不同采收時期蒙藥益母草中有效成分含量的比較分析

劉佳，智慧，艾丹，楊秀華

（呼倫貝爾職業技術學院，內蒙古 呼倫貝爾 021000）

0 引言

益母草又名茺蔚，為唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的新鮮或干燥地上部分[1]。益母草藥材中含有豐富的藥用活性成分，包括生物堿類益母草堿、鹽酸水蘇堿，二萜類成分前益母草素、益母草素、前益母草素，揮發油類成分麝香草油、苦艾油，黃酮類成分蘆丁、槲皮素，動物多糖有淀粉、纖維素、果聚糖、半纖維素等，植物多糖有糖原、甲殼素、肝素等[2]。據中國藥典記載，鹽酸益母草堿和鹽酸水蘇堿作為益母草質量評價指標。熊鶯等人研究結果顯示鹽酸益母草堿和鹽酸水蘇堿是益母草藥材中主要的活性成分[3-4]，其中鹽酸益母草堿藥理作用廣泛。有研究表明，鹽酸益母草堿可通過NF-κB信號通路抑制骨關節炎的炎癥反應并改善軟骨降解[5]；也可通過AMPK / SREBP1信號通路對實驗性非酒精性脂肪性肝炎具有保護作用[6]；張怡等[7]研究發現益母草中的成分鹽酸益母草堿能夠抑制破骨細胞生成。趙懿清等[8]研究發現鹽酸益母草堿能夠抑制大鼠子宮的異常出血。

益母草在全國大部分地區均有分布，主產江蘇、廣東、廣西、福建、貴州、云南、四川、內蒙古等地[9]。各地區在益母草的采收時期方面說法不一，缺乏有效依據，從而導致不同批次生產的含有益母草單位藥材的成分含量不均一，影響了藥品的品質。呼倫貝爾地區益母草花期為7-9月，果期為9月[10]，結合呼倫貝爾市氣候特點和益母草長勢情況，本研究選定從8月中旬至10月中旬之間的益母草樣品作為本次研究對象，對其活性成分鹽酸益母草堿進行了含量測定比較研究，以期為最佳采收時期的確定提供可參考的科學依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀：日本島津LC-15C輸液泵、SIL-10AF自動進樣器、CTO-15C紫外檢測器、SCL-10AVP工作站；KQ500-DB數控超聲波清洗機（昆山超聲儀器有限公司）；BSA124S電子天平（Max=120g，d=0.1mg）賽多利斯科學儀器（北京）有限公司。

1.2 材料

鹽酸益母草堿（純度≥98%，批號：AF21072351,城都埃法生物科技有限公司）、辛烷磺酸鈉（天津市大茂化學試劑廠）、乙腈為色譜純（山東禹王和天下新材料有限公司）、無水乙醇為分析純（山東禹王和天下新材料有限公司）、水為超純水。

以益母草的種植馴化文獻為依據，采集2021年8月15日、8月30日、9月15日、9月30日、10月15日等五個不同時期的益母草樣品，晾干，在干燥陰涼處保存備用。樣品采集自呼倫貝爾職業技術學院蒙藥材馴化栽培實訓基地。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-0.4%辛烷磺酸鈉的0.1%磷酸溶液（45：55）；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；檢測波長為277nm；進樣量：10μL

2.2 供試品溶液的制備

取益母草樣品粉末（過三號篩）約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25mL，稱定重量，加熱回流2小時，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減少的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 對照品溶液的制備

取鹽酸益母草堿對照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每1mL含30μg的溶液，即得。

2.4 方法學考察

精密量取鹽酸益母草堿對照品1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL分別置于10 mL 容量瓶中，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取上述溶液10μL 進樣，按照“2.1”項的色譜條件測定。以進樣量X（mg）為橫坐標，峰面積Y為縱坐標繪制標準曲線，并計算得回歸方程為：y = 66933x + 10915，R2 = 0.9999，結果表明鹽酸益母草堿進樣量在0.003～0.015mg范圍與峰面積具有良好的線性關系；精密吸取鹽酸益母草堿對照品溶液10μL，按照“2.1”項的色譜條件連續進樣5次，測得鹽酸益母草堿對照品的峰面積積分值，結果RSD值為0.78%，試驗表明，儀器精密度良好；取2021年8月15日、9月1日、9月15日、9月30日和10月15日采集的益母草供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10小時進樣10μL，結果RSD值依次為0.81%、0.76%、0.59%、0.65%、0.77%，表明供試品溶液在10小時內穩定性良好；按照“2.2”項平行制備2021年8月15日、9月1日、9月15日、9月30日和10月15日采集的益母草供試品，每樣6份，按“2.1”項色譜條件下進行測定，進樣量為10μL，結果RSD值依次為1.21%、0.98%、1.05%、1.45%、1.56%，表明該方法重復性較好。

2.5 結果

2.5.1 對照品含量測定

精密吸取按2.3項下配制的鹽酸益母草堿對照品溶液，取10μL注入高效液相色譜儀測得，見圖1。

圖1 鹽酸益母草堿對照品HPLC

2.5.2 供試品含量測定

分別取于2021年8月15日、9月1日、9月15日、9月30日和10月15日采集的益母草樣品，按“2.2”項下方法制備供試品溶液并在“2.1”項下色譜條件下進行鹽酸益母草堿的含量測定。

實驗數據顯示蒙藥益母草中鹽酸益母草堿含量最高的是2021年8月15日采集的樣品，含量為0.1334%，其次依次為9月1日、9月15日、9月30日和10月15日等時間采集的益母草樣品，依次為0.0867%、0.0821%、0.0797%、0.0787%。結果顯示，蒙藥益母草在8月中旬的開花初期時鹽酸益母草堿的含量為最高，其他時期含量均顯示下降趨勢。圖2為8月15日采集樣品色譜圖、圖3為9月1日采集樣品色譜圖、圖4為9月15日采集樣品色譜圖、圖5為9月30日采集樣品色譜圖、圖6為10月15日采集樣品色譜圖。表1為不同采收時期蒙藥益母草中有效成分含量的測定結果。

表1 不同采收時期蒙藥益母草中有效成分含量的比較

圖2 8月15日采集益母草樣品HPLC

圖3 9月1日采集益母草樣品HPLC

圖4 9月15日采集益母草樣品HPLC

圖5 9月30日采集益母草樣品HPLC

圖6 10月15日采集益母草樣品HPLC

3 討論

蒙醫臨床上益母草具有很高的臨床應用價值，主治肝熱、目赤腫痛、眼白斑、云翳、結膜炎等[11]。郭巧技等人[12]通過對不同產地、不同采收階段益母草中有效成分進行檢測后發現營養期益母草質量最好，其次是童子期，花期及果期質量最差。周穎等人[13]研究發現，益母草在過了花盛期，莖稈呈枯黃、葉片缺失，有效成分鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿含量下降。本研究通過規范種植蒙藥材益母草，根據文獻記載的益母草采收期結合本地區益母草長勢于2021年8月15日、8月30日、9月15日、9月30日、10月15日等五個不同時期采集益母草樣品，以2020年版《中國藥典》為依據，對益母草樣品中的鹽酸益母草堿含量進行了測定。結果顯示8月15日采集到的益母草樣品中的鹽酸益母草含量最高，為0.1334%，10月15日期采集到的益母草樣品中的鹽酸益母草樣品含量最低，為0.7873。

綜上所述，益母草藥材不同時期采收的有效成分含量存在差異，其中呼倫貝爾地區8月中旬采收的樣品中有效成分含量最高，建議在此期間采收為宜。