畜禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)進(jìn)展

馮騰壘， 宋 瑞， 高景報(bào)， 劉 洋， 許 寧， 趙永坡， 謝 亮

（1. 石家莊市畜產(chǎn)品和獸藥飼料質(zhì)量檢測(cè)中心 050041； 2. 河北省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳 050000；3. 河北省農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站 050000； 4. 石家莊市農(nóng)林科學(xué)研究院 050000； 5. 新樂市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 050000）

氟喹諾酮類藥物是人工合成的第三代抗菌藥物，此類藥物價(jià)格低廉、抗菌作用強(qiáng)，因而被廣泛用于治療畜禽動(dòng)物的細(xì)菌感染疾病[1-3]。常見的氟喹諾酮類藥物有諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星等[4]。但當(dāng)人體食用含有該類藥物的畜禽產(chǎn)品后，會(huì)引發(fā)人體內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂、神經(jīng)系統(tǒng)損傷及誘發(fā)體內(nèi)細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性[5]，因此國(guó)家已規(guī)定了畜禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類化合物的最高殘留限量。但是由于部分從業(yè)人員對(duì)獸藥殘留限量的認(rèn)識(shí)不足，甚至一味兒追求經(jīng)濟(jì)利益，存在不規(guī)范使用該類藥物，甚至在動(dòng)物飼養(yǎng)、飼料中大量使用，使得畜禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類化合物殘留限量超標(biāo)[6]，對(duì)人類身體健康造成嚴(yán)重危害。因此，建立高效、靈敏的方法來檢測(cè)畜禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類藥物變得十分重要。近年來，針對(duì)畜禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類藥物的殘留檢測(cè)方法主要有高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用法[7]、酶聯(lián)免疫吸附法[8]、分子印跡技術(shù)法[9]、高效液相色譜法[10]等。本文闡述了近年來氟喹諾酮類藥物的殘留檢測(cè)進(jìn)展，并為今后該類化合物的檢測(cè)發(fā)展做了展望。

1 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法（HPLC）以液體作為流動(dòng)相，利用高壓輸液泵，將具有不同極性的單一溶劑或混合溶劑等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱中，依據(jù)極性不同將各組分在色譜柱內(nèi)分離后，隨后進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)分析，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的檢測(cè)。近年來又有廠家開發(fā)提供更大壓力的液相色譜系統(tǒng)，使用更高的壓力，更小的流速，使得檢測(cè)時(shí)間大大縮短，而更小的色譜柱粒徑，提高了柱效，改善了峰的分離度。該方法檢測(cè)速度快、靈敏性好、應(yīng)用范圍廣，因此被廣泛應(yīng)用于藥品分析、獸藥殘留檢測(cè)中。

陳薔[11]等利用反相高效液相色譜法，建立了對(duì)雞蛋中4種氟喹諾酮類化合物的殘留檢測(cè)方法。該方法采用正己烷脫脂，利用C18固相萃取柱凈化，反相高效液相色譜分離后，進(jìn)入熒光檢測(cè)器測(cè)定。該方法中達(dá)氟沙星的檢測(cè)限達(dá)到 1μg/kg。平均回收率達(dá)到82.2%～101.3%。劉媛[12]等利用高效液相色譜法，同時(shí)檢測(cè)雞蛋中 4 種氟喹諾酮類藥物。該方法以乙腈-0.05mol/L磷酸/三乙胺緩沖液（pH 2.4）（19∶81）作為流動(dòng)相，并采用熒光檢測(cè)器，來檢測(cè)雞蛋中的4種氟喹諾酮類化合物。該方法中達(dá)諾沙星的最低檢出限為2ug/kg，環(huán)丙沙星、沙拉沙星/恩諾沙星的最低檢出限為10ug/kg，環(huán)丙沙星、恩諾沙星、沙拉沙星在2.5～500ug/l， 達(dá)諾沙星在 0.5～100ug/l線性范圍良好，且雞蛋中 4 種氟喹諾酮類化合物的加標(biāo)回收率為 78.1% ～95.7%。陳小紅[13]等建立了采用高效液相色譜法測(cè)定雞蛋中氟喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)的方法，該方法采用熒光檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量，該方法表明雞蛋中4 種氟喹諾酮類殘留藥物能在 15 min內(nèi)得到有效分離，且達(dá)氟沙星檢測(cè)限達(dá)到2ug/kg，回收率高。

2 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（LC-MS）

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（LC-MS）檢測(cè)化合物殘留是將樣品在液相色譜柱中分離后，隨后進(jìn)入質(zhì)譜系統(tǒng)中，將目標(biāo)化合物分子離子化后，通過測(cè)量各種離子峰的強(qiáng)度，從而實(shí)現(xiàn)檢測(cè)化合物分析方法。

肖英平[14]等建立了高效液相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)原料乳中的氟喹諾酮類化合物殘留的檢測(cè)方法，該方法采集了120份原料乳，結(jié)果表明，19種氟喹諾酮類化合物殘留的的檢出限達(dá)到0.05～0.25ug/L，回收率在88.2%～109.2%。該方法分離效果好、準(zhǔn)確性高。楊朝琳[15]等建立了利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法來分析測(cè)定雞蛋樣品中氟喹諾酮類化合物殘留的方法。該方法利用磷酸-乙腈提取、離心后，經(jīng)流動(dòng)相分離，采用電噴霧離子源，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，進(jìn)行定量分析檢測(cè)。該方法對(duì)8種氟喹諾酮類化合物在濃度為2～50ug/kg之間，線性范圍良好，線性系數(shù)均大于0.9956，8種氟喹諾酮類4化合物殘留的檢出限達(dá)到0.0005 ～0.22ug/kg，回收率為65.4%～119.6%。該方法優(yōu)化了前處理程序，不使用固相萃取柱，并通過基質(zhì)加標(biāo)消除基質(zhì)效應(yīng)，具有經(jīng)濟(jì)可靠、靈敏性高等優(yōu)點(diǎn)。宋偉[16]等建立了利用超高效液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定雞肉中4種氟喹諾酮類化合物的檢測(cè)分析方法，該方法用乙腈提取，并輔助以高速冷凍離心，用流動(dòng)相溶解后，再用乙腈飽和正己烷除脂，最后將樣品用超高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用議進(jìn)行定量分析檢測(cè)。該方法結(jié)果表明，喹諾酮類化合物檢出限為0.1ug/kg，定量限達(dá)到0.5ug/kg，方法回收率為81.5%～97.6%，該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確度高，可作為雞肉中4種氟喹諾酮類化合物的殘留檢測(cè)方法。曹惠[17]等建立了同位素稀釋-固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法來檢測(cè)畜禽肉產(chǎn)品中四類獸藥殘留的方法，該方法以乙腈和0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，在電噴霧正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下，進(jìn)行定量分析測(cè)量。利用該方法測(cè)定的氟喹諾酮類化合物在在5～200ug/L濃度范圍內(nèi)，氟喹諾酮類化合物的線性相關(guān)系數(shù)均大于0.99，方法檢出限在0.5～2.0ug/kg，定量限在2.0～6.5ug/kg，該方法經(jīng)濟(jì)、高效、準(zhǔn)確度高，適用于檢測(cè)畜禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類化合物的快速檢測(cè)和確證。

3 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是一種免疫測(cè)定方法，其是依靠抗原和抗體的特異性反應(yīng)，具有針對(duì)性強(qiáng)、高效、快捷、耗費(fèi)低等優(yōu)點(diǎn)，在獸藥殘留檢測(cè)方面應(yīng)用廣泛。李燕君[18]等建立了用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定牛奶中6種氟喹諾酮類化合物的殘留檢測(cè)方法，該方法在 20℃～25℃下進(jìn)行，結(jié)果表明，本方法建立的酶聯(lián)免疫吸附法的最低檢測(cè)限達(dá)到1.48ug/L，50% 抑制濃度的范圍在 0.254～0.361ug/L； 方法回收率達(dá)到84.58%～115.92%，此方法高速靈敏、精密度高、準(zhǔn)確性好，適用于牛奶中氟喹諾酮類化合物的殘留檢測(cè)分析。李建鯤[19]等建立了用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定了雞蛋中的氟喹諾酮類化合物的殘留檢測(cè)分析，結(jié)果表明，氟喹諾酮類化合物在 0～8.ng/g范圍內(nèi) ，線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù) r 為 0.997 6，50%抑制濃度在0.306～0.351 ng/g，回收率達(dá)到90.0%～102.0%，最低檢測(cè)限達(dá)到 3.2 ng/g，用該方法檢測(cè)雞蛋中氟喹諾酮類藥物靈敏性強(qiáng)、精密度高，檢測(cè)結(jié)果可靠，適用于在雞蛋中檢測(cè)該類化合物。

4 分子印跡技術(shù)方法（MIT）

分子印跡技術(shù)（MIT） 指的是通過制備某種對(duì)目標(biāo)化合物具備高度選擇性的物質(zhì)，從而達(dá)到目標(biāo)化合物分離的目的，該方法能從復(fù)雜的基質(zhì)樣品中選擇性分離目標(biāo)化合物。由于氟喹諾酮類化合物大多具有氫鍵，易于形成分子印跡聚合物，因此分子印跡技術(shù)被廣泛用于測(cè)定畜禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類化合物的測(cè)定方法。

呂運(yùn)開[20]等利用水相系統(tǒng)，制備出諾氟沙星印跡溶膠—凝膠材料，并采用高效液相色譜法檢測(cè)分析魚樣品中的氟喹諾酮化合物殘留，該方法分離效果好、準(zhǔn)確度高。結(jié)果表明，魚樣品中的氟喹諾酮類化合物回收率在88.46%～98.24%，回收率高。杜麗麗等利用加替沙星為模板，并結(jié)合分子印跡技術(shù)，制備出新型的印跡聚合物，該聚合物具有高度識(shí)別性，以此作為填充材料，利用液相色譜法，檢測(cè)牛奶樣品中氟喹諾酮類化合物。利用該方法檢測(cè)牛奶中的加替沙星，其回收率達(dá)到79.87%，具有潛在應(yīng)用價(jià)值。

本文論述了近幾年畜禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類化合物殘留檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展，大多具有高選擇性、靈敏度強(qiáng)、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)，但所需操作復(fù)雜、樣品前處理繁瑣等缺點(diǎn)，因此還需進(jìn)一步開發(fā)新型檢測(cè)氟喹諾酮類化合物的檢測(cè)方法，以檢測(cè)畜禽產(chǎn)品中殘留的氟喹諾酮類藥物。