非心源性腦梗死的發生、發展與血清miRNA-145、miRNA-210水平的相關性

徐 亮，石 瑜，王廣軍△

江蘇省徐州市腫瘤醫院：1.重癥醫學科；2.神經內科，江蘇徐州 221000

腦梗死的常見誘因為動脈粥樣硬化。非心源性腦梗死為常見類型，包括粥樣硬化斑塊脫落、肺靜脈血栓或凝塊等所引起的腦梗死，對患者生命有嚴重威脅。早期干預對改善患者預后具有重要價值[1-2]。微小RNA(miRNA)為內源性非編碼的小RNA分子，在真核生物中廣泛存在，能調節基因表達。較多臨床研究指出，miRNA可調控中樞神經，在多種腦血管疾病中發揮重要作用，提示miRNA可作為腦血管病領域診療的新方向[3-4]。本研究通過檢測非心源性腦梗死不同發展程度患者血清miRNA-145、miRNA-210水平并探討其與病情的相關性，旨在為非心源性腦梗死的診治提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 經本院醫學倫理委員會批準，選取2019年3月至2021年10月本院收治的106例非心源性腦梗死患者作為研究組，選取同期40例體檢健康者作為對照組。研究組患者住重癥監護病房。研究組納入標準：符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南》[5]中關于非心源性腦梗死的標準，分型為非心源性腦梗死，且經MRI等影像學檢查確診。排除標準：合并其他惡性腫瘤；不配合有關檢查；合并其他血管相關疾病；存在精神疾病或意識障礙。采用美國國立衛生研究院卒中量表(NIHSS)評分[6]對納入的患者進行分組：NIHSS評分不足4分作為輕度卒中組，共32例；4～15分作為中度卒中組，共45例；評分超過15分作為重度卒中組，共29例。各組性別、年齡、體質量指數(BMI)、血壓等基本資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 各組一般資料比較

1.2方法 采集各組受試者空腹靜脈血備用。炎癥因子水平檢測：使用酶聯免疫吸附試驗檢測患者血清白細胞介素-10(IL-10)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平，嚴格按試劑盒說明書進行操作。血清miRNA-145、miRNA-210水平檢測：采用實時熒光定量PCR檢測miRNA-145、miRNA-210水平。(1)提取血清總RNA。使用RNA提取試劑盒(來源于QuantoBio)從血清中將RNA提取，按試劑盒提供的說明書對血清總RNA進行提取并純化，使用紫外分光光度計檢測260 nm處吸光度值并計算RNA水平。(2)反轉錄。根據miScritpt Ⅱ反轉錄試劑盒說明書操作，反轉錄合成cDNA；總反應體系為20 μL，反應條件為于37 ℃下反應1 min，95 ℃下反應5 min；使用無酶水對其稀釋并放于冰箱中冷凍保存。(3)實時熒光定量PCR。由MRC 基因公司設計合成引物，按說明書配制反應混合物，各反應體系20 μL，使用熒光定量PCR儀(羅氏，型號：LightCycler480)；PCR反應條件為95 ℃下預變性30 s，95 ℃下反應5 s，再于60 ℃下反應30 s，重復40個循環后擴增，95 ℃下反應15 s，60 ℃下反應1 min，再于95 ℃下反應15 s繪制溶解曲線。各樣品設置3個復孔，采用2-ΔΔct法計算miRNA-145、miRNA-210的相對表達水平。

2 結 果

2.1各組炎癥因子水平比較 輕、中、重度卒中組IL-10、TNF-α水平均高于對照組(P<0.05)；重度卒中組IL-10、TNF-α水平均高于輕、中度卒中組(P<0.05)。見表2。

表2 各組炎癥因子水平比較

2.2各組血清miRNA-145、miRNA-210水平比較 輕、中、重度卒中組血清miRNA-145、miRNA-210水平均高于對照組(P<0.05)；重度卒中組miRNA-145、miRNA-210水平均高于輕、中度卒中組(P<0.05)。見表3。

表3 各組血清miRNA-145、miRNA-210水平比較

2.3血清miRNA-145、miRNA-210診斷非心源性腦梗死的效能分析 經ROC曲線分析，miRNA-145診斷非心源性腦梗死的曲線下面積(AUC)為0.764，靈敏度、特異度分別為79.2%、62.5%；miRNA-210診斷非心源性腦梗死的AUC為0.784，靈敏度、特異度分別為69.8%、75.0%。見表4和圖1。

圖1 血清miRNA-145、miRNA-210診斷非心源性腦梗死的ROC曲線

表4 血清miRNA-145、miRNA-210診斷非心源性腦梗死的效能分析

2.4患者血清miRNA-145、miRNA-210水平與NIHSS評分的相關性 經Spearman相關分析顯示，血清miRNA-145、miRNA-210水平與患者NIHSS評分均呈正相關(r=0.457、0.362,P<0.001)。見圖2。

圖2 血清miRNA-145、miRNA-210水平與NIHSS評分的相關性分析

3 討 論

腦梗死是由多種原因導致的腦部血液循環障礙，局部腦組織因缺血缺氧而出現壞死，繼而表現出相應神經功能缺損。腦梗死為常見的腦血管疾病，其中多數為非心源性腦梗死，非心源性腦梗死發病迅速且進展快，具有較高的發病率、復發率、致殘率與病死率[7-8]。

腦梗死的發生、發展與機體炎癥反應、免疫功能紊亂等有關。miRNA有轉錄后調節功能，在細胞受刺激后參與激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B等腦梗死相關信號途徑與免疫功能調控[9]。多數miRNA為JAK激酶/信號轉導和轉錄激活因子途徑中的重要調控因子，核因子κB為多數炎癥因子的轉錄因子，激活后生成大量IL-10、TNF-α等炎癥細胞因子并激發炎癥反應，同時產生抗炎因子使抗炎與促炎反應紊亂。IL-10/TNF-α可反映機體免疫紊亂狀態，比值越大提示機體抗炎反應越強烈。本研究中輕、中、重度卒中組患者血清IL-10、TNF-α水平均高于對照組，且重度卒中組IL-10、TNF-α水平高于輕、中度卒中組，可能是由于本研究納入的高齡患者免疫功能低下，且部分血標本留取時間點錯過了TNF-α分泌高峰，患者處于抗炎關鍵階段等[10-11]。輕、中、重度卒中組患者IL-10、TNF-α水平高于對照組，說明腦梗死患者體內炎癥反應較為嚴重。

miRNA廣泛分布于真核細胞中，是非編碼的小分子RNA。目前臨床已證實人類基因組中有超過400種miRNA與癌癥有關，miRNA水平與腫瘤生物學特征關聯，可調控基因表達以發揮原癌、抑癌基因作用，在腫瘤發生、發展中具有重要作用[12-13]。近期有研究者對miRNA在腦梗死發生、發展過程中的調控作用進行研究，在與腦梗死相關的循環miRNA實驗中經基因芯片發現miRNA表達有所差異[14]。miRNA-145為少數在5個時間點上升的miRNA。目前已證實miRNA-145在乳腺癌、食管癌等多種腫瘤中表達異常，可通過調控信號通路以發揮抑癌作用[15]。miRNA-210在腦缺血后有一定表達異常，研究顯示，miRNA-210能促進腦缺血后血管新生過程，與腦梗死病情發展有密切關系[16]。本研究對非心源性腦梗死不同程度患者的血清miRNA-145、miRNA-210水平進行研究，結果顯示重度卒中組患者miRNA-145、miRNA-210水平顯著高于輕、中度卒中組患者。提示miRNA-145、miRNA-210可作為非心源性腦梗死的有效生物標志物，用于評估病情嚴重程度[17-18]。ROC曲線分析顯示，miRNA-145診斷非心源性腦梗死的AUC為0.764，靈敏度、特異度分別為79.2%、62.5%；miRNA-210診斷非心源性腦梗死的AUC為0.784，靈敏度、特異度分別為69.8%、75.0%，說明血清miRNA-145、miRNA-210水平在診斷非心源性腦梗死的靈敏度與特異度方面具有一定優勢，提示這2項指標可作為判斷非心源性腦梗死的無創指標[19-20]。本研究通過Spearman相關性分析，研究組血清miRNA-145、miRNA-210水平與NIHSS評分呈正相關，說明miRNA-145、miRNA-210有助于對腦梗死患者預后及炎癥反應狀態進行判斷。

綜上所述，非心源性腦梗死患者血清miRNA-145、miRNA-210水平顯著上升，可反映機體炎癥反應狀態，與腦梗死發生、發展密切相關，可為有效預防、診療非心源性腦梗死提供參考依據。