斑籽木地上部分化學成分研究

蔣華夷，盧光衣，李怡歡，張倩茹，藤 丹，楊 銳，何紅平*

(1.云南中醫藥大學中藥學院暨云南省南藥可持續利用研究重點實驗室，云南 昆明 650500；2.云南中醫藥大學 云南省傣醫藥與彝醫藥重點實驗室，云南 昆明 650500)

斑籽木[Baliospermumsolanifolium(Burman) Suresh]為大戟科(Euphorbiaceae)斑籽木屬灌木，又名斑籽，產于亞洲南部和東南部各國，在我國主要分布于云南西南部[1]。斑籽木全株均可入藥，具有退熱、滋補、消腫、利尿、瀉下等功效，民間常用于治療哮喘、支氣管炎、黃疸、水腫、便秘、麻風、皮膚病等癥[2-3]。現代藥理學研究表明，斑籽木提取物具有免疫調節、抗菌、抗過敏、抗氧化、保肝等多種藥理活性[2]。目前，關于斑籽木化學成分的研究報道較少，已分離鑒定的化學成分主要包括二萜、苯丙素、生物堿等[2,4-5]。Ogura等[6]從斑籽木中分離得到的5個新的佛波醇酯型二萜類化合物對淋巴細胞白血病P388細胞表現出較高的細胞毒活性；Pipatrattanaseree等[7]從斑籽木中分離得到的苯丙素類化合物propioveratrone對脂多糖(LPS)誘導的RAW264.7細胞內NO的生成表現出抑制作用；作者所在課題組對斑籽木地上部分化學成分進行了研究，從其90%乙醇提取物的乙酸乙酯部位中分離得到20個化合物。為進一步闡明斑籽木的藥效物質基礎，作者采用正相硅膠柱色譜、MCI柱色譜、半制備型高效液相色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜等分離方法對斑籽木地上部分90%乙醇提取物中的化學成分進行分離純化，并對其結構進行鑒定。

1 實驗

1.1 材料、試劑與儀器

斑籽木，2019年3月采自云南省西雙版納州，經云南中醫藥大學張雪梅副研究員鑒定為大戟科斑籽木屬植物斑籽木[Baliospermumsolanifolium(Burman) Suresh]的地上部分，標本(BS-201903001)保存于云南中醫藥大學云南省傣醫藥與彝醫藥重點實驗室。

柱色譜用硅膠(80～100目、100～200目、200～300目)，青島海洋化工廠；MCI凝膠(CHP20P，75～150 μm)，日本三菱化學公司；Sephadex LH-20葡聚糖凝膠，美國GE公司；乙腈、甲醇，色譜純，上海星可高純溶劑有限公司；其余試劑均為分析純或工業純，上海泰坦化學有限公司。

Bruker AM-400型和AV-500型核磁共振波譜儀，德國Bruker公司；Hei-VAP Core HL/G3型旋轉蒸發儀，德國Heidolph公司；Agilent 1260 Infinity型高效液相色譜儀[XDB-C18色譜柱(250 mm×9.4 mm，5 μm)，二極管陣列檢測器(DAD)]，美國Agilent公司；Newstyle NP7000型半制備型高效液相色譜儀，江蘇漢邦科技有限公司；GF254型薄層層析硅膠板，青島海洋化工廠；RP-C18薄層色譜板，美國EMD Millipore公司。

1.2 斑籽木地上部分化學成分的提取與分離

取斑籽木干燥地上部分20.0 kg，粉碎后用90%乙醇浸提4次，每次3 d；合并提取液，減壓濃縮得浸膏1.6 kg；將浸膏分散于適量水中，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3次，得到石油醚部位和乙酸乙酯部位；乙酸乙酯部位減壓濃縮得到浸膏800.0 g，經硅膠(3.5 kg，80～100目)柱色譜分離，以石油醚-丙酮(1∶0～0∶1，體積比，下同)梯度洗脫，TLC監測合并相似組分，得到7個組分Fr.A～G。

Fr.A(20.0 g)經硅膠(150 g，100～200目)柱色譜分離，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯洗脫，得到3個組分Fr.A1～A3。Fr.A1經硅膠(80 g，200～300目)柱色譜分離，得到化合物Ⅶ(3.0 mg)。

Fr.B(120.0 g)經MCI柱色譜分離，以甲醇-水(60%～90%)梯度洗脫，得到6個組分Fr.B1～B6。Fr.B5(15.7 g)經硅膠(480 g，100～200目)柱色譜分離，以石油醚-丙酮[(200～1)∶1]梯度洗脫，得到7個組分Fr.B5-1～B5-7；Fr.B5-5經Sephadex LH-20凝膠柱色譜分離，以氯仿-甲醇(1∶1)洗脫，經重結晶得到化合物Ⅳ(9.4 mg)；Fr.B6經重結晶得到化合物Ⅴ(1.0 g)。

Fr.C(69.1 g)經硅膠(691 g，100～200目)柱色譜分離，以石油醚-丙酮(1∶0～0∶1)梯度洗脫，得到7個組分Fr.C1～C7。Fr.C2(13.0 g)經MCI柱色譜分離，以甲醇-水(60%～90%)梯度洗脫，得到4個組分Fr.C2-1～C2-4；Fr.C2-2經硅膠柱色譜分離，以石油醚-丙酮[(30～1)∶1]梯度洗脫，得到3個組分Fr.C2-2-1～C2-2-3；Fr.C2-2-2經Sephadex LH-20凝膠柱色譜分離，以甲醇洗脫，得到化合物Ⅲ(3.5 mg)；Fr.C2-2-3經半制備型高效液相色譜分離，以22%乙腈-水洗脫得到化合物Ⅱ(8.1 mg，tR=10.1 min)和化合物Ⅸ(2.6 mg，tR=11.3 min)。

Fr.D(30.4 g)經MCI柱色譜分離，以90%甲醇-水洗脫，得到4個組分Fr.D1～D4。Fr.D1(13.2 g)經硅膠(400 g，100～200目)柱色譜分離，以石油醚-丙酮[(50～1)∶1]梯度洗脫，得到8個組分Fr.D1-1～D1-8；Fr.D1-2經硅膠(50 g)柱色譜分離，以石油醚-丙酮(5∶1)等度洗脫，得到化合物Ⅷ(15.6 mg)；Fr.D1-4經硅膠(80 g，80～100目)柱色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯[(30～1)∶1]梯度洗脫，后經Sephadex LH-20凝膠柱色譜分離，以氯仿-甲醇(1∶1)洗脫，得到化合物Ⅰ(7.6 mg)。

Fr.F(130.0 g)經MCI柱色譜分離，以90%甲醇-水洗脫，得到3個組分Fr.F1～F3。Fr.F1(0.9 g)經RP-C18柱色譜分離，以甲醇-水(10%～100%)梯度洗脫，得到3個組分Fr.F1-1～F1-3；Fr.F1-1經重結晶得到化合物Ⅵ(1.1 g)。

2 結果與討論

2.1 結構鑒定

化合物Ⅰ：白色無定形粉末。分子式C27H28N2O4，分子量444。1HNMR(500 MHz，CDCl3)，δ：7.72(2H，m，H-2′，7′)，7.52(1H，tt，J=7.5 Hz、2.0 Hz，H-5′)，7.44(2H，brt，J=7.4 Hz，H-4′，6′)，7.26(5H，m，H-5～9)，7.15(2H，m，H-5″，7″)，7.07(2H，td，J=6.5 Hz、1.7 Hz，H-4″，8″)，6.84(1H，d，J=7.7 Hz，N-H)，6.03(1H，d，J=8.6 Hz，N-H)，4.77(1H，td，J=8.1 Hz、6.0 Hz，H-2)，4.33(1H，m，H-1″)，3.92(1H，dd，J=11.3 Hz、4.9 Hz，H-9″a)，3.81(1H，dd，J=11.3 Hz、4.2 Hz，H-9″b)，3.21(1H，dd，J=13.7 Hz、6.0 Hz，H-3a)，3.06(1H，dd，J=13.7 Hz、8.5 Hz，H-3b)，2.75(2H，m，H-2,2″)，2.02(3H，s，-COCH3)；13CNMR(125 MHz，CDCl3)，δ：170.4(C-1)，55.0(C-2)，38.4(C-3)，136.6(C-4)，128.8(C-5，9)，129.3(C-6，8)，127.1(C-7)，167.2(C-1′)，133.6(C-2′)，128.6(C-3′，7′，4″，8″)，127.0(C-4′，6′)，131.9(C-5′)，49.5(C-1″)，37.4(C-2″)，136.7(C-3″)，129.1(C-5″，7″)，126.7(C-6″)，64.6(C-9″)，COCH3(170.8，20.8)。以上數據與文獻[8]報道基本一致，故鑒定該化合物為金色酰胺醇酯。

化合物Ⅱ：白色無定形粉末。分子式C9H7NO，分子量145。1HNMR(500 MHz，CD3OD)，δ：9.88(1H，s，-CHO)，8.16(1H，brd，J=7.6 Hz，H-4)，8.09(1H，s，H-2)，7.47(1H，brd，J=8.1 Hz，H-7)，7.26(2H，m，H-5，6)；13CNMR(125 MHz，CD3OD)，δ：139.7(C-2)，120.1(C-3)，122.4(C-4)，123.6(C-5)，124.9(C-6)，113.1(C-7)，139.0(C-8)，125.7(C-9)，187.4(-CHO)。以上數據與文獻[9]報道基本一致，故鑒定該化合物為吲哚醛。

化合物Ⅲ：黃色油狀物。分子式C11H11NO2，分子量189。1HNMR(500 MHz，CD3OD)，δ：8.05(1H，brd，J=8.4 Hz，H-4)，7.95(1H，s，H-2)，7.43(1H，brd，J=7.7 Hz，H-7)，7.19(2H，m，H-5，6)，4.35(2H，q，J=7.1 Hz，OCH2CH3)，1.41(3H，t，J=7.1 Hz，OCH2CH3)；13CNMR(125 MHz，CD3OD)，δ：133.1(C-2)，108.5(C-3)，122.5(C-4，5)，123.7(C-6)，112.9(C-7)，138.1(C-8)，127.3(C-9)，167.5(C-10),OCH2CH3(60.8，14.8)。以上數據與文獻[10]報道基本一致，故鑒定該化合物為吲哚-3-甲酸乙酯。

化合物Ⅳ：白色針狀結晶(氯仿)。分子式C29H46O，分子量410。1HNMR(500 MHz, CDCl3)，δ：5.34(1H，d，J=5.2 Hz，H-6)，5.24(1H，dd，J=15.2 Hz、8.2 Hz，H-22)，5.17(1H，dd，J=15.2 Hz、7.4 Hz，H-23)，4.68(2H，m，H2-26)，3.52 (1H，m，H-3)，2.42(1H，q，J=6.3 Hz，H-24)，2.03(1H，m，H-20)，1.97(1H，m，H-8)，1.95(1H，m，H-2a)，1.85(1H，m，H-2b)，1.83(1H，m，H-1a)，1.68(1H，m，H-16a)，1.64(3H，brs，CH3-27)，1.49(6H，overlapped，H-11a，15a和H2-7，28)，1.25(2H，overlapped，H-16b，17)，1.15(2H，m，H2-12)，1.08(3H，overlapped，H-1b，14，15b)，1.00(6H，overlapped，CH3-19，21)，0.83(3H，t，J=7.3 Hz，CH3-29)，0.69(3H，s，CH3-18)；13CNMR(125 MHz, CDCl3)，δ：37.3(C-1)，31.7(C-2)，71.8(C-3)，42.3(C-4,13)，140.8(C-5)，121.7(C-6)，31.9(C-7,8)，50.2(C-9)，36.5(C-10)，21.1(C-11)，39.7(C-12)，56.9(C-14)，24.3(C-15)，28.7(C-16)，55.9(C-17)，12.1(C-18)，19.4(C-19)，40.2(C-20)，20.2(C-21)，137.2(C-22)，130.0(C-23)，52.0(C-24)，148.6(C-25)，109.5(C-26)，20.8(C-27)，25.7(C-28)，12.2(C-29)。以上數據與文獻[11]報道基本一致，故鑒定該化合物為(24S)-ethylcholesta-5,22(E),25-trien-3β-ol。

化合物Ⅴ：白色無定形粉末。分子式C29H50O，分子量414。1HNMR(500 MHz，CD3OD)，δ：5.30(1H，brd，J=5.4 Hz，H-6)，3.48(1H，m，H-3)，0.96(3H，s，CH3-19)，0.88(3H，d，J=6.6 Hz，CH3-21)，0.80(6H，overlapped，CH3-27，29)，0.77(3H，d，J=6.9 Hz，CH3-26)，0.64(3H，s，CH3-18)；13CNMR(125 MHz，CD3OD)，δ：37.3(C-1)，31.6(C-2)，71.8(C-3)，42.3(C-4，13)，140.8(C-5)，121.7(C-6)，31.9(C-7,8)，50.1(C-9)，36.5(C-10)，21.1(C-11)，39.8(C-12)，56.8(C-14)，24.3(C-15)，28.3(C-16)，56.0(C-17)，12.0(C-18)，19.4(C-19)，36.2(C-20)，19.0(C-21)，33.9(C-22)，29.1(C-23)，45.8(C-24)，26.0(C-25)，18.8(C-26)，19.8(C-27)，23.0(C-28)，11.9(C-29)。以上數據與文獻[12]報道基本一致，故鑒定該化合物為β-谷甾醇。

化合物Ⅵ：無色針狀結晶(氯仿)。分子式C35H60O6，分子量576。1HNMR(400 MHz，DMSO-d6)，δ:5.33(1H，brd，J=5.2 Hz，H-6)，4.22(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.63(1H，m，H-6′a)，3.44(1H，m，H-3)，3.40(1H，dd，J=11.8 Hz、5.9 Hz，H-6′b)，3.17(1H，m，H-3′)，3.05(1H，m，H-5′)，3.01(1H，m，H-4′)，2.89(1H，td，J=8.3 Hz、4.9 Hz，H-2′)，2.34(1H，m，H-4a)，2.12(1H，m，H-4b)，0.96(3H，s，CH3-19)，0.90(3H，d，J=6.4 Hz，CH3-21)，0.83(3H，d，J=6.7 Hz，CH3-29)，0.80(6H，m，CH3-26，27)，0.65(3H，s，CH3-18)；13CNMR(100 MHz，DMSO-d6)，δ:37.9(C-1)，30.3(C-2)，77.9(C-3)，39.5(C-4)，141.5(C-5)，122.3(C-6)，32.4(C-7,8)，50.7(C-9)，37.3(C-10)，21.7(C-11)，40.5(C-12)，42.9(C-13)，57.2(C-14)，24.9(C-15)，28.9(C-16)，55.5(C-17)，12.7(C-18)，20.0(C-19)，36.6(C-20)，19.7(C-21)，34.4(C-22)，26.4(C-23)，46.2(C-24)，29.9(C-25)，20.2(C-26)，20.8(C-27)，23.7(C-28)，12.8(C-29)，101.8(C-1′)，73.5(C-2′)，78.0(C-3′)，71.1(C-4′)，78.2(C-5′)，62.1(C-6′)。以上數據與文獻[13]報道基本一致，故鑒定該化合物為胡蘿卜苷。

化合物Ⅶ：粉色油狀物。分子式C40H56，分子量536。1HNMR(500 MHz，CDCl3)，δ：1.97(12H，s，CH3-19，19′，20，20′)，1.72(6H，s，CH3-18，18′)，1.03(12H，s，CH3-16，16′，17，17′)；13CNMR(125 MHz，CDCl3)，δ：34.3(C-1，1′)，39.7(C-2，2′)，19.3(C-3，3′)，33.1(C-4，4′)，129.4(C-5，5′)，137.9(C-6，6′)，126.7(C-7，7′)，137.8(C-8，8′)，136.1(C-9，9′)，132.4(C-10，10′)，130.1(C-11，11′)，137.3(C-12，12′)，136.5(C-13，13′)，130.9(C-14，14′)，125.1(C-15，15′)，29.0(C-16，16′,17，17′)，21.8(C-18，18′,19，19′)，12.8(C-20，20′)。以上數據與文獻[14]報道基本一致，故鑒定該化合物為β-胡蘿卜素。

化合物Ⅷ：白色針狀結晶(甲醇)。分子式C7H8O2，分子量124。1HNMR(500 MHz，CD3OD)，δ：7.16(2H，d，J=8.5 Hz，H-2，6)，6.74(2H，d，J=8.5 Hz，H-3，5)，4.47(2H，s，H2-7)；13CNMR(125 MHz，CD3OD)，δ：157.9(C-1)，116.1(C-2，6)，129.8(C-3，5)，133.5(C-4)，65.1(C-7)。以上數據與文獻[15]報道基本一致，故鑒定該化合物為對羥基苯甲醇。

化合物Ⅸ：白色針狀結晶(甲醇)。分子式C7H6O4，分子量154。1HNMR(500 MHz，CD3OD)，δ：7.21(1H，d，J=3.1 Hz，H-6)，6.96(1H，dd，J=8.9 Hz、3.1 Hz，H-4)，6.78(1H，d，J=8.9 Hz，H-3)；13CNMR(125 MHz，CD3OD)，δ：113.3(C-1)，150.8(C-2)，115.3(C-3)，125.1(C-4)，156.0(C-5)，119.0(C-6)，171.6(C-7)。以上數據與文獻[16]報道基本一致，故鑒定該化合物為2,5-二羥基苯甲酸。

化合物Ⅰ～Ⅸ的結構式如圖1所示。

圖1 化合物Ⅰ～Ⅸ的結構式Fig.1 Structural formulas of compounds Ⅰ-Ⅸ

2.2 討論

從斑籽木地上部分90%乙醇提取物中分離鑒定的9個化合物中有3個生物堿類(Ⅰ～Ⅲ)、3個甾體類(Ⅳ～Ⅵ)、1個四萜類(Ⅶ)和2個酚類(Ⅷ和Ⅸ)，其中化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ為首次從斑籽木屬植物中分離得到。現代藥理學研究表明，化合物Ⅷ對羥基苯甲醇能顯著抑制實驗性腦血栓形成，且具有顯著的抗炎作用，其抗炎作用機制與抑制花生四烯酸環氧合酶代謝途徑有關[17]。另有研究表明，對羥基苯甲醇在體內外均具有顯著的抗血小板聚集活性，其作用機制可能與抑制外鈣內流和內鈣釋放有關[18]。此外，化合物Ⅸ2,5-二羥基苯甲酸對酪氨酸酶單酚酶活性具有明顯的抑制作用[19]。

3 結論

采用正相硅膠柱色譜、MCI柱色譜、半制備型高效液相色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜等分離方法從斑籽木地上部分90%乙醇提取物中分離得到9個化合物，分別鑒定為：金色酰胺醇酯(Ⅰ)、吲哚醛(Ⅱ)、吲哚-3-甲酸乙酯(Ⅲ)、(24S)-ethylcholesta-5,22(E),25-trien-3β-ol(Ⅳ)、β-谷甾醇(Ⅴ)、胡蘿卜苷(Ⅵ)、β-胡蘿卜素(Ⅶ)、對羥基苯甲醇(Ⅷ)、2,5-二羥基苯甲酸(Ⅸ)，其中化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ為首次從斑籽木屬植物中分離得到。該研究為斑籽木藥效物質基礎的進一步闡明奠定了基礎，并為其臨床應用提供了一定的科學依據。