病證結合的腸易激綜合征動物模型研究進展

劉新明，劉斯文，2，劉書芹，駱雄飛，2*

（1.天津中醫藥大學第一附屬醫院，天津 300193；2.國家中醫藥管理局推拿手法生 物效應三級實驗室，天津 300193）

腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）是一種功能性紊亂胃腸障礙，主要表現為反復發作的腹痛，與排便相關或伴隨排便習慣改變[1-2]。排便習慣異常可表現為便秘、腹瀉，便秘與腹瀉交替，同時可有腹脹的癥狀［3-4］，且該病缺乏可解釋癥狀的形態學改變和生化異常，根據羅馬Ⅳ標準，共識[1]將本病分為便秘型、腹瀉型、混合型、不定型4 個分型。本病的發病率已達消化系統疾病的15.9%，且呈逐年遞增趨勢[5]，不僅嚴重影響患者的生活質量及身心健康，而且給我國造成一定程度的社會和經濟負擔。

動物模型有助于探尋致病機制、研發新藥，隨著中醫藥的發展，研究者逐漸考慮到辨證論治的核心思想，倡導制備病證結合的證候模型[6]。IBS 作為中醫藥治療的優勢病種[7]，根據最新的專家共識[2]，其辨證分型有10 種，但病證結合模型研究以肝郁脾虛證、脾腎陽虛證、脾胃濕熱證和肝郁氣滯證[8]為主，現將該方面的研究進展綜述如下。

1 肝郁脾虛型

共識提出肝郁脾虛是導致IBS 發生的重要病機，是目前研究最多的證型[2]，根據中醫證候流行病學調查顯示，肝郁脾虛型占44.5%[9]，多見于腹瀉型IBS。化學藥物復制肝郁脾虛模型的方法與其致病因素相距甚遠，不能全面系統反映病證的實質[10]，模擬中醫藥治療該病的特征[11]。目前該模型常用早期心理應激+物理化學刺激造模。

母嬰分離法是IBS 的一種代表性造模方式，且作為情志刺激，也可導致肝郁[8]；束縛應激使大鼠內臟敏感性增高，也是肝郁證造模的主要方法[12]；番瀉葉被認為是苦寒瀉下脾虛造模的首選藥物[13]。研究者[12]將上述三因素復合造模的模型，從模型的疾病特征、證候特征以及生物學指標三方面論證此模型符合IBS肝郁脾虛型，并且用痛瀉要方進行方藥反證，證明此模型符合肝郁脾虛型。旺建偉等[14]通過觀察采用乳鼠直腸擴張刺激法結合母嬰分離法、乙酸腸道感染刺激法、束縛刺激法復制的三種IBS模型，通過觀察體質量、便數變化、精神狀態、內臟高敏性、結腸組織病理變化、5-羥色胺（5-HT）、c-fos 的表達變化，發現乳鼠直腸擴張刺激法結合母嬰分離動物模型與痛瀉要方效應最佳，關聯性最大，為IBS 和新的藥物治療干預發展研究的優良模型。亦有母子分離8 周的復合造模方法[15]，但分離時間較長，影響因素較多。

郭軍雄等[16]將雌雄各半的Wistar 大鼠，通過慢性束縛+番瀉葉灌胃法復制的肝郁脾虛型病證結合模型，造模后，模型組出現典型的IBS 肝郁脾虛證表現，其他癥狀及Th1/Th2 平衡改變也符合IBS 肝郁脾虛證表現，是一種較好的研究中醫藥治療IBS 療效機制的動物模型。此外，研究發現該模型具有一定的時效性，此種方法建立的穩定模型，能持續2 周。郭紅采用饑飽失常+番瀉葉灌胃+強迫游泳2 周的方法復制肝郁脾虛證IBS 大鼠模型[17]，以結腸敏感度、腸道動力學變化確立疾病，以糖水偏好指數、曠場實驗、大鼠體重變化評估肝郁脾虛證型。雖然此法應用多種客觀實驗評估模型的準確性，但是文獻中并未描述具體操作方法，復制的難度系數較大。采用乙醚麻醉后乙酸灌腸合并束縛1 周造模[18]，通過觀察模型一般情況、體質量、飲食量、腹部回縮反射等指標的變化證明此模型符合IBS 肝郁脾虛型，但造模時間短、因素單一，不符合IBS 的致病特點。

2 脾腎陽虛型

飲食不節、苦寒瀉下、過勞等諸多因素導致脾虛，日久累及腎陽，以致脾腎陽虛，或者由肝郁脾虛逐漸轉變為脾腎陽虛。根據此理論基礎，目前有關脾腎陽虛IBS 模型主要有：1）復合模型法：母嬰分離2 周＋番瀉葉灌胃4 周法和番瀉葉灌胃4 周+避水應激10 d[19]。在模型評價方面，這項研究提出四維評價體系：宏觀體征-理化指標-藥物反證-造模因素反推，值得研究者借鑒。李依潔等[20]采用4 周番瀉葉灌胃聯合2 周冰醋酸灌腸+固定器束縛、2 周球囊直腸刺激+夾尾刺激制備大鼠模型，從小鼠的行為學、糞便的含水量、Bristol 分型、腸道黏膜病理組織學、藥物反證等驗證造模的成功。2）藥物注射法：采用腹腔注射利血平14 d，成功復制脾陽虛大鼠模型[21]。該模型操作簡單、易于重復，但容易造成胃腸道損傷，與疾病的診斷不相符，所以有效性有待驗證。

3 脾胃濕熱型

脾胃濕熱證多因過食肥甘厚味，或肝郁脾虛、運化失常以致濕熱內蘊。根據此理論基礎，徐秋穎通過高糖高脂飲食+不可預知的應激干預[22]，其中不可預知的干預方法為：每日隨機安排禁水、夾尾、45℃環境放置、4℃冰水游泳、晝夜顛倒、禁食及水平振蕩中的一種，建立脾胃濕熱型IBS 模型，采用大鼠的腹瀉指數、痛閾與腸道敏感性、體質量、行為／心理（敞箱實驗、糖水攝取量）等指標證明此模型符合脾胃濕熱表現。譚潔等[23]將大鼠隨機分為空白組、模型組（脾胃濕熱）、模型組（脾胃濕熱+慢性應激），采用慢性應激+濕熱刺激法造模，濕熱刺激的方法在高糖高脂飲食的基礎上，再加上高溫高濕環境以及二鍋頭灌胃；慢性應激的方法同上。造模后進行對比研究，模型組大鼠的一般情況、體質量、體溫、糞便性狀及行為等方面均出現符合脾胃濕熱證和脾胃濕熱型IBS 癥狀，并且腸道組織學無明顯改變，說明該模型在一定程度上與人類腹瀉型IBS（脾胃濕熱型）相似。相對來說，譚潔的造模方法更全面，除了飲食因素，還將環境因素考慮在內，不失為一種可取的造模方法，但以上兩種造模方法均缺乏方藥驗證該模型的準確性。

4 肝郁氣滯型

此類型與心理因素密切相關，情志異常則肝失疏泄、氣機不暢，導致腸道功能紊亂，引起腹痛、腹脹、便秘等癥，多見于便秘型IBS。基于以上致病理論，目前肝郁氣滯證模型的復制多采用：1）不可預知的慢性應激法[24]：冰水游泳5 min，45℃環境5 min，斷水、禁食24 h，夾尾刺激1 min，水平震蕩30 min（每分鐘160 次）。每種刺激3 次，刺激方法隨機安排，共造模21 d。許多研究均以此法造模，個別細節有變動，但都大同小異。2）夾尾+饑飽失常+藥物反證法[25]：以夾尾使大鼠保持激怒狀態，同時隔天喂食，食量不限，食物為高脂飼料，共造模7 d，結合大鼠的生物學表現并用四磨湯判定造模成功。此模型還有直腸球囊擴張刺激+限水法[26]，并從大鼠的行為學及腹部撤離反射驗證模型的有效性，但是限水不是疾病形成的自然狀態，且未提及是否符合肝郁氣滯證的證候特點，故此方法尚需進一步驗證。

5 小結

現有的IBS 模型，多是通過建立內臟痛覺過敏或（和）施加不可預知的慢性應激刺激建立，多數能從臨床表現、分子生物學角度模擬本病的變化。常用的束縛應激法作用短暫，模型穩定性欠佳，造模方法缺乏公認性和普適性[27]；母嬰分離法是目前常用的研究腹瀉型IBS 病生理機制的一種動物模型[28]，但該模型動物個體差異性較大，很多研究中常必須疊加其他形式的應激才能更全面地模擬IBS 的癥狀[29]，所以近年的研究，多以復合應激法復制模型。

隨著中醫藥現代化的發展，研究中醫的特色理論和臨床療效，均要用現代醫學方法。中醫病證結合動物模型是中醫藥現代化研究的重要環節[30]，也是保證研究結果真實性、可靠性、重現 性、創新性、先進性及科學性的基本前提[31]，但目前缺乏公認的病證結合動物模型。

中醫動物模型，造模方法主要分為三類：西醫病理模型、中醫病因模型和病證結合模型[32]，但病證結合模型不應該是西醫病理模型和中醫病因模型簡單的疊加，理想的病證結合模型，應該從病因、癥狀、病程上兼具本病的特點[33]，復制的模型以能夠用公認的方藥進行反證，模型穩定、能重復為原則。對模型的判定，當以動物表征參數與人體疾病原型、臨床證候的診斷依據基本相同乃至相同才能作為證候動物模型造模成功的標準[34]，而實際上，模型終歸是模型，無法完全復制目標疾病。為了評價模型模擬程度，現行學派主要分為動物表征和動物行為學指標評價兩大體系，具體操作已有范例可循[35]。需要亟待解決的是：1）如何將中醫辨證應用到動物模型中，進而評價所造模型的契合度；2）在模型的評價方面，可以加入公認的客觀的實驗進行驗證；3）在進行藥物反證時，應考慮到方藥對不同證型具有重疊效果，顯示出辨證施治的特異性。

針對以上幾個問題，提出幾點建議：1）從國家層面加大中醫藥研究領域的投入，加強國內外不同行業之間的交流與合作，吸收國內外先進的技術，逐步構建規范化的病證結合模型體系；2）動物模型的制備方法，應具有中醫理論特色，將動物特有的“四診”信息結合現代檢測手段，收集動物模型的相關指標，挖掘宏觀指標與微觀指標的相關性，逐步揭示中醫“證”物質基礎，領悟中醫本質，并靈活應用到科研工作中；3）將中醫的“天人相應”“七情”“六淫”等因素考慮在內，模擬中醫疾病的發生發展過程，有助于構建契合度更高的病證結合模型。

隨著對不同造模方法進行對比，逐步優化研究方案，建立公認的重復性、穩定性好的IBS 病證結合動物模型，不僅有助于更加深入地研究IBS 的細胞、分子水平的機制，而且是中醫藥走上現代化的必經之路。