宮頸癌組織中DSG2、CENPM蛋白表達水平及臨床預后意義

鄧琦程 魯錦 楊主娟 陳穎 (蘇州大學附屬第二醫院婦產科,江蘇 蘇州 215004)

宮頸癌發病率占女性惡性腫瘤第三位,且近年來發病逐漸趨于年輕化〔1〕。雖我國在篩查技術和治療方法均已取得較大突破,但腫瘤復發及轉移仍是威脅女性生命安全的重要因素〔2〕。因此,尋找特定、有效的能夠早期評估宮頸癌預后標志物對預防和治療宮頸癌有重要意義。橋粒芯糖蛋白(DSG)2是DSG 的4 種亞型之一,主要在黏膜上皮細胞間的黏附上起重要作用〔3〕,既往已有相關研究發現,DSG2 參與多種惡性腫瘤疾病的細胞惡性轉化〔4〕。著絲粒蛋白(CENP)M 是近年發現的促癌分子,具有促進腫瘤增殖及轉移的作用〔5〕。既往有研究顯示,CENPM 上調促進肝癌或胰腺癌惡性腫瘤發展和進展〔6〕。本研究擬分析宮頸癌組織中DSG2、CENPM 蛋白表達水平及臨床預后意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年7月至2017年7月蘇州大學附屬第二醫院治療的92 例老年宮頸癌患者,年齡60～71 歲,平均(66.34±3.23)歲。收集92 份宮頸癌組織(癌變組)和癌旁組織(距腫瘤邊緣4 cm處,癌旁組),本研究已獲得醫院醫學倫理委員會批準。納入標準:①符合宮頸癌診斷標準〔7〕;②手術治療且術前未行放化療。排除標準:①伴有腦血管疾病、血液性疾病、神經系統疾病者;②臨床資料不全者。另將85 例子宮肌瘤全子宮切除術患者的正常宮頸組織作為對照組,年齡60～72 歲,平均(66.54±3.33)歲。

1.2 免疫組織化學檢測DSG2、CENPM 蛋白表達

兩組標本均經60℃熔點石蠟包埋并4 μm 連續切片后,在二甲苯脫去石蠟,再用梯度酒精脫去苯至水及蘇木素染色,采用檸檬酸修復液高溫高壓修復抗原,冷卻磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗,隨后加入按1 ∶100稀釋的一抗(產于北京中杉金橋生物技術有限公司的兔抗人DSG2 單克隆抗體)4℃孵育過夜,PBS 漂洗3 次,每次3 min,再加入二抗(產于北京中杉金橋生物技術有限公司的兔抗人CENPM 多克隆抗體)37℃孵育30 min,PBS 漂洗3 次,每次3 min,最后使用二氨基聯苯胺(DAB,DaKo 公司)顯色、蘇木素復染、樹脂膠封片,并在鏡下觀察染色情況。操作均嚴格按照SP 試劑盒說明書進行。

1.3 DSG2、CENPM 蛋白表達結果判定〔8〕DSG2陽性表達定位于細胞膜,呈黃素或棕黃色顆粒狀分布;CENPM 陽性表達主要定位于細胞核,著色呈棕黃色或黃褐色分布。免疫結果由兩位高年資的病理醫師共同完成,隨機選取30 個高倍鏡視野(×400),每視野讀200 個細胞,根據染色強度與陽性細胞百分比綜合評分。染色強度:無色、淺黃色、棕色、深褐色分別為0、1、2、3 分。陽性細胞占總細胞百分比:＜25%、26%～50%、51%～75%、＞75%分別為1、2、3、4 分。陽性細胞百分比和染色強度平均分乘積為最終得分,≥3 分為陽性表達,＜3 分為陰性表達。

1.4 隨訪 使用電話、門診復診或上門等方式進行隨訪,截止2022年7月31日或患者死亡。

1.5 統計學方法 采用SPSS23.0 軟件進行χ2檢驗、Kaplan-Meier 法、多因素Cox 比例風險回歸模型分析。

2 結 果

2.1 兩組DSG2、CENPM 蛋白表達水平比較 癌變組 DSG2、CENPM 蛋白陽性表達率〔64 例(69.57%)、62 例(67.39%)〕均明顯高于癌旁組〔27 例(29.35%)、29 例(31.52%)〕、對照組〔10 例(11.76%)、12 例(14.12%)〕,差異有統計學意義(均P＜0.001),見圖1。

圖1 DSG2、CENPM 在宮頸癌組織中表達(HE 染色,×400)

2.2 DSG2、CENPM 蛋白表達在宮頸癌患者臨床特征的關系 DSG2、CENPM 蛋白表達在宮頸癌患者年齡、病理類型、肌層浸潤深度均無明顯差異(P＞0.05);在宮頸癌FIGO 分期、分化程度、淋巴結轉移有顯著差異(P＜0.001),見表1。

表1 DSG2、CENPM 蛋白陽性表達與宮頸癌臨床病理特征的關系(n,n=92)

2.3 宮頸癌患者預后生存情況 本研究患者自出院后隨訪時間為3～78 個月,5年生存率為45.65%(42/92) 。DSG 2 陽性、陰性患者5年生存率〔28.13% (18/64)、85.71% (24/28)〕 差異顯著(χ2=26.037,P＜0.001);CENPM 陽性、陰性患者5年生存率〔27.42%(17/62)、83.33%(25/30)〕差異顯著(χ2=25.475,P＜0.001)。

2.4 不同特征宮頸癌患者預后比較 FIGOⅡ期、低分化、淋巴結轉移宮頸癌患者5年生存率明顯降低(P＜0.05),見表2。

表2 不同特征宮頸癌患者預后比較〔n(%)〕

2.5 宮頸癌患者預后多因素Cox 回歸分析 FIGOⅡ期、低分化、淋巴結轉移、DSG2 陽性、CENPM 陽性為宮頸癌患者預后危險因素(P＜0.001),見表3。

表3 宮頸癌預后多因素Cox 回歸分析

3 討 論

宮頸癌發病率僅次于乳腺癌,近年來該疾病受環境改變及性傳播疾病影響,其發病率不僅逐年升高,且逐漸趨向年輕化〔9〕,據國家癌癥中心對2015年宮頸癌統計顯示,我國年新增確診9.89 萬例,死亡3.05 萬例〔10〕。目前臨床雖通過放療、化療、手術等綜合治療有效控制疾病進展,但對于宮頸癌晚期患者而言其治療效果以及預后生存期仍不理想。相關文獻顯示,hTERT、Cep55、FoxM1 等多項因子與宮頸癌預后密切相關〔11,12〕。DSG2 基因位于第18 號染色體,由3 049 個堿基對組成,在鱗狀上皮中呈橋粒細胞形式表達,在腺上皮細胞中呈半橋粒狀,是促進腫瘤增殖和轉移的生物標志物〔13〕。CENPM 是CCAN 蛋白家族的一員,位于內層動粒上,主要在免疫系統中發揮作用〔14,15〕。目前關于CENPM 在腫瘤的研究較少,但根據Oncomine 數據庫顯示,CENPM mRNA 在乳腺癌、肺癌、淋巴瘤、肝癌等多種癌癥中顯著高表達。本研究結果顯示,DSG2、CENPM 在宮頸癌組織中表達升高,且參與宮頸癌患者惡性疾病的發生、發展。既往研究顯示,膽管癌組織中DSG2高表達率高于癌旁正常組織〔16〕。同時有研究顯示,與正常組織相比,CENPM 在乳腺癌組織上調〔17〕。本研究結果DSG2、CENPM 蛋白表達與宮頸癌預后密切相關,陽性表達提示患者預后不良。既往有關于肝移植術后肝癌復發的研究結果顯示,CENPM 高表達組總體生存時間低于低表達組〔18〕。本研究進一步證實CENPM、DSG2 在宮頸癌發生、進展中有重要作用,有望作為評估患者預后的標志物。CENPE與CENPM 均屬于CCAN 蛋白家族的一員,在有絲分裂過程中起重要作用。而既往有研究顯示,下調CENPE 可使宮頸癌腫瘤細胞的凋亡率明顯增加〔19〕。DSG2 是橋粒不可分割的組成部分,在多種癌癥中維持細胞黏附,且當DSG2 基因敲除時能抑制宮頸癌細胞的增殖、遷移和侵襲〔20〕。

綜上,宮頸癌組織中DSG2、CENPM 蛋白陽性表達增加,且FIGO Ⅱ期、低分化、淋巴結轉移的宮頸癌患者陽性表達水平更高,DSG2、CENPM 蛋白陽性表達宮頸癌患者預后更差,二者有望作為臨床診治宮頸癌的有效生物標志物。