腦膠質瘤組織中腫瘤壞死因子與MG-Ags的表達及其臨床意義

韓向陽 張紅星 賈樂

(1.宜川縣醫院神經外科，陜西 宜川 716200；2.西北大學附屬西安高新醫院神經內三科，陜西 西安 710000；3.寶雞市中醫醫院病理科，陜西 寶雞 721001)

腦膠質瘤是一類基因、組織和臨床特征存在異質性的顱內原位腫瘤，也是常見的腦部腫瘤，占顱內原位腫瘤的40.0%左右。影像學為腦膠質瘤的重要檢查方法，但是很難明確患者的病情，且主觀性比較強。當前隨著分子生物學研究的逐漸深入，腦膠質瘤的研究逐漸向分子病理學方向發展，特別是當前腦膠質瘤的基因治療方法與診斷方法也已經取得了比較好的效果[1]。腫瘤壞死因子-α(TNF-α)為比較常見的炎性標志物，能加快腫瘤細胞的增殖并抑制腫瘤細胞的凋亡[2]。胃癌抗原(MG-Ags)的表達水平與胃炎、胃癌的發展密切相關，當前也是其他各種惡性腫瘤的重要標志物，比如MG-Ags在血液惡性疾病與消化道惡性疾病中呈現高表達狀況，并參與凋亡、侵襲、增殖、轉移等生物學過程[3]。本文旨在探討腦膠質瘤組織中TNF-α與MG-Ags的表達及其臨床意義，希望尋找腦膠質瘤潛在治療靶點，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年8月至2021年5月在本院診治的腦膠質瘤患者66例，其中男35例，女31例；年齡22～74歲，平均(55.62±4.18)歲；臨床分期：Ⅰ期+Ⅱ期42例，Ⅲ期+Ⅳ期24例；組織學分化：高分化6例，中分化25例，低分化35例；腫瘤轉移35例；病理類型：星形細胞瘤36例，膠質母細胞瘤30例。納入標準：病理診斷為腦膠質瘤；首次手術并且術前未接受任何形式的抗腫瘤治療；年齡20～75歲；臨床資料完整；醫院倫理委員會批準了此次研究；患者簽署了知情同意書。排除標準：合并其他腦部疾病的患者；患有其他嚴重急危重癥病的患者；妊娠與哺乳期婦女；合并其他部位腫瘤者；小學及其以下文化水平者。

1.2方法 (1)標本取樣： 所有患者均接受手術治療，術中留取腦膠質瘤組織(癌灶組)及癌旁組織(癌旁組，距癌組織3 cm處)。抗TNF-α抗體、抗MG-Ags抗體均購自上海優寧維生物科技股份有限公司，免疫組化檢測試劑盒購自上海生工公司，總RNA提取試劑購自大連TAKARA公司。將所有組織標本分為兩部分，一部分置于10%福爾馬林液中固定，另一部分保存于1.5 mL EP凍存管并投至液氮中速凍。(2)熒光定量PCR檢測：提取組織中的總RNA，采用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測TNF-α與MG-Ags mRNA相對表達水平，檢測體系為25 μL，其中樣品量為5 μL。逆轉錄后TNF-α與MG-Ags反應體系：95℃預變性5 min，92℃變性60 s，55.0℃退火45 s，共40個循環，用(目的基因的吸光度值)/(β-actin 吸光度值)代表TNF-α與MG-Ags的mRNA相對表達水平。(3)Western-blot檢測：將組織樣本研磨后，使用RIPA進行裂解、勻漿，3 000 rpm/min離心30 min后棄沉淀，使用考馬斯亮藍法定量上清液蛋白濃度，以聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白后，TBST封閉1 h，加入抗TNF-α抗體與抗MG-Ags抗體，工作濃度都為1：500，4℃過夜保存，TBST洗滌后，加入二抗(工作濃度1：2000)，TBST洗滌后進行化學發光試劑自顯影，記錄與計算TNF-α與MG-Ags的蛋白相對表達水平。

2 結 果

2.1TNF-α、MG-Ags的mRNA與蛋白相對表達水平對比 癌灶組TNF-α與MG-Ags的mRNA相對表達水平均高于癌旁組(t=9.913、12.482，P<0.05)，癌灶組的TNF-α與MG-Ags 蛋白相對表達水平高于癌旁組(t=12.733、9.783，P<0.05)。見表1。

表1 TNF-α、MG-Ags的mRNA與蛋白相對表達水平對比

2.2不同病理特征腦膠質瘤組織的TNF-α與MG-Ags 蛋白相對表達水平對比 在癌灶組中，不同臨床分期、組織學分化、腫瘤轉移的TNF-α與MG-Ags蛋白相對表達水平對比差異均有統計學意義(t=10.933、13.823，10.088、12.742，21.848、17.773，P<0.05)。見表2。

表2 不同病理特征腦膠質瘤組織的TNF-α與MG-Ags蛋白相對表達水平對比

2.3診斷價值分析 ROC曲線顯示TNF-α、MG-Ags與聯合檢測診斷腦膠質瘤的曲線下面積分別為0.782、0.814和0.867，診斷敏感性分別為86.2%、85.8%、90.2%，特異性分別為80.2%、81.3%、88.6%。

3 討 論

腫瘤的發生發展與炎性反應關系密切，其中TNF-α具有促炎作用，在腫瘤轉移、侵襲過程中發揮重要作用[4]。其中腫瘤體內TNF-α來源并不單一，可由腫瘤細胞、單核-巨噬細胞產生，也可由二者共同產生。MG-Ags為一種胃腸道腫瘤相關的一種糖蛋白抗原，當正常組織細胞膜表面糖蛋白結構發生改變時，抗原決定簇可發生巨大變化，可發生出現抗原-抗體特異性結合，為此MG-Ags含量可以反映機體腫瘤相關抗原量的表達水平。MG-Ags對于診斷胃癌具有較高的敏感性及特異性，但是在診斷其他惡性腫瘤患者中也有所報道[5]。本文結果顯示，癌灶組TNF-α、MG-Ags的mRNA與蛋白相對表達水平均高于癌旁組(P<0.05)，表明腦膠質瘤組織中多伴隨有TNF-α、MG-Ags的mRNA與蛋白的高表達。從機制上分析，TNF-α可調控血管內皮生長因子，在多種惡性腫瘤中呈現高表達狀況[6]。特別是腦膠質瘤患者血漿中TNF-α水平升高的患者生存期較短，且與患者的病理特征存在相關性。MG-Ags當前在機體免疫炎性反應中發揮著重要作用，特別是在惡性腫瘤患者的末期，血清MG-Ags表達會發生較大的波動，與患者預后存在相關性[7]。

在腦膠質瘤發生發展的早期過程，病理性血管生成以及腫瘤細胞的侵襲性生長起到了重要作用[8]。本文結果顯示，不同臨床分期、組織學分化、腫瘤轉移的腦膠質瘤組織TNF-α與MG-Ags蛋白相對表達水平對比差異均有統計學意義(P<0.05)；ROC曲線顯示TNF-α、MG-Ags與聯合檢測診斷腦膠質瘤的曲線下面積分別為0.782、0.814和0.867，診斷敏感性均>85.0%，特異性均>80.0%。提示TNF-α與MG-Ags在腦膠質瘤中可能發揮促癌作用，也可反映患者的病情狀況。特別是在正常的中樞神經系統內，小膠質細胞內TNF-α的含量比較低；當中樞神經系統發生損傷后，激活的小膠質細胞可大量產生TNF-α，導致患者的病情惡化[9]。而MG-Ags的高表達可導致蛋白酶體降解磷酸化雌激素受體能減弱，并使其增殖功能，增加細胞的運動性，促進血管生成，參與惡性腫瘤的浸潤[10]。

綜上所述，腦膠質瘤組織中TNF-α、MG-Ags的mRNA與蛋白都呈現高表達狀況，與患者的病理特征明顯相關，也可為診斷與預測腦膠質瘤的重要分子標志物。本研究由于經費比較低，沒有納入非膠質瘤患者，也沒有進行血清學分析，將在后續研究中探討。