冬蟲夏草內生菌Fusarium solani化學成分研究

曠歧軒， 李青洲， 雷力榮， 郭大樂， 鄧 赟

(成都中醫藥大學藥學院，中藥材標準化教育部重點實驗室，西南特色中藥資源國家重點實驗室，四川 成都 611137)

冬蟲夏草是麥角菌科真菌冬蟲夏草Cordycepssinensis(Berk.) Sacc.寄生在鱗翅目蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座和幼蟲尸體的干燥復合體，可調節免疫、呼吸、生殖和心血管等系統功能[1-2]，其中成藥制劑在臨床廣泛使用，用于治療肺腎兩虛、慢性支氣管炎、高血脂癥、肝硬化等[3]。內生菌與宿主互利共生，其次生代謝產物一般具有抗蟲、殺菌、抗腫瘤等功效[4-5]，故研究冬蟲夏草內生菌次生代謝產物的化學成分對發掘新型藥用微生物資源、尋找替代品、保護種質資源具有重要的意義[6]。

鐮刀菌Fusariumsp.分布廣泛，其次生代謝產物抗菌作用、抗病毒、抑制腫瘤細胞生長等[7-8]；F.solani對resibufogenin進行生物轉化，得到3個低細胞毒性的轉化產物[9]；海洋源真菌F.solani中分離得到具有抗炎活性的6個新的鐮刀菌素衍生物fusarins G～L[10]；波紋擬南芥內生真菌F.solani中分離出具有細胞毒性的新的萘醌和氮雜蒽醌衍生物[11]；真菌F.solani中分離得到新的烯酸和雙烯酸酯，是一類有效的抗茶樹病原真菌化合物[12]。本實驗研究Fusariumsp.次生代謝產物，豐富了冬蟲夏草內生菌次生代謝產物的化學結構的多樣性，也為冬蟲夏草與鐮刀菌屬真菌的相互作用提供了化學視角的物質基礎。

1 材料

ISQ EC單四極桿質譜儀(美國Thermo Fisher公司)；Ascend 700M核磁共振波譜儀(德國Bruker公司)；中低壓層析柱、NP7000液相色譜儀(江蘇漢邦儀器有限公司)；GF254薄層硅膠板(青島海洋化工廠)；立式高壓蒸汽滅菌器(上海申安醫療有限公司)。乙酸乙酯、三氯甲烷、甲醇(成都科龍化工有限公司，批號2020042203、2020042002、2020051702)；超純水為自制。

冬蟲夏草于2018年4月采自甘肅省夏河縣，經成都中醫藥大學蔣桂華教授鑒定為冬蟲夏草Cordycepssinensis。從新鮮冬蟲夏草中分離得到1株內生真菌，將其16S rRNA 基因序列提交到NCBI的GenBank基因庫，經BLAST比對，故鑒定為Fusariumsolani，保存于成都中醫藥大學藥學院生化制藥實驗室。

2 提取與分離

活化后的F.solani菌株經液體培養與提取[13-14]，得到總浸膏36.26 g，經D101大孔樹脂吸附分離后，得到純水部位18.68 g、30%甲醇部位6.84 g、60%甲醇部位5.22 g、甲醇部位5.78 g。60%甲醇部位經Sephadex LH-20分離，三氯甲烷-甲醇(50∶50)洗脫，通過TLC、HPLC分析合并得5個流分Fr.A～E。

Fr.A經C18鍵、反向硅膠中壓低色譜柱層析，甲醇-水(10∶90～100∶0)洗脫，通過TLC、HPLC分析合并得到9個流分Fr.A1～A9，經制備型HPLC分離純化(檢測波長210、254 nm)，Fr.A2經甲醇-水(30∶70)制備得化合物4(3.5 mg)。

Fr.B經C18鍵、反向硅膠中壓低色譜柱層析，由醇-水(5∶95～100∶0)洗脫，通過TLC、HPLC分析合并得到12個流分Fr.B1～B12，經制備型HPLC分離純化(檢測波長210、254 nm)，Fr.B1經甲醇-水(5∶95)制備得化合物25(1.0 mg)，Fr.B2經甲醇-水(11∶89，tR=26.32、28.24 min)制備得化合物20(0.7 mg)、21(0.8 mg)，Fr.B3經甲醇-水(29∶71，tR= 17.25、18.60 min)制備得化合物11(1.3 mg)、12(0.9 mg)，Fr.B4經甲醇-水(25∶75，tR=19.04、34.59 min)制備得化合物2(8.0 mg)、16(0.8 mg)，以及甲醇-水(32∶68，tR=17.99、22.64 min)制備得化合物9(2.6 mg)、3(1.3 mg)，Fr.B5經甲醇-水(40∶60)制備得化合物22(0.7 mg)；Fr.B6甲醇-水(35∶65)制備得化合物1(1.5 mg)。

Fr.C經C18鍵和反向硅膠中壓低色譜柱層析，甲醇-水(20∶80～100∶0)洗脫，通過TLC、HPLC分析合并得到12個流分Fr.C1～C12，經制備型HPLC分離純化(檢測波長210、254 nm)，Fr.C2經甲醇-水(25∶75)制備得化合物13(1.6 mg)，Fr.C3經甲醇-水制備得化合物6(5.3 mg)、10(1.0 mg)，Fr.C4經甲醇-水(22∶78)制備得化合物5(0.7 mg)。

Fr.D經C18鍵和反向硅膠中壓低色譜柱層析，甲醇-水(20∶80～100∶0)洗脫，通過TLC、HPLC分析合并得到8個流分Fr.D1～D8，經制備型HPLC分離純化(檢測波長210、254 nm)，Fr.D3經甲醇-水制備得化合物17(1.3 mg)，Fr.D4經甲醇-水(40∶60)制備得化合物18(0.6 mg)，Fr.D6經甲醇-水制備得化合物23(0.8 mg)、24(0.7 mg)。

Fr.E經C18鍵和反向硅膠中壓低色譜柱層析，甲醇-水(20∶80～100∶0)洗脫，通過TLC、HPLC分析合并得到10個流分Fr.E1～E10，經制備型HPLC分離純化(檢測波長210、254 nm)，Fr.E4經甲醇-水(41∶59，tR=38.46 min)制備得化合物15(0.7 mg)，Fr.E5經甲醇-水(45∶55，tR=30.28、37.30 min)制備得化合物7(1.8 mg)、8(2.9 mg)，Fr.E5經甲醇-水(35∶65)制備得化合物14(1.6 mg)，Fr.E8經甲醇-水(70∶30)制備得化合物19(0.6 mg)。

3 結構鑒定

化合物1：白色固體，ESI-MSm/z：227.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 4.52 (1H, dd,J=11.1, 6.5 Hz, H-6), 4.46 (1H, t,J=4.4 Hz, H-8), 4.17 (1H, dd,J=7.1, 4.6 Hz, H-3), 3.66 (1H, dd,J=12.8, 4.5 Hz, H-9a), 3.44 (1H, d,J=12.7, 1.5 Hz, H-9b), 2.28 (1H, dd,J=13.3, 6.5 Hz, H-7a), 2.08 (1H, ddd,J=13.2, 11.2, 4.3 Hz, H-7b), 1.93 (1H, m, H-10a), 1.89 (1H, m, H-11), 1.50 (1H, ddd,J=13.1, 7.7, 5.2 Hz, H-10b), 0.97 (3H, d,J=3.7 Hz, H-13), 0.95 (3H, d,J=3.5 Hz, H-12)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 173.1 (C-5), 169.0 (C-2), 69.1 (C-8), 58.7 (C-6), 55.2 (C-3), 54.6 (C-9), 39.4 (C-10), 38.2 (C-7), 25.8 (C-11), 23.3 (C-12), 22.2 (C-13)。與文獻[15]報道基本一致，故鑒定為環-4-羥基-(L)-脯氨酸-(L)-亮氨酸。

化合物2：白色粉末，ESI-MSm/z：211.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 4.26 (1H, dd,J=8.9, 6.9 Hz, H-9), 4.12 (1H, m, H-6), 3.51 (2H, m, H-3), 2.30 (1H, m, H-5a), 1.98～2.06 (2H, m, H-4a, 11), 1.86～1.96 (3H, m, H-4b, 5b, 10a), 1.52 (1H, m, H-10b), 0.96 (3H, d,J=4.3 Hz, H-12), 0.95 (3H, d,J=4.1 Hz, H-13)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 172.8 (C-1), 168.9 (C-7), 60.3 (C-6), 54.6 (C-9), 46.4 (C-3), 39.4 (C-10), 29.1 (C-5), 25.8 (C-11), 23.7 (C-4), 23.3 (C-12), 22.2 (C-13)。與文獻[16]報道基本一致，故鑒定為環-(L)-脯氨酸-(D)-亮氨酸。

化合物3：白色粉末，ESI-MSm/z：211.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 4.24 (1H, m, H-6), 3.68 (1H, dd,J=6.3, 0.9 Hz, H-9), 3.61 (1H, m, H-3a), 3.49 (1H, m, H-3b), 2.34 (1H, m, H-5b), 2.02 (1H, m, H-10), 1.90(1H, m, H-5a), 1.60 (1H, m, H-11b), 1.22 (1H, m, H-11a), 1.00 (3H, d,J=6.9 Hz, H-12), 0.95 (3H, t,J=7.4 Hz, H-13)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 171.5 (C-7), 167.9 (C-1), 63.5 (C-6), 59.7 (C-9), 46.8 (C-3), 40.9 (C-10), 30.3 (C-5), 26.1 (C-11), 22.9 (C-4), 15.7 (C-13), 11.6 (C-12)。與文獻[17]報道基本一致，故鑒定為環-(D)-脯氨酸-(L)-異亮氨酸。

化合物4：白色粉末，ESI-MSm/z：213.2[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 3.94 (1H, ddd,J=9.2, 4.5, 1.2 Hz, H-6), 3.77 (1H, dd,J=4.4, 1.2 Hz, H-3), 2.22 (1H, m, H-11), 1.87 (1H, m, H-7), 1.75 (1H, ddd,J=13.6, 9.1, 4.5 Hz, H-8a), 1.60 (1H, ddd,J=14.0, 9.2, 5.2 Hz, H-8b), 1.04 (3H, d,J=7.1 Hz, H-9), 0.94 - 0.99 (9H, m, H-10, H-12, H-13)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 169.9 (C-5), 168.2 (C-2), 60.1(C-3), 52.9 (C-6), 44.6 (C-7), 32.3 (C-11), 23.9 (C-8), 22.2 (C-13), 20.4 (C-12), 17.9 (C-10), 16.4 (C-9)。與文獻[18]報道基本一致，故鑒定為環-(L)-異亮氨酸-(L)-纈氨酸。

化合物5：淡黃色固體，ESI-MSm/z：185.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 4.03 (1H， qd,J=7.1, 1.5 Hz, H-3), 3.90 (1H, dd,J=3.4, 1.5 Hz, H-6), 1.96 (1H, m, H-7), 1.52 (1H, m, H-9a), 1.44 (3H, d,J=7.1 Hz, H-10), 1.25 (1H, m, H-9b), 1.02 (3H, d,J=7.1 Hz, H-11), 0.95 (3H, t,J=7.4 Hz, H-8)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 171.2 (C-4), 169.2 (C-1), 60.9 (C-6), 51.6 (C-3), 40.3 (C-7), 25.6 (C-9), 20.9 (C-11), 15.6 (C-8), 12.2 (C-10)。與文獻[19]報道基本一致，故鑒定為環-異亮氨酸-丙氨酸。

化合物6：白色固體，ESI-MSm/z：199.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 3.83 (2H, m, H-2, H-5), 2.29 (2H, m, H-7, H-7′), 1.06 (6H, d,J=7.1 Hz, H-8, H-8′), 0.95 (6H, d,J=6.9 Hz, H-9, H-9′)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 170.2 (C-3, C-6), 61.2 (C-2, C-5), 33.2 (C-7, C-7′), 19.3 (C-8, C-8′), 17.8 (C-9, C-9′)。與文獻[20]報道基本一致，故鑒定為3,6-二異丙基-2,5-二酮哌嗪。

化合物7：白色固體，ESI-MSm/z：227.2[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, DMSO-d6)δ: 8.15 (1H, d,J=2.7 Hz, 1-NH), 8.02 (1H, d,J=2.6 Hz, 4-NH), 3.76 (1H, ddd,J=8.6, 4.0, 1.3 Hz, H-6), 3.68 (1H, m,H-3), 1.83 (2H, m, H-8, 11), 1.62 (1H, ddd,J=13.5, 8.7, 4.7 Hz, H-7a), 1.45 (1H, m, H-7b), 1.42 (1H, m, H-12a) 1.17 (1H, m, H-12b), 0.91 (3H, d,J=7.0 Hz, H-13), 0.88 (3H, d,J=6.7 Hz, H-9), 0.86 (3H, d,J=6.5 Hz, H-10), 0.85 (3H, d,J=7.4 Hz, H-14)；13C-NMR (175 MHz, DMSO-d6)δ: 168.8 (C-5), 167.3 (C-2), 59.3 (C-3), 52.8 (C-6), 44.1 (C-7), 38.7 (C-11), 24.8 (C-12), 24.0 (C-8), 23.6 (C-9), 22.2 (C-10), 15.63 (C-13), 12.25 (C-14)。與文獻[21]報道基本一致，故鑒定為環-(L)-亮氨酸-(L)-異亮氨酸。

化合物8：白色固體，ESI-MSm/z：261.2[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, DMSO-d6)δ: 8.11 (1H, d,J=2.0 Hz, 1-NH), 7.88 (1H, d,J=2.1 Hz, 4-NH), 7.24 (2H, m, H-9, 13), 7.19 (3H, m, H-10, 11, 12), 4.21 (1H, m, H-3), 3.58(1H, m, H-6), 3.16 (1H, dd,J=13.5, 4.1 Hz, H-7a), 2.85 (1H, dd,J=13.5, 5.1 Hz, H-7b), 1.40 (1H, m, H-14), 0.65 (2H, m, H-15), 0.55 (6H, m, H-16, 17)；13C-NMR (175 MHz, DMSO-d6)δ: 166.4 (C-5), 166.3 (C-2), 136.3 (C-8), 130.4 (C-9. C-13), 127.9 (C-10. C-12), 126.5 (C-11), 58.7 (C-6), 55.0 (C-3), 37.8 (C-7), 37.6 (C-14), 23.1 (C-15), 14.4 (C-16), 11.8 (C-17)。與文獻[22]報道基本一致，故鑒定為環-(D)-苯丙氨酸-(L)-異亮氨酸。

化合物9：淡紅色固體，ESI-MSm/z：241.1[M+Na]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ：7.27 (2H, m, H-2′, 6′), 7.22 (3H, m, H-4′, 3′, 5′), 4.31 (1H, m, H-2), 3.64 (1H, dd,J=4.6, 1.6 Hz, H-5), 3.23 (1H, dd,J=13.8,5,4 Hz, H-6a), 3.03 (1H, dd,J=13.8,4.7Hz, H-6b), 1.64 (1H, m, H-7), 0.79 (3H, d,J=7.0Hz, H-8), 0.43 (3H,J=6.8Hz, H-9)：13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 167.9 (C-4), 135.7 (C-1′), 130.1 (C-2′, 6′), 128.2 (C-3′,5′), 126.8 (C-4′), 59.8 (C-5), 55.9 (C-2), 38.7 (C-6), 31.9 (C-7), 17.7 (C-8), 15.7 (C-9)。與文獻[23]報道基本一致，故鑒定為2-isopropyl-5-phe-nylmethyl-imidazolidinone-4-one。

化合物10：白色固體，ESI-MSm/z：245.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.33～7.28 (3H, m, H-3′, H-4′, H-5′), 7.18 (2H, m, H-2′, H-6′), 4.20 (1H, m, H-6), 3.54 (1H, m,H-3b), 3.19 (1H, dd,J=13.7, 4.7 Hz, H-10b), 2.99 (1H, m, H-10a), 2.61 (1H, dd,J=10.7, 6.4 Hz, H-3a), 2.03 (1H, m, H-5a), 1.91 (1H, m, H-5b), 1.64 (1H, m, H-4a), 1.33 (1H, m, H-4b)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 171.3 (C-1), 167.4 (C-7), 136.7 (C-1′), 131.3 (C-3′, C-5′), 129.6 (C-2′, C-6′), 128.5 (C-4′), 59.8 (C-6), 59.1 (C-9), 46.1 (C-3), 40.9 (C-10), 29.8 (C-5)。與文獻[24]報道基本一致，故鑒定為環-(L)-脯氨酸-(L)-苯丙氨酸。

化合物11：白色固體，ESI-MSm/z：261.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.29～7.20 (5H, m, H-1′, H-2′, H-3′, H-4′, H-5′, H-6′), 4.48 (1H, m, H-9), 4.36 (1H, ddd,J=11.8, 5.9, 1.9 Hz, H-6), 4.27 (1H, m, H-4), 3.70 (1H, dd,J=13.0, 5.1 Hz, H-3b), 3.28 (1H, m, H-3a), 3.17 (2H, m, H-10), 2.06 (1H, m, H-5a), 1.37 (1H, ddd,J=12.9, 11.7, 4.6 Hz, H-5b)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 171.2 (C-7), 167.1 (C-1), 137.4 (C-1′), 131.0 (C-2′, C-6′), 129.5 (C-3′, C-5′), 128.1 (C-4′), 68.5 (C-4), 58.3 (C-6), 57.6 (C-9), 55.3 (C-3), 38.9 (C-5), 38.0 (C-10)。與文獻[25]報道基本一致，故鑒定為環-4-羥基-(L)-脯氨酸-(L)-苯丙氨酸。

化合物12：白色固體，ESI-MSm/z：263.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.05～7.01 (2H, m, H-10, H-12), 6.74～6.68 (2H, m, H-9, H-13), 4.24 (1H, ddd,J=5.3, 4.6, 1.6 Hz, H-6), 3.63 (1H. dd,J=4.7, 1.6 Hz, H-3), 3.14 (1H, dd,J=14.0, 5.3 Hz, H-7a), 2.94 (1H. dd,J=14.0, 4.6 Hz, H-7b), 1.65 (1H, m,J=6.9, 4.7 Hz, H-1′), 0.82 (3H, d,J=7.0 Hz, H-3′), 0.49 (3H, d,J=6.8 Hz, H-2′)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 169.6 (C-1), 169.4 (C-4), 157.9 (C-11), 132.4 (C-10, C-12), 127.6 (C-8), 116.3 (C-9, C-13), 61.3 (C-3), 57.5 (C-6), 39.3 (C-7), 33.4 (C-1′), 19.2 (C-3.), 17.2 (C-4′)。與文獻[26]報道基本一致，故鑒定為環-(L)-纈氨酸-(D)-絡氨酸。

化合物13：白色固體，ESI-MSm/z：247.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, DMSO-d6)δ: 8.09 (1H, s, H-1), 7.90 (1H, s, H-4), 7.23 (2H, m, H-9, 13), 7.18 (3H, m, H-10, 11, 12), 4.20 (1H, m, H-6), 3.53 (1H, m, H-3), 3.14 (1H, dd,J=13.5, 4.3 Hz, H-7a), 2.87 (1H, dd,J=13.5, 5.1 Hz, H-7b), 1.70 (1H, m, H-14), 0.64 (3H, d,J=7.1 Hz, H-15), 0.26 (3H, d,J=6.9 Hz, H-16)；13C-NMR (175 MHz, DMSO-d6)δ:166.6 (C-2), 166.4 (C-5), 136.3 (C-8), 130.3 (C-9, 13), 127.9 (C-10, 12), 126.5 (C-11), 59.2 (C-3), 55.0 (C-6), 37.8 (C-14), 31.0 (C-7), 18.2 (C-15), 16.2 (C-16)。與文獻[27]報道基本一致，故鑒定為環-(L)-苯丙氨酸-(L)-纈氨酸。

化合物14：淡紅色固體，ESI-MSm/z：284.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.58 (1H, m, H-5), 7.33 (1H, m, H-8), 7.09 (2H, m, H-6, H-7), 7.01 (1H, m, H-2), 4.42 (1H, m, H-11), 4.00 (1H, ddd,J=11.0, 6.4, 1.9 Hz, H-14), 3.46 (1H, m, H-17a), 3.27 (1H, m, H-17b), 1.97 (1H, m, H-19a), 1.68 (2H, m, H-18), 0.95 (1H, m, H-19b)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 170.7 (C-13), 167.4 (C-16), 137.9 (C-9), 128.7 (C-4), 125.6 (C-2), 122.6 (C-7), 120.9 (C-6), 119.8 (C-5), 112.3 (C-8), 109.5 (C-3), 60.1 (C-14), 57.2 (C-11), 45.9 (C-17), 29.2 (C-10), 29.1 (C-19), 22.5 (C-18)。與文獻[28]報道基本一致，故鑒定為brevianamide F。

化合物15：白色粉末，ESI-MSm/z：350.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.59 (1H, dd,J=8.0, 2.7 Hz, H-4), 7.34 (1H, dd,J=8.2, 2.7 Hz, H-7), 7.12 (1H, m, H-6), 7.05 (2H, m, H-5, 2), 6.62 (2H, m, H-18, 20), 6.46 (2H, dd,J=8.7, 2.6 Hz, H-17, 21), 4.17 (1H, m, H-9), 3.86 (1H, m, H-12), 3.04 (1H, dd,J=14.7, 3.9 Hz, H-8a), 2.76 (1H, m, H-8b), 2.56 (1H, m, H-15a), 1.46 (1H, dd,J=13.7, 8.4 Hz, H-15b)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 169.7 (C-11), 169.3 (C-14), 156.2 (C-19), 138.0 (C-7a), 131.9 (C-17, 21), 128.9 (C-3a), 127.7 (C-16), 125.8 (C-2), 122.1 (C-6), 120.2 (C-5), 119.9 (C-4), 116.3 (C-18, 20), 112.5 (C-7), 109.6 (C-3), 57.9 (C-12), 57.1 (C-9), 40.6 (C-15), 31.2 (C-8)。與文獻[29]報道基本一致，故鑒定為環-(D)-色氨酸-(L)-酪氨酸。

化合物16：白色固體，ESI-MSm/z：258.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.59 (1H, d,J=8.0, H-12), 7.31 (1H, d,J=8.1, H-15), 7.06 (2H, m, H-10, 14), 6.99 (1H, ddd,J=8.0, 6.9, 1.0 Hz, H-14), 4.26 (1H, m, H-2), 3.69 (1H, m, H-5), 3.45 (1H, ddd,J=14.7, 3.9, 0.6 Hz, H-8b), 3.14 (1H, ddd,J=14.7, 4.5, 0.7 Hz, H-8a), 0.35 (3H, d,J=7.1 Hz, H-7)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 170.6 (C-4), 169.5 (C-1), 137.8 (C-15a), 129.2 (C-11a), 125.8 (C-10), 122.4 (C-12), 120.2 (C-13), 119.9 (C-14), 112.1 (C-15), 109.3 (C-11), 57.5 (C-2), 51.7 (C-5), 30.8 (C-8), 20.0 (C-7)。與文獻[30]報道基本一致，故鑒定為環-(D)-丙氨酸-(L)-色氨酸。

化合物17：白色粉末，ESI-MSm/z：185.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 3.99 (1H, m, H-2), 3.93 (1H, ddd,J=8.5, 4.7, 1.1 Hz, H-5), 1.85 (1H, m, H-7), 1.73 (1H, ddd,J=13.5, 8.6, 4.7 Hz, H-6a), 1.63 (1H, ddd,J=13.9, 8.5, 5.5 Hz, H-6b), 1.44 (3H, d,J=7.1 Hz, H-10), 0.98 (3H, d,J=6.6 Hz, H-8), 0.96 (3H, d,J=6.6 Hz, H-9)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 171.5 (C-4), 170.9 (C-1), 54.6 (C-5), 51.9 (C-2), 45.1 (C-6), 25.3 (C-7), 23.5 (C-8), 22.1 (C-9), 20.9 (C-10)。與文獻[31]報道基本一致，故鑒定為環-丙氨酸-亮氨酸。

化合物18：白色粉末，ESI-MSm/z：203.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.55 (1H, dd,J=7.9, 1.0 Hz, H-4), 7.32 (1H, dd,J=8.1, 0.9 Hz, H-1), 7.07 (2H, m, H-3, 7), 7.00 (1H, ddd,J=7.9, 6.9, 1.0 Hz, H-2), 3.46 (2H, m, H-9), 3.46 (2H, t,J=7.4 Hz, H-9), 2.94 (2H, td,J=7.4, 0.9 Hz, H-10), 1.91 (3H, s, H-12)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 173.3 (C-11), 138.2 (C-6), 128.8 (C-5), 123.3 (C-7), 122.3 (C-2), 119.6 (C-3), 119.2 (C-4), 113.3 (C-8), 112.2 (C-1), 41.6 (C-10), 26.2 (C-9), 22.6 (C-12)。與文獻[32]報道基本一致，故鑒定為N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]acetamide。

化合物19：淡黃色粉末，ESI-MSm/z：153.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 6.54 (1H, dd,J=2.4, 1.5 Hz, H-3), 5.97 (1H, d,J=2.5 Hz, H-5), 3.81 (3H, s, H-8), 2.02 (3H, d,J=1.7 Hz, H-7)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 189.4 (C-4), 183.5 (C-1), 160.6 (C-2), 145.3 (C-6), 134.5 (C-5), 107.9(C-3), 56.9 (C-8), 15.4 (C-7)。與文獻[33]報道基本一致，故鑒定為2-methoxy-6-methyl-1,4-benzoquinone。

化合物20：白色固體，ESI-MSm/z：281.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 8.27 (1H, s, H-8), 8.21 (1H, s, H-2), 6.01 (1H, d,J=4.7 Hz, H-1′), 4.85 (1H, m, H-3′), 4.51 (1H, m, H-2′), 4.48 (1H, m, H-4′), 3.40 (1H, m, 5′a), 3.35 (1H, m, 5′b), 2.67 (3H, s, H-7′)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 157.4 (C-6), 153.9 (C-2), 150.5 (C-4), 142.2 (C-8), 120.6 (C-5), 91.1 (C-1′), 79.4 (C-4′), 74.9 (C-2′), 74.4 (C-3′), 56.1 (C-5′), 38.3 (C-7′)。與文獻[34]報道基本一致，故鑒定為5′-deoxy-5′-methylamino-9-(α-L-lyxofuranosyl)adenine。

化合物21：白色固體，ESI-MSm/z：281.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 8.25 (1H, s, H-8), 8.20 (1H, s, H-2), 6.00 (1H, d,J=4.9 Hz, H-1′), 4.91 (1H, m, H-3′), 4.43 (2H, m, H-2′, 4′), 3.53 (1H, m, 5′a), 3.19 (1H, m, 5′b), 2.67 (3H, s, H-7′)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 157.4 (C-6), 153.8 (C-2), 150.4 (C-4), 142.2 (C-8), 120.9 (C-5), 91.3 (C-1′), 79.6 (C-4′), 75.0 (C-2′), 74.4 (C-3′), 58.9 (C-5′), 39.2 (C-7′)。與文獻[34]報道基本一致，故鑒定為5′-deoxy-5′-methylamino-adenosine。

化合物22：淡黃色固體，ESI-MSm/z：193.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 6.19 (1H, dd,J=2.4, 0.8 Hz, H-2), 6.13 (1H, d,J=2.4 Hz, H-4), 2.55 (3H, s, H-8), 2.39 (3H, s, H-9)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 206.2 (C-7), 164.3 (C-5), 163.2 (C-3), 142.6 (C-1), 118.2 (C-6), 112.1 (C-2), 101.7 (C-4), 32.9 (C-8), 23.3 (C-9)。與文獻[35]報道基本一致，故鑒定為monapurpureusin。

化合物23：淡黃色固體，ESI-MSm/z：180.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.02 (2H, m, H-7, 11), 6.70 (2H, m, H-8, 10), 3.32 (2H, m, H-4), 2.67 (2H, m, H-5), 1.90 (3H, s, H-1)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 173.2 (C-1), 156.9 (C-9), 131.2 (C-6), 130.7 (C-7, 11), 116.2 (C-8, 10), 42.4 (C-4), 35.7 (C-5), 22.5 (C-1)。與文獻[36]報道基本一致，故鑒定為N-乙酰基酪胺。

化合物24：白色固體，ESI-MSm/z：167.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.31 (2H, m, H-7, 11), 7.25 (3H, m, H-8, 9, 10), 4.88 (1H, m, H-4), 4.03 (1H, m, H-2), 2.98 (2H, m, H-5), 2.34 (1H, ddd,J=13.3, 8.2, 4.0 Hz, H-3a), 2.18 (1H, ddd,J=13.3, 7.7 Hz, H-3b)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 179.1 (C-1), 137.6 (C-6), 130.7 (C-7, 11), 129.6 (C-8, 10), 127.9 (C-9), 79.8 (C-4), 68.0 (C-2), 41.9 (C-5), 36.3 (C-3)。與文獻[35]報道基本一致，故鑒定為trans-harzialactone A。

化合物25：無色固體，ESI-MSm/z：183.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, DMSO-d6)δ: 4.40 (2H, d,J=5.6 Hz, 3-OH, 4-OH), 4.32 (2H, t,J=5.7 Hz, 1-OH, 6-OH), 4.13 (2H, d,J=7.2 Hz, 2-OH, 5-OH), 3.37～3.62 (8H, m, H-1, 2, 3, 4, 5, 6)；13C-NMR (175 MHz, DMSO-d6)δ: 71.3 (C-2, 5), 69.7 (C-3, 4), 63.9 (C-1, 6)。與文獻[37]報道基本一致，故鑒定為D-甘露醇。

4 結論

本實驗從冬蟲夏草內生菌F.solani中分離鑒定出25個化合物，主要為環二肽類，其中化合物1～17、19～24為首次從該真菌的次生代謝產物中發現。該類成分在抗腫瘤、抑菌、免疫調節、抗氧化、殺蟲等方面均顯示出較好的生物活性，可為冬蟲夏草相關藥物開發提供新思路。