食品中獸藥殘留檢測卡與試劑盒檢測技術

王宏業

(七臺河市檢驗檢測中心，黑龍江 七臺河 154600)

0 引言

食品檢測是一項系統化的復雜工作，內容比較繁雜。食品種類越來越多，食品檢測內容也在逐漸增加，不同的食品，其檢測標準和要求也存在很大差別，傳統的單一的檢測方法已逐漸被淘汰。應健全檢測規范，積極運用先進的檢測技術，探索新的檢測模式，完成食品檢測工作。目前，我國食品檢測工作中存在的主要問題是食品檢測方法不當，檢測技術落后，檢測標準和技術不規范，檢測人員責任心不強，不能抓住關鍵環節，食品檢測監督力度不到位。應提高食品檢測技術水平，健全食品檢測管理體系，抓住食品檢測的重點環節。

在食品檢測流程上，應對食品樣本進行檢測，為食品監管部門提供食品檢測數據，對食品質量進行有效監管，促進食品工業穩定發展，為食品市場供給合格的產品，不斷提升食品質量，保證消費者合法權益。在食品檢測機構方面，提升檢測水平和檢測設備性能，針對檢測重點環節，提升檢測管理水平。優化食品檢測工作流程，進行檢測業務受理，客戶將采集樣本送檢，進行檢測任務派發，檢測機構進行樣品接收、制備、流轉、檢測，形成原始記錄，對檢測結果進行審核，編制、審核批準檢測報告，對檢測報告存檔管理，提升食品檢測結果的準確性，保證食品檢測質量。抓住食品檢測流程的基本環節，加強樣本采集、樣本接收、樣本制備、樣本流轉等環節的管理。加強檢測流程質量管控力度，制定檢測流程改進方案，提升食品檢測效率。

食品檢測技術人員要掌握獸藥殘留快速檢測基本方法和基本操作技能，熟悉獸藥的基本類型，熟悉檢測原理，了解如何獲得獸藥殘留的有關標準依據和檢測試劑制造商信息，更好地掌握食品中獸藥殘留控制途徑、技術方法、標準等。

以食品中獸藥殘留檢測為例，研究檢測適用范圍，檢測必備的儀器、材料和試劑，掌握檢測的主要步驟及檢測中應注意的問題等。

1 鹽酸克侖特羅檢測卡檢測技術

A.檢測適用范圍。鹽酸克侖特羅檢測卡檢測方法應用于豬肉、內臟和豬尿液中的鹽酸克侖特羅含量的檢測。

B.檢測基本原理。運用抗原抗體的特異反應及側向色譜和膠體金技術進行尿液中克侖特羅分子的快速定性檢測。

C.檢測主要儀器。食品加工機，低速離心機，電子秤(精度0.1 g)，250 μL單道微量移液器(移液槍)。

D.檢測材料與試劑。鹽酸克侖特羅檢測卡、檢測試劑A(3%三氯乙酸溶液)、檢測試劑B(0.1 mmol/L氫氧化鈉溶液)、pH試紙、剪刀、10 mL試管(或離心管)、一次性塑料吸管、一次性手套等。

E.檢測的主要操作步驟：從原包裝鋁箔袋中取出檢測卡，在1 h內盡快使用。把肉或內臟樣本用剪刀剪成碎條后放入食品加工機中，用一字刀粉碎，稱取5 g粉碎樣本置于試管中，加入5 mL檢測試劑A。蓋上蓋，搖勻，浸泡約10 min。用離心機離心裝有浸泡液和樣本的試管2 min (3 000 r/min)，用移液槍移取250 μL上清液轉移入2 mL檢測管中，加入約l滴檢測試劑B，調整pH值至7左右。將鹽酸克侖特羅檢測卡片置于干凈平坦的臺面上，用塑料吸管垂直滴加3滴無空氣樣品處理液于加樣孔內，待紫紅色條帶出現后，測試結果在5 min時讀取，進行結果判定。

F.靈敏度。靈敏度(閾值)：按照每種檢測卡控制濃度確定。鹽酸克侖特羅有控制規格，判斷前向供應廠家咨詢控制閾值。

G.檢測中應注意的幾個問題：一是豬組織及尿液采用不同型號的檢測卡，使用時必須分類使用。二是使用鹽酸克侖特羅(尿液)檢測卡對豬尿液檢驗時，直接把豬尿液代替樣品處理液用于檢測。三是肉及內臟中脂肪會造成假陽性結果，取樣時需剔除肉眼可見的脂肪。四是鹽酸克侖特羅檢測卡必須在常溫下使用，不能對剛屠宰的豬肉或冷凍豬肉直接進行檢測。五是自來水、蒸餾水或去離子水不能作為陰性對照，可用與閾值接近的幾個濃度階梯來校驗檢測卡的靈敏度。

2 萊克多巴胺檢測卡檢測技術

A.檢測適用范圍。此類方法應用于豬肉、內臟和豬尿液中萊克多巴胺含量的檢測。

B.檢測基本原理。本試劑運用競爭抑制膠體金免疫色譜的原理。

C.檢測的主要儀器。食品加工機，低速離心機，電子秤(精度0.1 g)，250μL單道微量移液器(移液槍)。

D.檢測材料與試劑。萊克多巴胺檢測卡、檢測試劑A(3%三氯乙酸溶液)、檢測試劑B(0.1 mmol/L氫氧化鈉溶液)、pH試紙、剪刀、1.5 mL離心管、10 mL試管(或離心管)、一次性塑料吸管、一次性手套等。

E.檢測的主要操作步驟：鋁箔包裝袋中取出檢測卡，在1 h內盡快使用。把肉或內臟樣本用剪刀剪成碎條后放入食品加工機中，用一字刀粉碎，稱取5 g粉碎樣本置于試管中，加入檢測試劑A 5 mL。蓋上蓋，搖勻，浸泡約10 min。用離心機離心裝有浸泡液和樣本的試管2 min (3 000 r/min)，用移液槍移取250 μL上清液轉移入2 mL檢測管中，加入約l滴檢測試劑B，調整pH值至7。把萊克多巴胺檢測卡片置于清潔平坦的臺面上，用塑料吸管垂直滴加3滴無空氣樣品處理液于加樣孔內。等待紫紅色條帶的出現，測試結果應在5 min時讀取，進行結果判定。

F.靈敏度。靈敏度(閾值)：按照每種檢測卡控制濃度確定，按萊克多巴胺目前的控制規格，判斷前向供應廠家咨詢控制閾值。

G.檢測中應注意的問題：一是根據豬組織和尿液采用不同的檢測卡，必須區別使用。二是使用萊克多巴胺(尿液)檢測卡對豬尿液進行檢驗時，直接把豬尿液代替樣品處理液用于檢測。三是肉及內臟中脂肪會造成假陽性結果，取樣時應剔除肉眼可見的脂肪。四是萊克多巴胺檢測卡須在常溫下使用，不能對剛屠宰的豬肉或冷凍豬肉直接檢測。五是自來水、蒸餾水或去離子水不能作為陰性對照，可用與閾值接近的濃度階梯來校驗檢測卡的靈敏度。

3 氯霉素檢測卡檢測技術

A.檢測適用范圍。氯霉素檢測卡主要應用于牛乳、尿樣、肝、肉、飼料、乳粉及其制品中氯霉素含量的檢測。

B.檢測基本原理。采用高度特異性的免疫色譜檢測技術，通過單克隆抗體競爭結合氯霉素偶聯物和牛乳中可能含有的氯霉素。卡片上含有被事先固定于膜上測試區(T)的氯霉素偶聯物和被膠體金標記的抗氯霉素單克隆抗體。

C.檢測的主要儀器：低速離心機。

D.檢測材料與試劑：氯霉素檢測卡、檢測反應試劑杯、吸管、1.5 mL離心管、一次性塑料吸管、一次性手套等。

E.檢測的主要操作步驟：以牛乳氯霉素檢測為例，把采集的樣品進行編號，放于常溫(20℃～30℃)室內，低溫牛乳的流動性差，不適合試紙色譜檢測。用一次性吸管取1 mL搖勻原乳，加入離心管內，扣緊離心管蓋，對稱放人離心機轉頭內，3 000 r/min離心3～4 min，直至離心管溶液頂部出現明顯的脂肪層，離心效果較差時可考慮使用較高轉速的離心機，控制速度在7 000～10 000 r/min。把吸管插入離心管脂肪層液面下5 mm處，準確定量吸取脫脂牛乳樣品至吸管刻度線位置。從塑料筒內取出需要數量的反應小杯，撕去杯面的密封膜。把吸取的牛乳全部滴入反應小杯中，用吸管將反應小杯中的溶液進行反復吸放，直至小杯底部及四壁的紅色物質全部溶解并混合均勻后，等待約2 min，即得待檢樣品。必須注意的是：本品的靈敏度高低與混勻后等待的時間正相關，提高靈敏度可適當延長混勻后等待的時間(反應時間)。從原包裝鋁箔袋中取出檢測卡，在1 h內應盡快地使用。用塑料吸管垂直滴加3滴無空氣樣品處理液于加樣孔(S)內。加樣后開始計時，待紫紅色條帶出現后，測試結果在5 min時讀取，進行結果判定。

F.靈敏度。靈敏度(閾值)：按每種檢測卡控制濃度確定，根據氯霉素控制規格，判斷前向供應廠家咨詢控制闡值。

G.檢測中應注意的問題：一是家禽組織、尿液或飼料必須采用不同類別的檢測卡。二是使用氯霉素(尿液)檢測卡對家禽尿樣進行檢驗時，直接將豬尿液代替樣品處理液用于檢測即可。三是檢測家禽肉及內臟中脂肪會導致假陽性結果，取樣時應剔除肉眼可見的脂肪。四是氯霉素檢測卡應在常溫下使用，不能對剛屠宰的禽肉或冷凍禽肉直接檢測。五是自來水、蒸餾水或去離子水不能作為陰性對照，可用與閾值接近的幾個濃度階梯來校驗檢測卡的靈敏度。

4 牛乳中青霉素酶活性檢測試劑盒檢測技術

A.檢測適用范圍。可檢測到牛乳樣品中殘留的青霉素酶。

B.檢測的主要儀器。溫育器，冰箱或保溫箱，單道微量移液器。

C.檢測材料與試劑。微量移液器吸嘴(盒裝96支)，含特定濃度青霉素G的玻璃瓶裝試劑，試劑筒(包括8孔微孔試劑和8條測試條)，陰性質控試劑(不含抗生素和酶的原乳干粉)。

D.檢測的主要操作步驟：吸取400 μL牛乳樣品加到含有一定濃度青霉素G的玻璃試劑瓶中，混合均勻。40℃±3℃溫育45 min。吸取200 μL溫育后牛乳樣品加到裝有凍干試劑的微孔中，混合均勻。40℃±3℃溫育3 min。測試條插入到微孔中，40℃士3℃下繼續溫育3 min，判讀結果。

E.檢測中應注意的問題：一是試劑盒必須保存在℃～8℃的陰涼干燥處。使用前從冰箱取出，恢復至室溫后方可使用。二是陰性質控需要用1 mL。純凈水還原，混合均勻。陰性質控加純凈水還原后需在20℃保存，防止反復凍融。三是該方法不能用于檢測酸奶。四是要確保待測牛乳樣品是抗生素檢測結果陰性。

F.檢測結果判定。其一，陽性(+)牛乳樣品中摻有青霉索酶：若牛乳樣品中含有青霉素酶，青霉素G因其降解，不能抑制青霉素受體與測試條俘獲帶的結合，則測試條的檢測線(T線)區出現紅色條帶，而控制線(C線)區會發生淺紅色的條帶。其二，陰性(-)牛乳樣品中不含青霉素酶：若牛乳樣品中未摻雜青霉素酶，或青霉素酶含量少于可檢測到的范圍，玻璃瓶中的青霉素G會與青霉素受體結合，將抑制青霉素受體與俘獲帶的結合，因此，在測試條上只有控制線(c線)區的一個條帶顯色。其三，溫育結束后，10 min內讀取結果。如超過15 min，檢測結果無效，測試條干燥后顏色深度會增加。若發現陽性檢測結果，必須進行驗證。

5 鏈霉素ELISA試劑盒在檢測中的應用

A.目的要求。理解鏈霉素ELISA試劑盒在蜂蜜、牛乳及組織中鏈霉素檢測中的現實意義。

B.原理方法。應用抗原抗體反應原理，采用競爭抑制法構建用于定量測定蜂蜜、肉類及牛乳中鏈霉素殘留的一種ELISA試劑。

C.檢測的主要器材。恒溫箱(孵箱)，單道微量移液器，塑料吸嘴，洗瓶；酶標儀，洗板機；動物性制品，乳制品等。

D.主要操作步驟：熟悉試劑盒說明書。把試劑盒內的預包被孔條(通常是由12條可拆卸板條組成，每條8孔)，按需要取出8孔條平衡到室溫，操作過程所需的試劑一同取出平衡到室溫。把準備好的供試樣品溶液、標準品、陽性對照、陰性對照等分別定量取到反應微孔內進行孵育，用配套洗液清洗反應微孔。微孔去除多余水分后，逐孔定量加入酶標記物，按要求孵育一定時間，用配套洗液清洗反應微孔。微孔去除多余水分后，逐孔定量加入TMB，按要求避光孵育一定時間，直接判讀定性結果或在酶標儀上讀取OD值。

6 結語

運用食品中獸藥殘留檢測的鹽酸克侖特羅檢測卡檢測技術、萊克多巴胺檢測卡檢測技術、氯霉素檢測卡檢測技術、牛乳中青霉素酶活性檢測試劑盒檢測技術、鏈霉素ELISA試劑盒檢測技術，明確了其檢測適用范圍、基本原理、儀器、材料與試劑、主要操作步驟和應注意的問題，以提升食品檢測技術水平。