三葉青的化學成分及臨床應用的研究進展

柴巧蓮 鄒振興 彭海霞 伍維高 王德太

（1.湖南環境生物職業技術學院，湖南 衡陽 421005；2.衡陽伊源牧業有限公司，湖南 衡陽 421200）

三葉青，顧名思義，是一個葉柄上長著三片葉子的草本植物，屬于葡萄科植物，蔓生，善攀巖[1]。三葉青喜歡陰涼的環境，多生于我國南方層林中，國外未見報道有生長，為我國獨有的物種。據《本草綱目》記載，三葉崖爬藤性涼、味微甘、辛，清熱解毒、活血祛風[2]。近年來，還有三葉青對于新冠肺炎有效的報道，而在中醫治療的方劑之中，三葉青就以中醫藥材的其中一味被納入[3]。本文對國內外三葉青相關文獻進行探討與分析，對三葉青的主要化學成分、藥理作用、臨床應用進行歸納和總結。

1 三葉青的主要化學成分探討

三葉青的藥理作用取決于其所含的化學成分，文獻對于三葉青化學成分的研究可見諸國內外權威媒體。研究發現三葉青含有多酚類化合物、多糖化合物、三萜及甾體類化合物等多種成分，多酚類化合物包括黃酮類和酚酸類化合物等成分[4]，輕鏈脂肪酸、單萜和倍半萜及含氧衍生物都是揮發油的重要成分。現在根據文獻探索分述如下。

1.1 黃酮類化合物

20 世紀80 年代首次從三葉青里分離出黃酮類化合物[5]；黃酮類化合物中的茶多酚和大豆異黃酮能抑制腫瘤細胞的生長，并促進腫瘤細胞轉向正常細胞轉化。不同產地的三葉青黃酮類物質含量也不相同，阮明穎[6]采集中國大部分地區的三葉青，分別進行塊根和莖葉黃酮類化合物成分檢測，發現，總體三葉青塊根黃酮類化合物含量略高于莖葉，不同地區莖葉部分總黃酮含量以浙江麗水最高、云南呈貢最低，不同地區塊根總黃酮含量以廣西田林最高，以云南呈貢最低。因此臨床醫師可以根據三葉青產地和患者病情酌情增減藥量。

1.2 酚酸類化合物

酚酸類化合物也是多酚類化合物的一類。三葉青所含的酚酸類化合物通過抑制腫瘤細胞增殖、調節機體的免疫功能以及增強化療藥物的作用等途徑發揮腫瘤抑制功能。Wang[7]對中國西南喀斯特山區重要食用和藥用植物的生物活性化合物篩選2019、2020 年的持續研究過程中，對三葉青地上部分（APTH） 進行了可溶性環氧化物水解酶（SEH） 和一氧化氮合酶（NOS）抑制的植物化學研究。報告了APTH 中37 種成分的分離和結構鑒定，其中包括酚酸類化合物丁香酸、對水楊酸、香草酸、異香草酸等，有望成為三葉青抗腫瘤藥物的研究突破口。

1.3 三萜及甾體類化合物

三萜及甾體類化合物在三葉青中含量不多，三萜類化合物中，蒲公英萜、二氫青蒿素乙醚及香樹脂醇存在于地上部分，而胡蘿卜苷、菜油甾醇和豆甾醇則存在于塊根中；甾體類化合物中β-谷甾醇在三葉青地上部分和塊根部分均可以檢測，而麥角固醇則僅可以在三葉青地上部分可以檢測。雖然此類物質在植物中存在很少，檢測難度和提取較為不易，但是仍可以根據分子結構人工合成，或者通過擴大種養植規模、研發提純儀器來完善。

1.4 脂肪酸和揮發油類化合物

脂肪酸和芳香酸屬于三葉青的羧酸成分，芳香酸是其中容易揮發的成分[9]。三葉青脂肪酸在其石油醚萃取物中占有很大比例，有研究表明[10]，三葉青用石油醚萃取3 次后所得的16 個化合物樣本中，脂肪酸樣本占50%。研究表明[11]，三葉青塊根中揮發油有2-葵烯等，其莖葉中揮發油成分主要為2-甲基-1-苯丙醇、二乙二醇單硬脂酸酯等。揮發油具有很好的藥理作用，酯類是天然的食品添加劑，其他還有用作化妝品香料、表面活性劑等作用。

1.5 多糖化合物

多糖類也是三葉青重要的活性化合物，是三葉青糖類化合物中的一種。多糖分子量多達幾萬乃至幾百萬，是構成生命體的基本物質，對于維持生命有重要作用[12]。一項對三葉青多糖的抗氧化活性的研究表明，三葉青多糖抗氧化能力僅次于維生素C，而高于黃芪和枸杞[13]。三葉青多糖化合物具有抗氧化性、清熱解毒、抗病毒、提高免疫功能等多種用途[14]。

此外三葉青還含有維生素、微量元素、氨基酸、兒茶素等多種有效成分[5]，近年來還發現新的成分，比如1-O- 反式對羥基肉桂酰基-2′-O-反式咖啡酰龍膽二糖等[15]。

2 三葉青的藥理作用

三葉青對于腫瘤、肝炎都有很好的治療作用，而且具有降血脂降血糖、去辣椒引起的上火、美容祛斑、改善腺體分泌等多種功能，現在分述如下。

2.1 三葉青的抗肝臟損傷作用

肝病在我國屬于常見病和多發病，西藥對肝病的治療效果常常并不理想，肝臟疾病時，食欲不振，反酸噯氣等，此時不管是扶肝臟正，還是健脾都可以讓疾病向好的方向轉化，三葉青此刻就扮演著養肝護脾的功效。例如免疫性肝臟損傷是由免疫應答以及免疫應激反應引起的肝損傷。三葉青抗炎平衡免疫性肝損傷小數體內Treg/Th17 的比值，使Treg 介導的炎癥抑制反應增強，使Th17 介導的炎癥反應減少，使炎癥抑制因素大于炎癥反應因素，保護肝臟免于免疫性肝損傷[16]。三葉青抗肝臟損傷的功能，有可能還與其抗氧化功能相關。周新明[17]用護肝透毒湯加減治療慢性乙肝，結果顯示，加入三葉青的方劑治療組治愈、好轉率顯著高于其他兩組。認為三葉青能抗肝炎病毒、護肝，恢復肝功能，提升A/G 比值等作用。

2.2 三葉青的抗腫瘤作用

三葉青可以誘導腫瘤細胞死亡以及提高機體對腫瘤細胞的免疫力具有重要作用[18]。三葉青提取物在體內和體外均有抗腫瘤活性，三葉青黃酮類化合物能夠抑制非小細胞肺癌A549 的增殖，促進其凋亡，保護脂多糖誘導的老年小鼠急性肺部損傷，黃酮類化合物還可以通過調節Wnt/β-catenin 信號系統抑制結腸癌細胞增殖[19]。這些都表明三葉青提取物在腫瘤藥物的研發中存在的研究價值，有可能成為腫瘤領域的一個發展方向。

2.3 三葉青的抑菌作用

三葉青具有很好的抑菌作用，對于大腸埃希氏菌引起的腸胃炎具有治療作用[20]。舒成等人[21]運用不同劑量的提取物對表皮葡萄球菌的抑制作用，結果顯示，三葉青提取物在300 mg/L 到1200 mg/L 時，抑菌效果隨著劑量的增加而增加，充分顯示了三葉青提取物的抑菌效能。

2.4 三葉青的抗炎作用

三葉青對于炎癥疾病具有一定的治療效果，抗炎物質主要是黃酮類、酚酸類、多糖類成分[22]，黃酮類植物存在于很多藥用植物中，具有很好的抗炎作用。研究表明[23]，在體外，以黃酮類為主的三葉青提取物通過減少一氧化氮、誘導型一氧化氮合酶和環氧合酶的含量，來阻止細胞的炎癥反應。在線粒體內暴露的脂多糖也會導致氧化損傷, 以黃酮類為主的三葉青提取物減輕了線粒體損傷，減少了氧積累，恢復了谷胱甘肽水平[24]。結論認為以黃酮類為主的三葉青提取物可幫助減輕炎癥引起的損傷。研究認為，三葉青抗炎作用主要體現在以下幾個方面：三葉青通過調控體內炎性因子、增強增加抗炎因子而發揮抗炎作用；三葉青通過調整炎癥相關蛋白來發揮抗炎作用，例如，在抗COPD 實驗中，三葉青抗炎降低模擬COPD 肺部MMP-9 和TIMP-1 等炎性蛋白的表達，從而達到印制COPD 炎性癥狀的目的；三葉青阻斷炎性通路，抑制細胞炎癥反應[25]。總之，三葉青抗炎作用機制為抑制炎癥因子分泌、增加抗炎因子分泌、降低細胞炎性蛋白的表達、阻斷炎癥通路的激活而發揮抗炎作用[26]。

2.5 三葉青的其他作用

實際上三葉青除了上述功能之外，還具備其他的一些功能，例如調節人體免疫功能等。

2.5.1 三葉青免疫調節作用

三葉青提取物具有免疫調節作用。Gai 等人[27]發現三葉青乙酸乙酯提取物在免疫性肝損傷小鼠模型中可以調節小鼠的免疫功能，且不同劑量對免疫功能調節的程度也不一樣。研究表明[28]，黃酮類化合物具有重要的免疫調節作用，三葉青含有豐富的黃酮類物質，因此也具有免疫調節作用。

2.5.2 三葉青降血糖作用

植物多糖是純天然、無毒副作用的降低血糖物質，如聚合多糖、南瓜多糖等，研究發現，三葉青多糖對模擬糖尿病小鼠具有降低血糖的作用，原因可能為三葉青多糖作用于小鼠胰島細胞，促進行小鼠胰島素的釋放，從而使血糖濃度降低。Ru 等人[29]從三葉青藤葉中純化出一種新的多糖（THDP-3）。在抗糖尿病實驗中，表明THDP-3 在治療機制研究中具有很大潛力。此外，研究者使用THDP-3 的降血糖活性結果表明，該化合物可以作為潛在的抗糖尿病藥物。

2.5.3 三葉青降血脂作用

三葉青多糖類對降血脂有一定的作用。Ru等人[30]研究了超聲波- 酶法提取三葉青多糖（THP） 的工藝條件、單糖組成及抗氧化、降血脂活性。根據FRAP 法、DPPH 法和羥自由基清除法進行的總抗氧化能力測定，THP 顯示出較強的抗氧化活性，使氧化作用的丙二醛（MDA）降低，長鏈脂肪合成增加、短鏈脂肪合成減少，改善患者的血脂構成，預防高脂飲食（HFD）誘導的高脂血癥。

2.5.4 抗神經、細胞毒性

三葉青不管是在體內或體外都有抗神經毒和抗細胞毒作用。Chu 等人[31]研究發現，三葉青所含的青黃酮可以改善谷氨酸誘導的神經毒性。谷氨酸又稱為α- 酮戊二酸，廣泛存在于谷物中，而過量食用谷氨酸鈉則引起腺體分泌減少等阿托品化的不良反應，因此對于性腺也是不利的，民間曾經有動物不宜吃得過飽會影響受孕的說法。三葉青則可以抵抗谷氨酸類物質的神經毒性，改善谷氨酸過量的臨床癥狀。糖氨基甲酸乙酯（EC） 作為廣泛存在于發酵食品中的致癌物，其細胞毒性與氧化應激有關[32]。天然來源的多糖由于其抗氧化能力在過去引起了人們的極大關注。

3 三葉青臨床應用研究

三葉青的藥理作用使其在臨床中藥治療過程中得以廣泛應用。三葉青對于體內大部分器官都有作用。

3.1 三葉青治療癌癥的應用研究

三葉青黃酮類成分是其抗癌的主要成分。呂曉皚等人[33]研究三葉青軟堅散結抗癌方劑治療乳癌的臨床效果，結果顯示，含有三葉青方劑的抗癌藥在治療完全緩解率明顯較對照組好。魏克民等人[34]給120 例惡性腫瘤患者服用含三葉青提取物的藥片金芪片90 天，結果顯示總有效率78.33%，提示三葉青對于惡性腫瘤的治療作用得到了臨床驗證。

3.2 三葉青治療急性支氣管炎的臨床研究

劉璐等人[35]用麻杏石甘湯加減治療小兒急性支氣管肺炎，麻杏石甘湯劑中加入三葉青，結果顯示治療效果較好，提示三葉青對于急性支氣管肺炎的治療有效性。

3.3 三葉青其他臨床應用研究

在2019 年末爆發的新型冠狀病毒肺炎給整個人類帶來了巨大的災難，給人類的生命安全帶來巨大影響，有人提出可以利用中西醫結合治療方式來進行治療，后來何欽等[36]治療2019 年末初發的新冠肺炎，采用中西醫結合的方式治療取得了一定的效果，其中中藥方劑中的三葉青中藥功能為清熱解毒，作為治療新冠肺炎中藥的一劑重要藥材使用，對于當時治療人類疾病起到了可見的作用。三葉青還被用于治療常見的婦科疾病[37]、治療小兒外感發熱[38]、還可以抗精神病的焦慮、抑郁等癥狀等。

4 三葉青毒性實驗研究

由于三葉青可以治療多種疾病，乃至癌癥，被民間稱作“藥王”。俗話說，是藥三分毒，三葉青也不例外，三葉青的活性成分是生物堿等，而過多食用也會造成對機體的毒性作用。在臨床應用時常常先在動物體內做實驗，然后在人體做實驗。動物實驗表明[39]，三葉青的地上部分提取物（THAA） 及三葉青粗提物灌胃給藥最大耐受劑量分別是日用量的360 倍和321.6 倍，表明三葉青治療量較為安全。三葉青藤葉配方顆粒的小鼠急性毒性實驗則表明[40]，小鼠灌胃給藥最大耐受劑量是日常治療劑量的121.6 倍。動物實驗表明，雖然三葉青有較好的治療作用，但是需要注意其毒副作用，需要在醫師指導下使用。

5 結語與展望

三葉青作為傳統的藥物資源，從古至今都發揮著巨大作用。三葉青具有免疫調節、抗癌等功用，還具有抗肝損傷、抗氧化、降低血糖和降低血脂的功效。臨床上被用作多種疾病的主要用藥和輔助用藥，并取得了較好效果。近年來，隨著新冠肺炎疫情的反復，價格昂貴的三葉青引起了人們的高度重視，對于三葉青黃酮類化合物、酚酸類化合物、多糖類化合物的研究也見諸媒體。三葉青所起到的作用是有限的，而且多數三葉青是野生的，種養難度也很高。需要去采摘，我們相信未來通過對三葉青的不斷深入研究，一定能夠將三葉青從野生變為人工種養，以及先進的加工提純方法，或者可以合成效果類似的物質，讓三葉青更好造福人類。