呼吸道病原體檢測(cè)平臺(tái)應(yīng)用進(jìn)展*

周承勃森，賈 紅 綜述，鞠長(zhǎng)燕 審校

1.西南醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，四川瀘州 646000；2.廣東省深圳市南山區(qū)疾病預(yù)防控制中心，廣東深圳 518000

呼吸道感染(RTIs)是臨床感染性疾病的主要死因[1-2]。呼吸道感染在2019年世界常見死亡原因中排名第四，造成了全球超過(guò)290萬(wàn)人的死亡[3-4]。近年來(lái)，呼吸道感染新發(fā)病原體不斷出現(xiàn)，從嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS-CoV)、中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)、甲型流感病毒 H7N9 亞型，到嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合征冠狀病毒2(SARS-CoV-2)，新型呼吸道感染病原體給公共衛(wèi)生防控帶來(lái)嚴(yán)峻挑戰(zhàn)的同時(shí)，也給社會(huì)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[5-7]。

了解呼吸道感染的病原學(xué)，并對(duì)病原體進(jìn)行早期、快速、準(zhǔn)確的篩查對(duì)呼吸道感染性疾病的控制至關(guān)重要[8]。由于傳統(tǒng)的檢驗(yàn)方法在進(jìn)行呼吸道病原體檢測(cè)時(shí)檢測(cè)速度慢(2～5 d)、通量低，以及在面對(duì)呼吸道未知微生物時(shí)存在局限性，高通量的檢驗(yàn)方法得以發(fā)展[9-10]。有研究表明，呼吸道感染高通量檢測(cè)技術(shù)不僅能實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)，還可以顯著減少抗菌藥物的使用，具有很高的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益[10-11]。近年來(lái)，呼吸道病原體檢測(cè)技術(shù)不斷創(chuàng)新，新的呼吸道病原體檢驗(yàn)平臺(tái)不斷推出[12-13]。如何選用呼吸道病原體檢測(cè)平臺(tái)以實(shí)現(xiàn)成本-效益的最大化，成為專業(yè)人員關(guān)注的問題。本文對(duì)目前常見呼吸道病原體檢測(cè)的商品化平臺(tái)進(jìn)行綜述，意在了解目前高通量呼吸道病原體檢測(cè)平臺(tái)的性能，以期為呼吸道病原體檢測(cè)平臺(tái)的臨床實(shí)踐提供參考。

1 基于傳統(tǒng)呼吸道病原體檢測(cè)技術(shù)的檢測(cè)平臺(tái)

1.1基于免疫法的檢測(cè)平臺(tái) 免疫化學(xué)檢測(cè)法是利用免疫學(xué)抗原抗體反應(yīng)，以熒光素、酶、放射性核素或電子致密物質(zhì)等對(duì)抗原或抗體加以標(biāo)記，對(duì)某些蛋白質(zhì)(抗原或抗體)進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)[14]。ArcDia公司的mariPOC是一種基于免疫化學(xué)檢測(cè)法的雙光子熒光激發(fā)檢測(cè)系統(tǒng)，其原理是待檢抗原先被特異性抗體捕獲，帶有熒光標(biāo)記的抗體再與其結(jié)合，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)病原體檢測(cè)[15]。mariPOC具有完全自動(dòng)、可現(xiàn)場(chǎng)使用、約20 min自動(dòng)報(bào)告的特點(diǎn)[15]。其呼吸道面板(respi)可檢測(cè)來(lái)自上、下呼吸道的9種臨床相關(guān)病原體[15]。GUNELL等[16]聯(lián)合芬蘭14個(gè)實(shí)驗(yàn)室共進(jìn)行了22 485次檢測(cè)，證明了mariPOC?respi在日常監(jiān)測(cè)中的有效性。

1.2基于多重PCR技術(shù)的檢測(cè)平臺(tái) 多重PCR技術(shù)可以同時(shí)檢測(cè)同一標(biāo)本中的呼吸道臨床常見病原體。其工作原理主要是應(yīng)用多重引物，先針對(duì)不同的病原體核酸進(jìn)行特異性擴(kuò)增，再根據(jù)不同病原體的擴(kuò)增產(chǎn)物判斷感染何種病原體[17]。市場(chǎng)上有多種基于多重PCR的呼吸道病原體檢測(cè)試劑，可同時(shí)檢測(cè)數(shù)種呼吸道病原體，適用于絕大多數(shù)型號(hào)的PCR儀，但其檢測(cè)通量不高。以下是兩種試劑與儀器配套的一體化PCR檢測(cè)平臺(tái)，其檢測(cè)通量較高，可同時(shí)檢測(cè)十幾種呼吸道病原體。

1.2.1多重?zé)晒釶CR平臺(tái) 多重?zé)晒釶CR技術(shù)是在多重PCR 技術(shù)的基礎(chǔ)上，加入了幾種不同熒光基團(tuán)，通過(guò)檢測(cè)不同通道的熒光，實(shí)現(xiàn)對(duì)多個(gè)靶標(biāo)的實(shí)時(shí)檢測(cè)[17]。Unyvero是由Curetis 公司開發(fā)的一種基于多重?zé)晒釶CR的檢測(cè)系統(tǒng)，可對(duì)下呼吸道多重病原體與耐藥基因進(jìn)行檢測(cè)和鑒定[18]，該系統(tǒng)使用單個(gè)檢測(cè)陣列在多孔陣列膜上雜交實(shí)現(xiàn)定性擴(kuò)增檢測(cè)[19]。其配套面板包括Unyvero P50/P55。Unyvero P50可檢測(cè)17種肺炎病原體及耐藥基因[20]。Unyvero P55肺炎面板可檢測(cè)21種呼吸道病原體以及17種耐藥基因[21]。該系統(tǒng)自動(dòng)化，檢測(cè)全程大約需要5 h[20-21]。PAPAN等[20]報(bào)道，與培養(yǎng)相比，Unyvero P50的總體特異性較高，對(duì)于耐藥基因的檢測(cè)，75%與抗生素圖譜一致。

1.2.2多重反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(多重RT-PCR)結(jié)合毛細(xì)管電泳平臺(tái) 多重RT-PCR結(jié)合毛細(xì)管電泳，即在多重RT-PCR的產(chǎn)物分析過(guò)程中，以彈性石英毛細(xì)管為分離通道，以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，依據(jù)樣品中各組分之間分配行為差異實(shí)現(xiàn)分離的分析方法[22]。Beckman Coulter公司開發(fā)的GeXP是一種多重RT-PCR結(jié)合自動(dòng)毛細(xì)管電泳的商品化系統(tǒng)。使用GeXP，能夠在一根試管中對(duì)最多達(dá)30個(gè)基因的表達(dá)譜進(jìn)行差異評(píng)估，其周轉(zhuǎn)時(shí)間低于5 h[23]，GeXP檢測(cè)成本較低，每次綜合檢測(cè)的成本約為8美元[24]。LUO等[25]的研究表明GeXP檢測(cè)中各病毒檢測(cè)的靈敏度與近年來(lái)報(bào)道的實(shí)時(shí)PCR方法相似。

1.3基于多重連接探針擴(kuò)增(MLPA)技術(shù)的檢測(cè)平臺(tái) MLPA是一種可以同時(shí)定量檢測(cè)多個(gè)靶基因的方法。MLPA 技術(shù)的基本原理是通過(guò)合理設(shè)計(jì)針對(duì)靶序列片段的2個(gè)特異探針，結(jié)合高度特異的雜交反應(yīng)，并對(duì)雜交后的連接產(chǎn)物進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增和毛細(xì)管電泳，最后比較擴(kuò)增片段長(zhǎng)度或判定擴(kuò)增片段的有無(wú)，實(shí)現(xiàn)對(duì)未知靶序列的鑒定[26]。QIAGEN公司的RespiFinder 是一種基于MLPA技術(shù)的多參數(shù)測(cè)試面板，它通過(guò)多重連接探針擴(kuò)增和電泳分析，通過(guò)對(duì)每個(gè)探針根據(jù)其特定長(zhǎng)度進(jìn)行識(shí)別，完成病原體檢測(cè)[27]。RespiFinder Smart 面板可以同時(shí)分析15例患者標(biāo)本，區(qū)分22種病原體，其運(yùn)行時(shí)間低于6 h[28]。REIJAN等[27]的研究表明與細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果相比，RespiFinder檢測(cè)的特異度和靈敏度均高于92%。多項(xiàng)研究結(jié)果表明，該方法的靈敏度與單倍實(shí)時(shí)RT-PCR相當(dāng)，人工操作時(shí)間比RT-PCR減少了一半以上[27-29]。

1.4基于傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)的呼吸道病原體檢測(cè)平臺(tái)性能對(duì)比 基于傳統(tǒng)呼吸道病原體檢測(cè)技術(shù)的商品化平臺(tái)大大擴(kuò)展了檢測(cè)的通量，并縮短了檢測(cè)的時(shí)間，詳見表1。在基于傳統(tǒng)呼吸道檢測(cè)技術(shù)的檢測(cè)平臺(tái)中，免疫法的mariPOC檢測(cè)時(shí)間最短，主要用于呼吸道常見病原體的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。基于多重PCR技術(shù)的Unyvero，可實(shí)現(xiàn)對(duì)下呼吸道病原體的檢測(cè)，特別的是，它還可用于下呼吸道病原體耐藥基因的檢測(cè)。

表1 基于傳統(tǒng)呼吸道病原體檢測(cè)技術(shù)的檢測(cè)平臺(tái)的特性

2 基于生物芯片技術(shù)的檢測(cè)平臺(tái)

2.1液相懸浮芯片技術(shù)的檢測(cè)平臺(tái) 液相懸浮芯片技術(shù)也稱微球體懸浮芯片技術(shù)(SAT)，即通過(guò)在不同編碼的微球上進(jìn)行抗原抗體、酶底物、配體受體的結(jié)合反應(yīng)及核酸雜交反應(yīng)，再通過(guò)不同的激光分別對(duì)微球編碼和報(bào)告熒光進(jìn)行定性和定量檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)、核酸等多種生物大分子的多重檢測(cè)，通過(guò)微球的分類標(biāo)記，可實(shí)現(xiàn)一次對(duì)標(biāo)本中多達(dá)100個(gè)不同的目標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)[30-31]。Thermo Fisher公司的Luminex系統(tǒng)采用SAT技術(shù)。其配套檢測(cè)試劑盒包括xTAG RVP、NxTAG RPP。xTAG RVP適用于48個(gè)樣品，可同時(shí)檢測(cè)18種常見呼吸道病毒，檢測(cè)周期為5 h；NxTAG RPP適用于96個(gè)樣品，可同時(shí)檢測(cè)21種呼吸道病原體，檢測(cè)周期小于4 h[32]。目前，市售的懸浮陣列試劑盒成本較低[33]。HANSON等[34]的研究表明Luminex系統(tǒng)靈敏度高，是ELISA靈敏度的10～100倍，重復(fù)性好，可達(dá)90%以上。

2.2微流控基因芯片技術(shù)的檢測(cè)平臺(tái) 微流控基因芯片技術(shù)是微流控系統(tǒng)將不同實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)微縮在玻璃或者塑料機(jī)上，在微米級(jí)的尺度上構(gòu)建液流通道、核酸提取池、反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增池、雜交池等部件，整合了標(biāo)本處理、反應(yīng)、檢測(cè)的全部流程，從而實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)[35]。微流控基因芯片技術(shù)的微型化、高靈敏度、高通量以及低檢測(cè)時(shí)間等技術(shù)優(yōu)勢(shì)，使其在生物醫(yī)學(xué)研究中應(yīng)用廣泛[35]。

2.2.1FilmArray Bio Fire公司的FilmArray是一套基于微流控技術(shù)的商品化系統(tǒng)。FilmArray擁有的呼吸道檢測(cè)面板包括BioFire?RP、BioFire?RP2、BioFire?Pneumonia面板[36]。其中，RP面板可靶向19種病原體；RP2面板可靶向21種病原體；Pneumonia 面板可靶向32種病原體[36]。手工操作只需2 min，大約1 h即可獲得結(jié)果[36]。FilmArray單次檢測(cè)價(jià)格約為200美元，F(xiàn)ilmArray經(jīng)過(guò)FDA認(rèn)證，大量研究表明其對(duì)多數(shù)病原體的靈敏度和特異度高達(dá)95%以上[37-38]。

2.2.2GenMark GNMK公司的GenMark 同樣是基于微流控的商品化系統(tǒng)，目前已被Roche公司收購(gòu)。與傳統(tǒng)微流控設(shè)備不同的是，其病原體檢測(cè)采用二茂鐵標(biāo)記的寡核苷酸探針，它通過(guò)介質(zhì)上電潤(rùn)濕的方式改變阻抗，從而對(duì)病原體進(jìn)行檢測(cè)[39]。GenMark系統(tǒng)單次最多檢測(cè)26個(gè)標(biāo)本[40-41]。其ePlex RP面板可檢測(cè)17種呼吸道病原體，每次分析的分析時(shí)間小于2 h，單次檢測(cè)成本約90美元[39]。一項(xiàng)多中心臨床試驗(yàn)，使用BioFire RP面板作為比較方法，評(píng)估ePlex RP Panel檢測(cè)性能，ePlex RP和BioFire RP面板對(duì)所有目標(biāo)的總體一致性超過(guò)95%[42]。

2.2.3QuantStudioTM7 Flex Thermo Fisher公司的QuantStudioTM7 Flex系統(tǒng)采用集成的Taqman@(TAC)低密度微流控卡作為面板，最多可同時(shí)進(jìn)行384個(gè)個(gè)體的實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)，每個(gè)微流控卡最多可檢測(cè)8個(gè)標(biāo)本，每個(gè)標(biāo)本最多可同時(shí)進(jìn)行42種病原體的檢測(cè)[43]。在面板更新的情況下，TAC可根據(jù)研究目的修改引物/探針組，且不需要重新驗(yàn)證整個(gè)面板[43]。LIU等[44]的研究中表明，TAC的靈敏度和特異度均較高。

2.3基于生物芯片技術(shù)的檢測(cè)平臺(tái)性能對(duì)比 基于生物芯片技術(shù)的呼吸道檢測(cè)平臺(tái)相較于基于傳統(tǒng)呼吸道病原體檢測(cè)技術(shù)的平臺(tái)具有更高的準(zhǔn)確性和更快的檢測(cè)時(shí)間，詳見表2。其中，值得一提的是基于微流控基因芯片的QuantStudioTM7 Flex，其Taqman?(TAC)呼吸道病原體檢測(cè)面板可在無(wú)需驗(yàn)證面板的情況下，根據(jù)研究目的修改探針組，最多可實(shí)現(xiàn)42種病原體的檢測(cè)。

表2 基于生物芯片的呼吸道檢測(cè)平臺(tái)的特性

3 二代測(cè)序技術(shù)平臺(tái)

二代測(cè)序技術(shù)是基于PCR和基因芯片發(fā)展而來(lái)的DNA測(cè)序技術(shù)，二代測(cè)序通過(guò)在DNA復(fù)制過(guò)程中(RNA需反轉(zhuǎn)錄為cDNA)，捕捉新添加的堿基所攜帶的特殊標(biāo)記來(lái)確定目標(biāo)序列[45]。由于在二代測(cè)序中，隨著讀長(zhǎng)增長(zhǎng)，基因簇復(fù)制的協(xié)同性降低，測(cè)序質(zhì)量下降，因此，二代測(cè)序具有通量高但讀長(zhǎng)短的特點(diǎn)[46]。

3.1二代測(cè)序平臺(tái)分類

3.1.1焦磷酸測(cè)序平臺(tái) 焦磷酸測(cè)序，即在DNA聚合反應(yīng)中釋放焦磷酸(PPi)，并將焦磷酸用作特定堿基摻入的指示物，依次添加和去除4個(gè)堿基，通過(guò)檢測(cè)由發(fā)光的酶級(jí)聯(lián)釋放的焦磷酸鹽完成測(cè)序[47]。QIAGEN公司的 PyroMark采用焦磷酸測(cè)序法，Roche公司的Roche 454 在此基礎(chǔ)上采用了一種“水包油”的擴(kuò)增方法，即在擴(kuò)增時(shí)使用了包含160多萬(wàn)個(gè)光纖孔的平板，其中，每個(gè)孔是一個(gè)獨(dú)立的PCR體系，所有的DNA模板都被鏈接在孔中水油包被的一個(gè)磁珠上[48]。焦磷酸測(cè)序開拓了二代測(cè)序，但有其局限性：均聚物測(cè)序不準(zhǔn)確，添加超過(guò)5個(gè)相同的核苷酸不能有效檢測(cè)，其成本也相對(duì)較高[48]。目前，焦磷酸測(cè)序已經(jīng)被淘汰[48]。

3.1.2氫離子測(cè)序平臺(tái) 氫離子測(cè)序即克隆乳液中單個(gè)核糖核酸，然后將其放置在一個(gè)包含單個(gè)pH傳感器矩陣的半導(dǎo)體芯片上，當(dāng)DNA克隆通過(guò)合成進(jìn)行測(cè)序時(shí)，局部pH值的變化可確定測(cè)序的核苷酸[48]。Thermo Fisher 公司的Ion Torrent平臺(tái)，采用氫離子測(cè)序。在應(yīng)用中，這項(xiàng)技術(shù)檢測(cè)速度快，可以實(shí)時(shí)測(cè)序，而且成本低[49-50]。然而，有研究表明，該技術(shù)均聚物測(cè)序容易出錯(cuò)，因?yàn)樵谝粋€(gè)循環(huán)中重復(fù)使相應(yīng)數(shù)量的氫離子釋放，導(dǎo)致出現(xiàn)更高比例的電子信號(hào)[49-50]。

3.1.3邊合成邊測(cè)序平臺(tái) 邊合成邊測(cè)序采用橋式擴(kuò)增策略，即通過(guò)將單個(gè)DNA分子附著在流動(dòng)細(xì)胞上，然后將其局部擴(kuò)增成克隆簇；在接下來(lái)的測(cè)序和合成過(guò)程中，它構(gòu)建互補(bǔ)DNA，采用熒光標(biāo)記核苷酸的光學(xué)讀出，然后確定其堿基身份(A，T，C，G)[51]。在每個(gè)測(cè)序周期中，4種核苷酸之間的自然競(jìng)爭(zhēng)減少了與焦磷酸測(cè)序相比的固有偏差。因此，均聚物的測(cè)序錯(cuò)誤被這種技術(shù)克服[52-53]。Illumina公司開發(fā)了這種方法，約63%的測(cè)序工作是在該測(cè)序平臺(tái)上進(jìn)行的，此外，Illumina在所有測(cè)序儀中擁有最高的通量[54]。

3.1.4雜交與連接測(cè)序平臺(tái) 雜交與連接測(cè)序法利用DNA連接酶來(lái)連接DNA序列中給定位置的核苷酸，通過(guò)已知序列對(duì)未知的目標(biāo)DNA序列進(jìn)行堿基配對(duì)和進(jìn)行測(cè)序[55]。閱讀長(zhǎng)度是該方法的一個(gè)主要限制[56]。CG公司的Complete Genomics采用連接法測(cè)序，后期被華大基因收購(gòu)。特別的是，Complete Genomics在構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)時(shí)基因片段的兩端加了接頭，形成環(huán)狀DNA 模板。其拷貝序列采用類似滾環(huán)的擴(kuò)增方式，其單克隆球狀體也被稱為DNA 納米球，利用錨定序列與堿基單鏈熒光探針混合物在連接酶作用下連接獲得DNA 序列信息。該方法是分段進(jìn)行的，擁有較高的容錯(cuò)能力，后期的拼接也較容易[56]。

3.2基于二代測(cè)序技術(shù)的呼吸道檢測(cè)平臺(tái)性能對(duì)比 二代測(cè)序技術(shù)自焦磷酸測(cè)序以來(lái)不斷發(fā)展，目前已成為臨床常規(guī)病原學(xué)檢測(cè)技術(shù)的重要輔助手段，其檢測(cè)平臺(tái)特性詳見表3。其中，采用邊合成邊測(cè)序技術(shù)的Illumina平臺(tái)占據(jù)了大量市場(chǎng)[54]。我國(guó)的華大基因在收購(gòu)雜交與連接測(cè)序平臺(tái)Complete Genomics后，也推出了國(guó)產(chǎn)的二代測(cè)序儀。

表3 基于二代測(cè)序技術(shù)的呼吸道檢測(cè)平臺(tái)的特性

3.3二代測(cè)序技術(shù)在呼吸道病原體檢測(cè)中的應(yīng)用 (1)病原體檢測(cè)。MIAO等[57]在比較二代測(cè)序技術(shù)與培養(yǎng)對(duì)病原菌診斷效果的同時(shí)，評(píng)估抗生素暴露對(duì)檢出率的影響，結(jié)果表明，二代測(cè)序技術(shù)的靈敏性優(yōu)于培養(yǎng)，二代測(cè)序技術(shù)具有較高的病原菌識(shí)別靈敏性，且不受先前接觸抗生素的影響，因此成為一種有前景的傳染病檢測(cè)技術(shù)。LI等[58]的研究表明，二代測(cè)序技術(shù)可提供全基因組序列，幫助確定病毒亞型和血清型。(2)多重耐藥基因檢測(cè)。QUAN等[59]利用二代測(cè)序技術(shù)開發(fā)了一種靶向測(cè)序方法，這種方法快速、廉價(jià)、多路復(fù)用能力強(qiáng)，而且足夠靈活，可以靶向任何感興趣的序列，并且可檢測(cè)患者標(biāo)本中抗菌藥物的多重耐藥基因。SAHOO等[60]開發(fā)了一種基于擴(kuò)增子的高通量測(cè)序策略，與現(xiàn)有的耐藥突變基因型檢測(cè)方法相比，該方法對(duì)微小變異體的檢測(cè)更加靈敏，具有更高的多路復(fù)用能力。(3)傳染病防治。德國(guó)一名患者出現(xiàn)急性呼吸窘迫綜合征癥狀，使用PCR和分離培養(yǎng)方法檢測(cè)多種病原體均為陰性，F(xiàn)ISCHER等[61]通過(guò)二代測(cè)序技術(shù)在 50 h 內(nèi)快速確定了致病病原體是鸚鵡熱衣原體，隨后根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)引物，并使用 PCR 驗(yàn)證了檢測(cè)結(jié)果。在2019年末武漢SARS-CoV-2疫情中，研究者們通過(guò)二代測(cè)序技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對(duì)病原體的快速鑒定及病毒全基因組序列的獲取，并通過(guò)此病毒的特有基因序列，設(shè)計(jì)RT-PCR引物，生產(chǎn)了用于感染者病原學(xué)診斷的試劑盒[62]。

二代測(cè)序技術(shù)的缺陷在于：(1)實(shí)驗(yàn)結(jié)果難以解釋檢出的病原體為背景微生物還是病原微生物[63]。(2)目前進(jìn)行二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)的工作流程高度個(gè)體化，不同的操作流程僅適用于特定的感染類型或標(biāo)本類型；由于工作流程缺乏方法標(biāo)準(zhǔn)化和驗(yàn)證，容易造成人為污染，最終導(dǎo)致結(jié)果的不確定[64]。(3)中國(guó)單次標(biāo)本的成本是3 000元人民幣(約合400美元)，高于任何單一的通用方法[57]。

4 結(jié) 語(yǔ)

目前，對(duì)于醫(yī)療機(jī)構(gòu)，特別是基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)而言，因資金不足、樣本量太大不能進(jìn)行檢測(cè)，或因檢測(cè)時(shí)間、檢測(cè)結(jié)果不能滿足臨床需求的現(xiàn)象仍普遍存在[65]。未來(lái)，隨著分子診斷技術(shù)的不斷發(fā)展，呼吸道疾病病原體核酸檢測(cè)技術(shù)將朝著高通量、快速、自動(dòng)化、低成本的方向發(fā)展。本文對(duì)常見的呼吸道病原體檢測(cè)平臺(tái)進(jìn)行綜述，將有助于臨床醫(yī)師以及研究人員結(jié)合專業(yè)知識(shí)，合理選用呼吸道病原體的診斷方法，以實(shí)現(xiàn)成本-效益的最大化。