補(bǔ)腎中藥改善高齡不孕女性卵母細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的研究進(jìn)展

李秀芳 王忠清 朱 蕾 張小平 徐海燕 連 方

(1 山東中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，濟(jì)南，250000； 2 山東大學(xué)附屬生殖醫(yī)院，濟(jì)南，250021； 3 山東中醫(yī)藥大學(xué)眼科與視光醫(yī)學(xué)院，濟(jì)南，250000； 4 濟(jì)南金齡健康護(hù)理院，濟(jì)南，250000； 5 空軍濟(jì)南基地保障部門(mén)診部，濟(jì)南，250002； 6 山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合生殖與遺傳中心，濟(jì)南，250000)

近年來(lái)，隨著社會(huì)的發(fā)展、工作和生活壓力的增大，女性生育年齡逐漸增大。35歲以后生育第1個(gè)孩子的比例從1970年的1/100增加到2006年的1/12[1-2]。而年齡與卵巢儲(chǔ)備功能密切相關(guān)，可作為預(yù)測(cè)女性生育能力的一個(gè)獨(dú)立因素，女性在35歲以后生育力明顯下降[3-4]。隨著二胎政策的放開(kāi)，中國(guó)有9 000萬(wàn)對(duì)夫婦符合生育條件[]，其中60%為35歲以上高齡女性[5-7]。這部分女性卵巢儲(chǔ)備功能下降，臨床妊娠率低，如何提高高齡不孕女性的生育力是關(guān)系國(guó)計(jì)民生的重要問(wèn)題。

目前，35歲以上高齡不孕女性，選擇輔助生殖技術(shù)(Assisted Reproductive Technology，ART)治療的高齡不孕女性數(shù)量在世界范圍內(nèi)迅速增長(zhǎng)[8-9]。但其助孕結(jié)局往往并不理想。國(guó)外有研究表明，35歲以上女性在體外受精-胚胎移植(In Vitro Fertilization and Embryo Transfer,IVF-ET)周期中，胚胎種植率開(kāi)始下降，每增加一歲，胚胎種植率降低2.77%，年齡超過(guò)44歲的女性胚胎種植率只有2.3%[10]；同時(shí)臨床妊娠率急劇下降，自然流產(chǎn)率升高[11]。高齡不孕女性竇卵泡數(shù)減少，卵母細(xì)胞質(zhì)量下降，IVF-ET周期中使用大量外源性促排卵藥物，反復(fù)刺激卵巢，可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)，降低卵母細(xì)胞質(zhì)量[12]。卵母細(xì)胞質(zhì)量是影響妊娠成功的關(guān)鍵因素，并隨著年齡的增長(zhǎng)而下降。為解決這一難題，生殖醫(yī)師在臨床實(shí)踐中采用多種策略來(lái)提高卵巢反應(yīng)，比如添加輔酶Q10、脫氫表雄酮(Dehydroepiandrosterone，DHEA)、生長(zhǎng)激素(Growth Hormone，GH)等，但研究結(jié)果尚有爭(zhēng)議。補(bǔ)腎中藥作為中醫(yī)學(xué)的重要組成部分，大量研究表明，在高齡女性IVF-ET周期中，補(bǔ)腎中藥能夠改善卵母細(xì)胞質(zhì)量，減少促性腺激素(Gonadotropins，Gn)用量，提高正常受精率及優(yōu)質(zhì)胚胎率，改善高齡不孕女性的臨床妊娠結(jié)局[11-36]。推測(cè)可能與補(bǔ)腎中藥改善高齡女性卵細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷、抑制顆粒細(xì)胞凋亡有關(guān)，但是其確切機(jī)制尚不十分清楚。

1 高齡不孕與氧化應(yīng)激關(guān)系的研究進(jìn)展

高齡女性的生育能力急劇下降與卵母細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量下降密切相關(guān)。女?huà)朐诔錾鷷r(shí)卵巢中有100萬(wàn)～200萬(wàn)個(gè)卵母細(xì)胞，此后不再產(chǎn)生新的卵母細(xì)胞，相反會(huì)不斷丟失。有研究表明，在青春期，卵母細(xì)胞的數(shù)量已經(jīng)減少到10萬(wàn)～30萬(wàn)，到了30歲后期，特別是35歲以后，卵母細(xì)胞的數(shù)量減少更加明顯[17]。盡管卵母細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量下降的原因比較復(fù)雜，但氧化應(yīng)激的影響已引起越來(lái)越多的關(guān)注，普遍認(rèn)為體內(nèi)活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)引起的氧化應(yīng)激可導(dǎo)致高齡女性的卵母細(xì)胞線粒體功能障礙。有報(bào)道稱，衰老引起的抗氧化功能下降與卵母細(xì)胞質(zhì)量下降有關(guān)[18-19]。

氧化應(yīng)激是指ROS產(chǎn)生過(guò)多，超過(guò)了機(jī)體的抗氧化防御水平，造成的一種氧化與抗氧化失衡狀態(tài)，從而引起組織與細(xì)胞損傷的現(xiàn)象[20-21]。在生理狀態(tài)下,90%的ROS來(lái)源于線粒體氧化磷酸化過(guò)程[22]。ROS在生殖過(guò)程中具有重要作用，影響卵母細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育和成熟以及排卵、受精、胚胎著床和胚胎發(fā)育[23]。在排卵過(guò)程中，由于黃體生成素(Luteinizing Hormone，LH)的升高以及卵泡內(nèi)新生血管的形成，血管內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生大量的ROS，這為卵母細(xì)胞成熟和卵泡破裂提供了必要的條件。然而，過(guò)量的ROS會(huì)引起細(xì)胞損傷。作為一種對(duì)抗ROS的防御機(jī)制，卵泡和卵母細(xì)胞內(nèi)存在抗氧化酶和抗氧化劑，使卵母細(xì)胞免受氧化應(yīng)激的損傷，其中酶類抗氧化劑包括過(guò)超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)、氧化氫酶(Catalase，CAT)、還原型谷胱甘肽(Glutathione，GSH)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathion Peroxidase，GSH-Px)等；非酶類抗氧化劑包括維生素C、維生素E、GSH、類胡蘿卜素、褪黑素等[2-25]。如果ROS水平與抗氧化系統(tǒng)不平衡，容易使卵母細(xì)胞和顆粒細(xì)胞受到氧化應(yīng)激的破壞，影響卵母細(xì)胞質(zhì)量。氧化應(yīng)激在女性生殖系統(tǒng)的生理、病理過(guò)程中起著重要作用，是引起女性生殖功能下降的重要因素。

1.1 氧化應(yīng)激與卵母細(xì)胞質(zhì)量下降 氧化應(yīng)激是高齡女性卵母細(xì)胞質(zhì)量下降的主要原因[26]。氧化應(yīng)激可能是卵母細(xì)胞衰老和生殖疾病的“始發(fā)者”，是引起卵泡異常閉鎖、減數(shù)分裂異常、受精率降低、胚胎發(fā)育延遲的主要原因[27]。線粒體與卵母細(xì)胞質(zhì)量下降密切相關(guān)，在卵母細(xì)胞線粒體內(nèi)含有一套自己獨(dú)有的遺傳體系，稱為線粒體DNA(Mitochondrial DNA，mtDNA)。有研究指出，衰老會(huì)引起mtDNA的氧化損傷，mtDNA拷貝數(shù)不足會(huì)造成卵母細(xì)胞發(fā)育潛能降低[28]。mtDNA拷貝數(shù)與年齡及卵巢儲(chǔ)備關(guān)系密切，卵巢儲(chǔ)備差的高齡女性mtDNA拷貝數(shù)顯著下降[29-31]。根據(jù)生殖衰老理論，高齡女性的卵母細(xì)胞質(zhì)量下降是由線粒體端粒縮短引起的，ROS水平過(guò)高可引起不同類型的端粒DNA損傷，引發(fā)(局部端粒)單鏈斷裂(Single-strand Breakage，SSB)，影響端粒上端粒重復(fù)RNA(TElomeric Repeat-containing RNA,TERRA)的轉(zhuǎn)錄或保護(hù)蛋白的結(jié)合，導(dǎo)致端粒縮短，造成卵母細(xì)胞質(zhì)量下降[32-34]。

線粒體功能障礙是卵母細(xì)胞衰老的焦點(diǎn)[35]。J?nsson等[36]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)氧化還原反應(yīng)發(fā)生時(shí)，線粒體中的電子通過(guò)呼吸鏈的復(fù)合物Ⅰ、Ⅲ轉(zhuǎn)移給氧，使氧化磷酸化活性增強(qiáng)，ROS產(chǎn)生增加。由于mtDNA結(jié)構(gòu)的特殊性，當(dāng)ROS過(guò)高時(shí)，容易與mtDNA結(jié)合，導(dǎo)致突變，引起線粒體功能障礙，影響電子傳遞鏈，發(fā)生電子泄露，與氧分子結(jié)合生成大量的ROS，造成惡性循環(huán)，導(dǎo)致卵母細(xì)胞損傷及線粒體自噬，不能產(chǎn)生足夠的腺苷三磷酸(Adenosine Triphosphate，ATP)，影響卵子和胚胎發(fā)育。

氧化應(yīng)激可導(dǎo)致高齡女性胚胎發(fā)育不良，臨床妊娠率降低[37-38]。高水平的ROS是IVF-ET失敗的主要原因[39]。卵泡液中顆粒細(xì)胞ROS高的患者，獲得卵子的概率較低，同時(shí)胚胎種植率也較低[40]。Carbone等[41]發(fā)現(xiàn)高齡女性卵泡液中的CAT及SOD水平明顯低于育齡期女性。溫燦鑫等[42]研究發(fā)現(xiàn)高齡女性卵泡液ROS增加、SOD活性降低，顆粒細(xì)胞中CAT及GSH水平顯著降低，并且卵泡液的SOD活性影響卵母細(xì)胞質(zhì)量以及受精率，最終影響胚胎發(fā)育潛能及囊胚形成。Al-Saleh等[43]研究發(fā)現(xiàn)，卵泡液中丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量越高，對(duì)顆粒細(xì)胞DNA的損傷就越嚴(yán)重；而CAT可清除卵泡液中ROS，具有抗氧化作用，卵泡液中CAT水平增加，提高了受精率，增加了活產(chǎn)率，對(duì)IVF-ET臨床結(jié)局產(chǎn)生積極影響。

1.2 氧化應(yīng)激與細(xì)胞凋亡 ROS水平升高可能會(huì)引起DNA、RNA、碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)氧化，從而造成不可修復(fù)的細(xì)胞損傷，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[44]。細(xì)胞凋亡在機(jī)體內(nèi)環(huán)境的維持和多個(gè)系統(tǒng)的發(fā)育中發(fā)揮重要作用，受B細(xì)胞淋巴瘤2(B-cell Lymphoma-2，Bcl-2)家族和胱天蛋白酶家族等多個(gè)基因的嚴(yán)格調(diào)控。Bcl-2家族蛋白是通過(guò)調(diào)節(jié)促凋亡與抗凋亡之間的平衡來(lái)維持線粒體完整性的一類關(guān)鍵蛋白[45]。Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl2-Associated X,BAX)可通過(guò)增強(qiáng)線粒體膜通透性，改變跨膜電位，從而促使線粒體內(nèi)細(xì)胞色素C釋放到細(xì)胞質(zhì)中，引起半胱氨酸天冬氨酸酶的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致胱天蛋白酶-3被激活，引發(fā)細(xì)胞凋亡[46-48]。Bcl-2蛋白可以通過(guò)抑制凋亡蛋白引發(fā)的一系列信號(hào)激活發(fā)揮抗凋亡作用[49-50]。氧化應(yīng)激可引起顆粒細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致17β-雌二醇(Estradiol，E2)水平降低，排卵率降低，影響卵母細(xì)胞質(zhì)量[51]。氧化應(yīng)激介導(dǎo)的顆粒細(xì)胞凋亡減少了顆粒細(xì)胞-卵母細(xì)胞之間的聯(lián)系，從而減少了卵母細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)，進(jìn)一步影響卵母細(xì)胞的質(zhì)量[52]。Lee等[53]報(bào)道顆粒細(xì)胞凋亡與年齡有關(guān)，高齡IVF-ET患者顆粒細(xì)胞的凋亡率高。有研究結(jié)果顯示，顆粒細(xì)胞的ROS水平和凋亡率都對(duì)IVF-ET的妊娠結(jié)局產(chǎn)生不利影響，二者在未妊娠組的表達(dá)水平要明顯高于妊娠組[54]。

細(xì)胞凋亡主要有3種途徑：線粒體介導(dǎo)的內(nèi)源性凋亡途徑、死亡受體介導(dǎo)的外源性凋亡途徑以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)介導(dǎo)的凋亡途徑。其中線粒體介導(dǎo)的內(nèi)源性凋亡途徑是氧化應(yīng)激引起卵母細(xì)胞凋亡的重要途徑[55-56]。研究表明,氧化應(yīng)激是導(dǎo)致卵母細(xì)胞和顆粒細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因素，過(guò)高的ROS激活線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡信號(hào)通路,誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞凋亡,導(dǎo)致卵母細(xì)胞閉鎖[57-59]。卵母細(xì)胞凋亡的實(shí)質(zhì)就是細(xì)胞內(nèi)氧化系統(tǒng)與抗氧化系統(tǒng)之間動(dòng)態(tài)平衡被打破的結(jié)果。

2 補(bǔ)腎中藥在減輕氧化應(yīng)激損傷中的研究進(jìn)展

2.1 理論基礎(chǔ) 中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腎主生殖，腎氣由盛轉(zhuǎn)衰貫穿于女性由年輕至衰老的全過(guò)程。《素問(wèn)·上古天真論》云：“女子七歲，腎氣盛，齒更發(fā)長(zhǎng)。二七而天癸至，任脈通，太沖脈盛，月事以時(shí)下，故有子……五七，陽(yáng)明脈衰，面始焦，發(fā)始?jí)櫋Ａ撸?yáng)脈衰于上，面皆焦，發(fā)始白。七七，任脈虛，太沖脈衰少，天癸竭，地道不通，故形壞而無(wú)子也。”由此可見(jiàn)，女子自五七開(kāi)始，陽(yáng)明脈氣由盛轉(zhuǎn)衰，天癸開(kāi)始衰竭，身體功能尤其是生殖功能開(kāi)始減退，機(jī)體呈現(xiàn)“腎虛”的生理狀態(tài)，這與西醫(yī)學(xué)的高齡定義是一致的。在IVF-ET超促排卵的過(guò)程中，多個(gè)卵泡同時(shí)生長(zhǎng)發(fā)育，腎必然分泌大量的腎精與天癸，導(dǎo)致腎氣一時(shí)性的旺盛，從而引起人體腎陰(腎精)、腎氣的耗損，在高齡女性中尤為突出。

腎是通過(guò)“腎-天癸-沖任-胞宮”軸來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)女性生殖功能的統(tǒng)攝作用的，羅元愷教授首次提出了此理論，認(rèn)為腎氣、天癸、沖任是與女性生殖關(guān)系最密切的物質(zhì)，它們對(duì)女性的生長(zhǎng)發(fā)育、生殖衰老起著非常重要的作用[60-61]。中醫(yī)的生殖軸與西醫(yī)學(xué)的下丘腦-垂體-卵巢軸雖分屬不同的理論體系，但是它們的調(diào)節(jié)機(jī)制大致是相同的。許潤(rùn)三認(rèn)為中醫(yī)的腎氣相當(dāng)于西醫(yī)學(xué)的下丘腦，主宰著天癸、沖任；天癸相當(dāng)于垂體；沖脈相當(dāng)于卵巢，沖脈為血海，沖脈盛衰與血海盈虛關(guān)系密切，調(diào)控著月經(jīng)的來(lái)潮；任脈主胞胎，為妊養(yǎng)之本，相當(dāng)于子宮[62]。連方教授提出了“卵巢為奇恒之臟”，按照中醫(yī)藏象理論，卵巢是實(shí)體臟器，在形態(tài)上與五臟相似，具有奇恒之臟的特征[63]；而在功能上，與六腑類似，具有藏、泄雙重功能。卵巢周期性的長(zhǎng)卵、排卵過(guò)程，對(duì)應(yīng)了奇恒之臟的藏、泄功能，長(zhǎng)卵為“藏”，排卵為“泄”。卵巢藏泄有時(shí)，女子生殖周期正常，方能孕育胞胎。卵巢的藏泄功能依賴于腎的統(tǒng)攝作用。腎中精氣充盛，天癸泌至有常，卵泡才能正常生長(zhǎng)、排出，女性的生殖功能才能實(shí)現(xiàn)。但是高齡女性往往呈現(xiàn)腎中精氣不足的狀態(tài)，天癸泌至失司，沖任血海虧虛，不能滋養(yǎng)胞宮，影響胞宮的胎孕功能，而不能攝精成孕。因此，在臨床上，補(bǔ)腎中藥可用于治療高齡女性不孕癥，提高高齡女性的懷孕率。李麗等[64]通過(guò)補(bǔ)腎法對(duì)高齡女性IVF-ET妊娠結(jié)局影響的Meta分析，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎法能增加高齡IVF-ET女性獲卵數(shù)和人絨毛膜促性腺激素(Human Chorionic Gonadotropin，hCG)水平、改善子宮內(nèi)膜厚度、降低子宮血流阻力指數(shù)，從而提高臨床妊娠率。

2.2 補(bǔ)腎中藥的抗氧化作用

隨著抗氧化機(jī)制研究的不斷深入，補(bǔ)腎中藥在抑制細(xì)胞凋亡、改善氧化應(yīng)激方面的作用受到了越來(lái)越多的關(guān)注，臨床工作者對(duì)單味中藥提取物(包括補(bǔ)腎陰中藥、補(bǔ)腎陽(yáng)中藥)和中藥復(fù)方抗氧化作用開(kāi)展了諸多研究。

2.2.1 補(bǔ)腎陰中藥 在補(bǔ)腎陰中藥中，高齡IVF-ET患者使用最多的是熟地黃，熟地黃味甘、微溫，歸肝、腎經(jīng)，功效滋陰養(yǎng)血，補(bǔ)精益髓，為補(bǔ)血與滋陰之要藥[64]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，熟地黃含地黃素、地黃苷、氨基酸、梓醇、糖類以及多種微量化學(xué)元素，具有抗氧化、抗衰老及促進(jìn)造血、抗疲勞、增強(qiáng)免疫力的作用[65]。秦亞?wèn)|等[66]研究發(fā)現(xiàn)白芍具有抗氧化功能，研究者給小鼠頸背部注射D-半乳糖后，發(fā)現(xiàn)模型小鼠血清中抗氧化物SOD、GSH的表達(dá)明顯下降，而MDA的表達(dá)水平上升，提示存在氧化應(yīng)激；給予白芍多糖治療后，衰老小鼠血清中SOD、GSH活性升高，同時(shí)MDA的活性顯著降低。當(dāng)歸具有補(bǔ)血活血的功效，其提取物當(dāng)歸多糖對(duì)體內(nèi)自由基有較強(qiáng)的清除能力，能夠調(diào)控SOD和GSH-Px活性，對(duì)H2O2誘導(dǎo)的小鼠細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷有保護(hù)作用，具有抗炎和抗凋亡作用[67]。鄂志強(qiáng)等[68]將從石斛中提取的生物堿-石斛堿(Dendrobine，DNE)作為抗氧化劑添加到小鼠卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)基中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DNE可顯著降低小鼠卵母細(xì)胞的ROS水平，提高小鼠卵母細(xì)胞的GSH水平，改善氧化應(yīng)激，提高卵母細(xì)胞質(zhì)量。由此可見(jiàn)，補(bǔ)腎陰中藥在抗氧化中發(fā)揮著重要作用。

2.2.2 補(bǔ)腎陽(yáng)中藥 補(bǔ)腎陽(yáng)中藥在生殖系統(tǒng)中的作用主要是性激素樣作用，補(bǔ)腎陽(yáng)中藥大多具有抗氧化、延緩衰老的作用。李利娟等[50]研究發(fā)現(xiàn)，菟絲子總黃酮能夠通過(guò)增加抗凋亡因子Bcl-2表達(dá)，降低促凋亡因子的Bax和胱天蛋白酶-3表達(dá)，減輕丙烯醛誘導(dǎo)的小鼠生殖細(xì)胞的損傷，發(fā)揮抗凋亡、抗氧化的作用。趙巖等[69]通過(guò)對(duì)管花肉蓯蓉不同部位的藥理研究發(fā)現(xiàn)，肉蓯蓉中含有豐富的多酚、三萜、多糖、苯乙醇苷類等生物活性物質(zhì)，對(duì)自由基具有較強(qiáng)的清除能力和抗氧化作用，且不同部位的抗氧化能力強(qiáng)弱順序?yàn)楦?中部>頂部。劉春紅等[70]研究發(fā)現(xiàn)鹿茸提取物清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH)、2,2-聯(lián)氮-雙(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)[2，2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic Acid，ABTS]自由基的能力較強(qiáng)，線蟲(chóng)飼喂鹿茸提取物后能顯著延長(zhǎng)其在氧化應(yīng)激條件下的生存時(shí)間，延長(zhǎng)壽命，提高生殖能力，具有抗衰老作用，且發(fā)現(xiàn)抗氧化作用可能與線粒體信號(hào)通路有關(guān)。發(fā)酵巴戟天中含有豐富的多糖、寡糖與蒽醌，三者對(duì)ROS自由基均有較強(qiáng)的清除能力，復(fù)配具有協(xié)同抗氧化作用，提示巴戟天可延緩衰老，延長(zhǎng)壽命[71]。馬蔚蓉和談?dòng)耓72]通過(guò)雷公藤苷灌胃構(gòu)建小鼠卵巢早衰模型，發(fā)現(xiàn)模型小鼠原始卵泡、竇卵泡、成熟卵泡、黃體數(shù)量下降，血清中SOD、CAT水平降低，顆粒細(xì)胞中ROS水平上升，核因子E2相關(guān)因子2(Nuclear Factor Erythroid-2 Related Factor 2，Nrf-2)、血紅素氧化酶-1(Heme Oxygenase-1，HO-1)蛋白和mRNA表達(dá)降低，表明存在氧化應(yīng)激。金絲桃苷(可從菟絲子中提取)治療4周后，竇卵泡數(shù)和黃體數(shù)增加，血清中SOD、CAT、E2和抗米勒管激素(Anti-Müllerian Hormone，AMH)水平上升，顆粒細(xì)胞中ROS水平降低，氧化應(yīng)激因子(Nrf-2、HO-1)和抗凋亡因子磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphorylated Phosphatidylinositol-3-kinase，p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylated Protein Kinase，p-AKT)、Bcl-2表達(dá)升高，凋亡相關(guān)因子Bax和胱天蛋白酶-3表達(dá)下降，表明金絲桃苷具有抗氧化、抗凋亡作用，抑制早發(fā)性卵巢功能不全(Premature Ovarian Insufficiency，POI)小鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡，一定程度上修復(fù)了卵巢氧化損傷，改善了卵巢功能。

2.2.3 中藥復(fù)方 中藥復(fù)方在抑制顆粒細(xì)胞凋亡、減輕氧化應(yīng)激損傷方面發(fā)揮著重要作用。滋腎育胎丸可降低卵巢儲(chǔ)備功能減退(Diminished Ovarian Reserve，DOR)模型大鼠Bax表達(dá)水平，增強(qiáng)Bcl-2的表達(dá)，抑制顆粒細(xì)胞凋亡，防止卵泡過(guò)度閉鎖[73]。劉慧萍等[74]研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)腎活血方通過(guò)抑制Fas、FasL基因的表達(dá)和提高E2水平，降低LH、FSH的水平，從而抑制卵泡顆粒細(xì)胞的凋亡。王玲[75]通過(guò)對(duì)經(jīng)方左歸丸的研究發(fā)現(xiàn)，左歸丸可以通過(guò)抑制抗透明帶抗體的產(chǎn)生和抑制Fas介導(dǎo)的卵泡細(xì)胞凋亡使自身免疫性卵巢早衰(Premature Ovarian Failure,POF)模型小鼠的Bcl-2表達(dá)增加，F(xiàn)asL表達(dá)降低，細(xì)胞凋亡率明顯下降，從而改善小鼠卵巢及免疫功能。

二至天癸方是連方教授依據(jù)滋補(bǔ)腎陰之旨自擬的經(jīng)驗(yàn)方，由墨旱蓮、女貞子、菟絲子、枸杞子、白芍、當(dāng)歸、熟地黃、川芎、制香附、炙甘草加減而成，為二至丸和四物湯的合方。周衡樸等[76]通過(guò)現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)二至丸含有綠原酸、特女貞苷、橄欖苦苷等成分。綠原酸可抑制氧化應(yīng)激條件下磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3的表達(dá)，促進(jìn)Nrf2的表達(dá)，激活HO-1蛋白的表達(dá)，上調(diào)p-AKT蛋白的水平，起到抗氧化作用；橄欖苦苷抗氧化能力極強(qiáng)，可增加酶類抗氧化劑的水平，如SOD、GSH-Px、CAT，同時(shí)提高非酶抗氧化劑如GSH、β-胡蘿卜素等水平，也可直接清除ROS；特女貞苷可降低Bax、胱天蛋白酶-3的表達(dá)，促進(jìn)Bcl-2的表達(dá)，起到抗凋亡作用。劉其南等[77]研究表明，二至丸能夠提高GSH-Px、SOD的活性，降低MDA的含量，減輕D-半乳糖誘導(dǎo)大鼠腎細(xì)胞的衰老程度。同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)，H2O2誘導(dǎo)的大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞(Islet Cell Tumor Cells,INS-1)ROS水平明顯升高，二至丸能提高其抗氧化應(yīng)激能力[78]。四物湯可以影響高齡雄鼠脾組織中花生四烯酸的表達(dá)，而花生四烯酸與氧化應(yīng)激關(guān)系密切，對(duì)氧化應(yīng)激有雙向調(diào)節(jié)作用，既能誘導(dǎo)產(chǎn)生氧化應(yīng)激，也能抑制氧化應(yīng)激[79-80]。課題組前期研究顯示，二至天癸方能改善高齡不孕癥患者的腎陰虛狀態(tài)，減少Gn用量，提高其正常受精率及可利用胚胎率[81]，可通過(guò)降低卵泡液內(nèi)8-異前列腺素F2α(8-epi-prostaglandinF2α，8-isO-PGF2α)、晚期氧化蛋白產(chǎn)物(Advanced Oxidation Protein Products，AOPP)表達(dá)，增強(qiáng)抗氧化劑SOD的表達(dá)，調(diào)控高齡DOR患者的氧化應(yīng)激反應(yīng)，提高高齡患者卵細(xì)胞質(zhì)量及胚胎發(fā)育潛能[15]；二至天癸方合并祛瘀解毒方可以抑制子宮內(nèi)膜異位癥不孕患者卵泡液中ROS、顆粒細(xì)胞胱天蛋白酶-3蛋白的表達(dá)，影響卵巢的藏泄功能[82]。同時(shí)連芳和相珊[83]研究發(fā)現(xiàn)，二至天癸方可明顯改善不孕癥IVF-ET患者的腎虛癥狀，通過(guò)調(diào)控PI3K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，抑制顆粒細(xì)胞凋亡，改善卵母細(xì)胞質(zhì)量，提高臨床妊娠率。

3 小結(jié)

通過(guò)總結(jié)以上內(nèi)容，我們得知女性的臨床妊娠結(jié)局與年齡密切相關(guān)；高齡女性卵母細(xì)胞的氧化應(yīng)激水平明顯增高，凋亡因子表達(dá)升高，加速了卵母細(xì)胞的閉鎖，導(dǎo)致高齡女性卵細(xì)胞質(zhì)量下降，補(bǔ)腎中藥在高齡不孕女性的治療中表現(xiàn)出了多環(huán)節(jié)作用的特點(diǎn)，通過(guò)提高卵巢的抗氧化能力，改善卵巢儲(chǔ)備功能，提高卵細(xì)胞質(zhì)量，改善高齡不孕女性體外助孕結(jié)局。但是補(bǔ)腎中藥減輕氧化應(yīng)激損傷的具體作用機(jī)制目前尚不清楚，值得進(jìn)一步探究。

4 討論

近幾年來(lái)，中藥在減輕氧化應(yīng)激損傷方面的研究日益增多，補(bǔ)腎陰中藥、補(bǔ)腎陽(yáng)中藥和中藥復(fù)方在抗氧化損傷中表現(xiàn)出了積極的作用。但是目前補(bǔ)腎中藥在高齡不孕抗氧化治療中的研究較少，在今后的研究中需要進(jìn)行多中心、大樣本、前瞻性研究以明確補(bǔ)腎中藥在高齡不孕IVF-ET患者中的臨床效果，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討其作用于卵巢的復(fù)雜機(jī)制，用大量的客觀數(shù)據(jù)資料證實(shí)中醫(yī)藥在高齡不孕IVF-ET患者中的價(jià)值，充分發(fā)揮中醫(yī)藥的優(yōu)勢(shì)，探索中醫(yī)藥的抗氧化作用機(jī)制，以期為高齡不孕女性帶來(lái)福音。