5%氟氯蟲雙酰胺SC的高效液相色譜-串聯質譜分析

吳天琦，何川，肖健，王龍，高美珠，劉浪，周仁丹，李保同

(1.江西農業大學 國土資源與環境學院，江西 南昌 330045；2.江西省灌溉試驗中心站，江西 南昌 330201)

昆蟲綱(Insecta)是自然動物界中數量種類最為龐雜的一個綱，鱗翅目昆蟲(Lepidoptera)在其中排名第二，目前人類已知的鱗翅目昆蟲有18萬種之多，分屬47個總科和128個科[1]。鱗翅目害蟲嚴重威脅著全球重要農作物的健康[2-3]。鄰甲酰胺基苯甲酰胺雙酰胺類殺蟲劑主要針對鱗翅目害蟲而研發，可強力激活鱗翅目害蟲中魚尼丁(ryanodinereceptor，Ry R)受體將鱗翅目害蟲細胞內的鈣離子過度釋放，致使害蟲癱瘓死亡[4-8]。氟氯蟲雙酰胺(fluchlordiniliprole)是由中國山東海利爾藥業集團自主創制研發的第一款雙酰胺類(或吡啶基吡唑類)專利化合物殺蟲劑，分子式為 C17H10BrCl3FN5O2，化學結構式見圖1。氟氯蟲雙酰胺5%懸浮劑針對鱗翅目害蟲幼蟲的殺蟲效率高，持久性強。迄今為止，氟氯蟲雙酰胺在中國農藥信息網上并未注冊登記，中國及國外農藥研究相關機構個人亦未報道其相關分析方法。本實驗通過高效液相色譜-串聯質譜的技術手段開發了5%氟氯蟲雙酰胺懸浮劑的常量分析方法。在本檢測手段下，操作簡單方便，數據可靠程度較高，可以普遍用來檢測分析氟氯蟲雙酰胺制劑含量。

圖1 氟氯蟲雙酰胺甘草胺化學結構式Fig.1 The chemical structure of fluchlordiniliprole

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

乙腈、88%甲酸均為色譜純；超純水；氟氯蟲雙酰胺(≥98%)、5%氟氯蟲雙酰胺SC均為標準品。

安捷倫-1260高效液相色譜儀(Zorbax Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)色譜柱)；Agilent-6120單級四級桿液相色譜-質譜儀；孔徑約 0.22 μm 過濾膜；SB-5200DT超聲波清洗機。

1.2 儀器操作條件

1.2.1 色譜條件 色譜柱溫度30 ℃，色譜柱樣品流動速度0.4 mL/min，進樣器檢測量10 μL，流動相V乙腈∶V0.1%甲酸水=70∶30。

1.2.2 質譜條件 ESI離子源為負離子掃描，SIM質荷比設定519.8(m/z)，碰撞誘導解離電壓 100 V，干燥氮氣流動速度13.0 L/min，毛細管電壓±3 000 V，干燥氣溫度360 ℃，增益10.00，霧化氣壓力35.0 kPa，駐留293 ms，相對駐留110%。

1.3 實驗方法

1.3.1 標準溶液配制 利用電子天平(精確至 0.000 1 g)稱取氟氯蟲雙酰胺原藥0.010 2 g(精確至0.000 1 g)，移至1 000 mL容量瓶里，加入一定量乙腈溶解，在超聲波水浴中溶解20 min后，冷卻至25 ℃，加入乙腈，搖勻。然后制備100 mg/L試驗儲備液，用移液槍(1 000 μL)吸取1 mL溶液移至 100 mL 容量瓶中，加入乙腈至刻度線，得到1 mg/L氟氯蟲雙酰胺標準溶液。冷藏至4 ℃存放。

1.3.2 試樣溶液配制 利用電子天平(精確至 0.000 1 g)稱取5%氟氯蟲雙酰胺懸浮劑0.200 0 g(精確至0.000 1 g)，移至100 mL容量瓶中，加入一定量乙腈溶解，輔助超聲波水浴溶解20 min，冷卻至25 ℃。加入乙腈，搖勻，制備100 mg/L試驗儲備液；用移液槍(1 000 μL)吸取1 mL溶液移至 100 mL容量瓶中，加入乙腈至刻度線，得到1 mg/L氟氯蟲雙酰胺樣品溶液。冷藏至4 ℃存放。

1.3.3 測定 用0.22 μm濾膜過濾制備的藥物溶液，按上述儀器操作方法，儀器空跑1 h后，開始進入多針標準樣品溶液。直到前后2針樣品豐度變化<1%后，按標樣、試樣、試樣和標樣的順序注入。用外標法定量，得到氟氯蟲雙酰胺色譜圖，見圖2。

圖2 氟氯蟲雙酰胺色譜圖Fig.2 Chromatogram of fluchlordiniliproleA.標樣；B.5%氟氯蟲雙酰胺懸浮劑，質量濃度均為1 mg/L

1.4 計算

將試驗樣品和標準樣品在儀器檢測的峰面積取平均值，試驗樣品中氟氯蟲雙酰胺質量分數(W2，%)按照下式計算。

式中A1———氟氯蟲雙酰胺標樣峰面積；

A2———試樣中氟氯蟲雙酰胺峰面積；

M1———氟氯蟲雙酰胺標樣稱樣量，g；

M2———試樣藥品稱重量，g；

W1———氟氯蟲雙酰胺標樣的質量分數，%。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的優化

取1 mg/L 的氟氯蟲雙酰胺標準溶液作為實驗對象，比較了乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水、乙腈-0.1%氨水和甲醇-水作流動相時對本藥品色譜分離效果的不同。結果表明，甲醇-水與乙腈-水相比，峰型較差且EP分離度較?。灰译?0.1%氨水出現雙頭峰且嚴重拖尾，乙腈-水與乙腈-0.1%甲酸水峰型相似，但豐度較低且色譜峰拖尾。采用乙腈-0.1%甲酸水溶液作流動相時，儀器響應值更高，峰形更好；故為了得到更好的峰形，提高響應值，在適當的時間檢測出樣品，最終選擇了乙腈-0.1%甲酸水溶液作為流動相，且在本流動相的前提下，優化了流動相水-0.1%甲酸水的體積比，結果見表1。

表1 乙腈和0.1%甲酸水溶液體積比對保留時間以及峰面積的影響Table 1 Effect of volume ratio of acetonitrile and 0.1%formic acid on retention time and peak area

2.2 質譜條件的確定

在電噴霧離子源模式中，在質荷比0～800的范圍內對1 mg/L氟氯蟲雙酰胺的標樣進行正負離子全掃描，負離子模式下氟氯蟲雙酰胺檢測出強響應峰，然后切換至SIM離子檢測通道，找到被檢測離子的m/z為 519.8，繼續對毛細管電壓、碰撞誘導解離電壓等檢測標準進行調校，最后以1.2.2節質譜條件為準。

2.3 方法線性相關性測定及檢出限

通過計算，用100 mg/L氟氯蟲雙酰胺母液分別配制為0.01，0.02，0.05，0.1，0.2，0.5，1 mg/L的稀釋工作溶液，在優化后的色-質兩譜條件下進樣，橫坐標為標樣的質量濃度(x，mg/L)，縱坐標為檢測出的峰面積(y)繪制線性關系曲線，得到氟氯蟲雙酰胺線性回歸方程為y=4.38×106x-14 462.92，R2=0.999 5。氟氯蟲雙酰胺在0.01～1 mg/L這個范圍內，線性關系良好(圖3)。

圖3 氟氯蟲雙酰胺標準溶液線性關系Fig.3 Linear relationship standard solution offluchlordiniliprole

根據國家標準，被測對象的檢出限(LOD)和定量限(LOQ)在信噪比為3和10的條件下進行估算。三氟嘧磺草胺的最低檢測限約為8.0×10-4mg/L，定量限約為2.7×10-3mg/L。

2.4 測定方法精密度

將工作溶液平均分為5個批次稱量，后利用已調較好的儀器參數進樣檢測。檢測結果顯示，5%氟氯蟲雙酰胺懸浮劑的標準偏差為0.031，變異系數為0.63%，符合CIPAC(國際農藥分析協作委員會)的標準規定(<1.71%)，精密度優異。

表2 5%氟氯蟲雙酰胺懸浮劑精密度測定Table 2 Precision determination of fluchlordiniliprole 5%SC

2.5 測定方法準確度

將已知含量為5%的氟氯蟲雙酰胺懸浮劑試樣分為5份，準確稱取每份，分別移入50 mL容量瓶中，每份加入確定含量的氟氯蟲雙酰胺標準溶液，根據上述裝置的操作條件進行測定。由表3可知，氟氯蟲雙酰胺的回收率在97.75%～104.79%之間，平均回收率為99.7%。

表3 5%氟氯蟲雙酰胺懸浮劑準確度測定Table 3 Accuracy determination of fluchlordiniliprole 5% SC

3 結論

本實驗探尋了在高效液相色譜-串聯質譜的技術手段下5%氟氯蟲雙酰胺懸浮劑的常量分析方法。本研究檢測手段為：流動相選用V乙腈∶V0.1%甲酸水=70∶30，流速調整為0.4 mL/min，色譜柱溫度 30 ℃，通過一級質譜ESI離子源負離子模式掃描得出質荷比為519.8時為強有效峰。本分析方法的線性相關性公式為y=4.38×106x-14 462.92，線性相關系數0.999 5，標準偏差為0.031，變異系數為0.63%，添加回收率在97.75%～104.79% 之間，平均回收率為99.7%，最低檢測限約為8.0×10-4mg/L，定量限為2.7×10-3mg/L。本實驗結果表明，上述儀器操作條件簡易便利，藥品檢測保留時間適宜，精密度準確度優異，檢出限低，靈敏度強，可以作為檢測5%氟氯蟲雙酰胺懸浮劑中有效成分較為合適的方法。