、2、6、4、13種，同時含量呈降低趨勢；與生品、生姜比較，8種姜炙品中新增成分數量分別為9、10、5、11、21、6、8、5種，消失成分數量分別為48、50、48、51、66、45、49、44種，可能是梔子姜炙后苦寒藥性緩和、溫中止嘔作用增強的主要原因之一，表明不同姜炙方法對姜梔子揮發性成分含量、化學成分組成仍存在較大影響[14-16]。

為了進一步研究不同姜炙方法之間的區別，本實驗采用主成分分析、判別分析對姜梔子揮發性成分進行研究，發現第1～4、6～8種樣品姜炙方法為一類，第5種樣品單獨為1類，區別在于姜汁噴灑的方法，其中第2～4、6～8種樣品均為“悶潤炒制”，第5種樣品為“噴汁炒制”，表明姜炙噴灑方式對其揮發性成分含量及化學成分組成產生較大影響。另外，在第1種姜炙方法中雖然姜汁噴灑方法也采用了“噴汁”，但由于采用了較強的炮制火力，基本等同于炒炭的溫度，而且其間還需要滅火星，故梔子的細胞、組織結構更疏松，更易于與姜汁進行結合反應，能達到“悶潤”效果，故梔子炒制的程度在一定程度上也會影響姜梔子揮發性成分種類和含量。

綜上所述，不同姜炙方法對姜梔子揮發性成分總量及化學組成存在一定影響。今后，將結合姜梔子溫中止嘔藥理作用來確定其主要藥效活性成分，從而為規范相關炮制工藝及質量標準提供理論依據。