神經導向因子-1、信號轉導及轉錄激活因子1在急性白血病患者中的表達及與臨床特征的關系

陳曉昕，袁文華，葛唱

鄭州大學第一附屬醫院兒童重癥監護室，鄭州 450052

白血病是一類造血干細胞的惡性克隆性疾病[1]。中國白血病發病率為（3～4）/10萬，且男性略多于女性[2]。白血病的明確病因至今未明，許多因素被認為與白血病發生有關，病毒可能是主要因素，此外還有電離輻射、化學藥物或毒物、遺傳因素等[3]。按照病程和白血病細胞的成熟度進行分類，可分為急性白血病和慢性白血病。其中急性白血病以起病急、進展慢、病程可長達數年為特點，發病時骨髓中異常的原始細胞及幼稚細胞大量增殖并廣泛浸潤肝臟、脾臟、淋巴結等，抑制正常造血[4]。臨床上急性白血病以進行性貧血、持續發熱或反復感染、出血和組織器官浸潤等為主要表現，骨髓和外周血中以原始細胞和早期幼稚細胞為特征[5]。神經導向因子（neuroguidance factor，Netrin）是一類高度保守的、與層粘連蛋白相關的可分泌蛋白和膜結合蛋白。有研究發現，Netrin可參與血管和淋巴管的生成，同時在腫瘤中也發揮著一定的作用[6]。神經導向因子-1（neuroguidance factor-1，Netrin-1）是Netrin家族的一員，主要位于17號染色體上，能參與腫瘤細胞的生長和侵襲[7]。信號轉導及轉錄激活因子1（signal transduction and activator of transcription 1，STAT1）是一種信號轉導的重要蛋白，其編碼基因位于2號染色體上，既能參與正常生理功能，又與腫瘤的形成有著密切的聯系，能引起細胞的分化和凋亡[8]。但目前對于Netrin-1、STAT1與急性白血病發生發展的關系尚不明確，急性白血病患者中Netrin-1、STAT1的相關報道較少，因此本研究探討急性白血病患者中Netrin-1、STAT1的表達及其與臨床特征的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2020年1月至2022年1月鄭州大學第一附屬醫院收治的急性白血病患者的病歷資料。納入標準：①符合《急性白血病》[9]中的診斷標準；②年齡＜14歲；③臨床資料完整。排除標準：①嚴重貧血，血紅蛋白濃度低于60 g/L；②凝血功能障礙；③存在其他惡性腫瘤。根據納入、排除標準，共納入45例急性白血病患者作為疾病組。另選取40例同期健康體檢人群作為對照組。兩組研究對象各臨床特征比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）（表1），具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

表1 兩組研究對象的臨床特征

1.2 檢測方法

①采集所有研究對象靜脈血4 ml，室溫靜置15 min，以 3000 r/min離心 15 min，取上清，置于-80℃冰箱中，等待檢測。采用酶聯免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測血清中Netrin-1水平，嚴格按照Netrin-1 ELISA試劑盒說明步驟進行檢測。②采集所有研究對象靜脈血5 ml，加入肝素抗凝，以3000 r/min離心15 min，4℃下靜置10 h，經過漂洗后進行標記，并在37℃下靜置2 h，然后進行染色，最后采用熒光測定儀進行測定，采用蛋白質印跡（Western blot）法檢測STAT1。③采集疾病組患者靜脈血5 ml，檢測白細胞及血小板計數。白細胞正常值為（4～10）×109/L，血小板正常值為（100～300）×109/L。

1.3 觀察指標

比較兩組研究對象Netrin-1、STAT1的表達水平；比較不同白細胞和血小板水平疾病組患者Netrin-1、STAT1的表達水平；比較不同Netrin-1、STAT1表達情況疾病組患者的臨床特征，Netrin-1＜70 ng/ml為低表達，≥70 ng/ml為高表達，STAT1＜6.4為低表達，≥6.4為高表達。

1.4 統計學分析

采用SPSS 24.0統計軟件進行數據分析，符合正態分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Netrin-1、STAT1水平的比較

疾病組患者Netrin-1、STAT1水平均明顯高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表2）

表2 兩組研究對象Netrin-1、STAT1水平的比較（±s）

表2 兩組研究對象Netrin-1、STAT1水平的比較（±s）

注：*與對照組比較，P＜0.01

組別疾病組（n=4 5）對照組（n=4 0）7 2.3 5±4.6 5*1 1.2 3±4.1 4 6.2 1±0.2 3*3.1 0±0.1 1 N e t r i n-1（n g/m l）S T A T 1

2.2 不同白細胞和血小板水平疾病組患者Netrin-1、STAT1表達水平的比較

白細胞≥50×109/L、血小板＜30×109/L疾病組患者Netrin-1表達水平明顯低于白細胞＜50×109/L、血小板（30～100）×109/L患者，差異均有統計學意義（t=33.884、57.688，P＜0.01）；白細胞≥50×109/L、血小板＜30×109/L疾病組患者STAT1表達水平明顯高于白細胞＜50×109/L、血小板（30～100）×109/L患者，差異均有統計學意義（t=68.381、68.299，P＜0.01）。（表3）

表3 不同白細胞和血小板水平疾病組患者Netrin-1、STAT1的表達水平

2.3 不同Netrin-1、STAT1表達情況疾病組患者臨床特征的比較

Netrin-1、STAT1高表達疾病組患者貧血、出血、發熱、浸潤發生率均明顯高于Netrin-1、STAT1低表達患者，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表4）

表4 不同Netrin-1、STAT1表達情況疾病組患者臨床特征的比較[n（%）]

3 討論

白血病作為造血組織的惡性腫瘤，起源于骨髓單個造血祖細胞或干細胞的惡性病變[10]。白血病在中國惡性腫瘤病死率中居男性第六位，女性第八位，但經過現代技術治療，已有不少患者獲得病情緩解，可長期生存，甚至獲得治愈[11]。白血病主要特點為骨髓中白血病細胞腫瘤性增生，能侵犯人體的每個臟器，繼而產生相應的臨床癥狀[12]。急性白血病是指以起病急、貧血、發熱、消瘦、肝脾及淋巴結腫大、骨痛尤其胸骨壓痛、白細胞計數增高、血片中有原始細胞和幼稚細胞、骨髓增生明顯等為主要表現的疾病[13]。急性白血病病情進展迅速，自然病程僅有數周至數月，一般可根據白血病細胞歸屬分為急性髓系白血病和急性淋巴細胞白血病兩大類[14]。

Netrin-1是Netrin家族中最早在胚胎發育期的細胞和軸突遷移中被發現的，由600多個氨基酸組成，其功能結構區域有3個，可在血管內皮上進行表達，以調節炎癥細胞的遷移和分泌[15]。Netrin-1的作用主要與其受體有關，具有雙向作用，其受體具有吸引Netrin-1的作用。有研究表明，Netrin-1可促進血管內皮生長因子和血小板生長因子的表達，在血管生長和缺血中起到保護作用[16]。STAT1是在細胞內以單體形式存在于STAT家族中的7個成員之一，主要分布于組織與細胞內，其基因位于人2號染色體上，在小鼠基因中，存在于1號染色體上[17]。STAT1為一種由750多個氨基酸排列組成的蛋白質，分為6個功能區域，分子量為91 kD[18]。STAT1的DNA在結合區內有免疫球蛋白折疊，有317～488個氨基殘基，其激活主要通過干擾素的作用。STAT1既能參與機體的抗感染功能，又能對細胞的增殖、分化及凋亡進行調節，同時對腫瘤發生發展有抑制作用[19]。激活后的STAT1可產生一些類似細胞因子，在細胞因子中具有一定的特異性，可與不同的細胞因子組成信號，轉導不同的刺激。在本研究中，急性白血病患者Netrin-1、STAT1水平均明顯高于非急性白血病患者，表明Netrin-1、STAT1對急性白血病患者具有一定的作用。李永婧等[20]運用ELISA法檢測急性淋巴細胞白血病患兒血清Netrin-1表達水平達70 ng/ml，顯示Netrin-1在患兒中存在異常表達，且不同濃度的Netrin-1對患兒的影響不同。孫琳琳等[21]研究表明，STAT1在白血病細胞的分化中產生一定的作用，且STAT1對白細胞的分化起調節作用，提示STAT1在急性白血病患者中存在異常表達。有研究發現，Netrin-1與白細胞和血小板存在一定的聯系，因Netrin-1濃度的不同，白細胞和血小板的表達也不同，當白細胞水平下降時，Netrin-1表達水平會升高，同時，當患者血小板下降時，Netrin-1表達水平也會隨之下降[22]。有相關文獻表明，在白血病患者的外周血白細胞的檢測中發現STAT1的存在，表明在白細胞中存在激活的STAT1，但在健康人群中沒有檢測到STAT1的激活，激活的STAT1活化炎癥細胞，可分泌大量的血小板源性生長因子，當機體受損時，STAT1可調控血小板的功能，促進血小板釋放[23]。本研究結果顯示，當白細胞≥50×109/L、血小板＜30×109/L時，急性白血病患者Netrin-1表達水平顯著降低，STAT1表達水平顯著增高。Netrin-1、STAT1水平與臨床特征的關系分析結果顯示，Netrin-1、STAT1高表達患者貧血、出血、發熱、浸潤發生率均明顯高于Netrin-1、STAT1低表達患者。

綜上所述，急性白血病患者Netrin-1、STAT1的表達與臨床特征關系密切，Netrin-1、STAT1高表達時，急性白血病患者貧血、出血、發熱、浸潤發生率均較高。由于本研究樣本量較小，關于其在臨床特征中的更多問題需要更大樣本的臨床研究。