基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接探討常見酚酸提高機(jī)體免疫力的作用機(jī)制

張宇欣，劉魏魏，楊 娟，周煒煒，戴小楓，李秀梅, ，鄭 威

（1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150076；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部飼料生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，北京 100081）

免疫系統(tǒng)是抵御外來物質(zhì)或有害物質(zhì)侵襲的第一道防線，包括先天免疫和適應(yīng)性免疫，二者協(xié)作發(fā)揮免疫防御作用保障機(jī)體的健康[1]。近年來由于環(huán)境污染加重、生活壓力加大、運(yùn)動(dòng)量降低、飲食不規(guī)律等原因，導(dǎo)致免疫力下降的人群逐年增多，免疫力低下成為常態(tài)。機(jī)體免疫功能下降會(huì)導(dǎo)致許多疾病的產(chǎn)生，如骨質(zhì)疏松[2]、風(fēng)濕[3]、支氣管哮喘[4]、炎癥性腸病[5]等，提高機(jī)體免疫力是一種很重要的預(yù)防疾病的手段，研究和開發(fā)提高免疫力的藥物或保健品具有重要意義。酚酸（phenolic acids）是指含有酚環(huán)的有機(jī)酸化合物[6]。酚酸的來源廣泛，不僅在植物中含量豐富，在藻類及微生物中也有發(fā)現(xiàn)[7-8]。酚酸根據(jù)骨架結(jié)構(gòu)不同可分為兩類：苯甲酸類和肉桂酸類。常見的苯甲酸類主要包括原兒茶酸、藜蘆酸、沒食子酸等；肉桂酸類主要包括肉桂酸、芥子酸、對(duì)香豆酸等[9]。還有部分酚酸是簡(jiǎn)單酚酸的衍生物，不在此分類范圍，如綠原酸和鞣花酸[10]。

大量研究表明酚酸具有抗氧化、抑菌、抗炎、抗病毒、提高免疫力等多種藥理活性。然而，關(guān)于酚酸類化合物提高免疫力的研究和報(bào)道卻比較少。如，咖啡酸可以增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞的溶酶體活性，阿魏酸和對(duì)香豆酸明顯促進(jìn)了LPS誘導(dǎo)的B細(xì)胞的增殖[11]，對(duì)香豆酸處理大鼠后，大鼠血清中免疫球蛋白含量顯著升高，吞噬指數(shù)降低，遲發(fā)性超敏反應(yīng)引起的炎癥顯著減少[12]，綠原酸可以增加斷奶仔豬血清中的IgG，促進(jìn)B細(xì)胞及T細(xì)胞的增殖[13]。盡管已有研究報(bào)道了酚酸類化合物的提高免疫力作用，但酚酸化合物提高免疫力作用機(jī)制的研究尚未揭示清楚，在一定程度上限制了酚酸類化合物的應(yīng)用。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是以多學(xué)科為基礎(chǔ)，運(yùn)用多門技術(shù)從整體角度闡釋藥物治療疾病的機(jī)制、疾病的發(fā)展過程的分析手段[14]，系統(tǒng)的揭示了“藥物-靶點(diǎn)-疾病-通路”之間復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，被廣泛的應(yīng)用于機(jī)制研究中。目前，已有研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究中草藥提高機(jī)體免疫力的作用機(jī)制[15]，因此本文擬通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)常見酚酸的免疫增強(qiáng)作用進(jìn)行挖掘及機(jī)理研究，以期為后續(xù)酚酸類化合在免疫活性方面的深入研究和開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 常見酚酸類化合物及其靶點(diǎn)的收集

通過中國知網(wǎng)、PubMed、Web of Science查閱相關(guān)文獻(xiàn)，收集有提高免疫力功效的常見酚酸類化合物，采用TCMSP數(shù)據(jù)庫（https://www.tcmsp-e.com/）、STITCH數(shù)據(jù)庫（http://stitch.embl.de/）以及SwissTargetPrediction在線靶點(diǎn)篩選平臺(tái)（http://swisstargetprediction.ch/）收集這些酚酸的靶點(diǎn)，將結(jié)果整合去重。利用Cytoscape3.8.0軟件構(gòu)建常見酚酸類化合物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖。

1.2 提高免疫力相關(guān)靶點(diǎn)篩選

以“immunity”、“boost immunity”為檢索詞，在GeneCard數(shù)據(jù)庫（https://www.genecards.org/）、OMIM數(shù)據(jù)庫（https://www.omim.org/）檢索提高免疫力的相關(guān)靶點(diǎn)，將結(jié)果整合去重，得到提高免疫力相關(guān)靶點(diǎn)。

1.3 常見酚酸類化合物與提高免疫力蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

利用Venny2.0.1（https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html）將常見酚酸類化合物靶點(diǎn)與提高機(jī)體免疫力靶點(diǎn)取交集，將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫（https：//string-db.org/）進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，限定研究物種為“人”（“Homo sapiens”），最低互作評(píng)分設(shè)置為“最高置信度”（highest confidence（0.900）），得到常見酚酸類化合物作用于提高機(jī)體免疫力靶點(diǎn)的 PPI 網(wǎng)絡(luò)。將PPI結(jié)果數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape3.8.0軟件作進(jìn)一步分析。以degree、betweenness centrality、closeness centrality為參考依據(jù)，篩選得到核心靶點(diǎn)。

1.4 富集通路分析

將核心靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫（https://david.ncifcrf.gov/），分別選擇生物過程（biological process，BP）、分子功能（molecular function，MF）和細(xì)胞組成（cell component，CC）進(jìn)行基因本體（Gene Ontology，GO）功能分析，選擇京都基因與基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）進(jìn)行通路富集分析，分析結(jié)果以偽發(fā)現(xiàn)率（false discovery rate，F(xiàn)DR）＜0.01，P值＜0.01進(jìn)行篩選，P值越小表明結(jié)果越顯著。得到常見酚酸類化合物提高機(jī)體免疫力的主要生物過程及主要信號(hào)通路，并將結(jié)果進(jìn)行可視化。

1.5 分子對(duì)接

分別在TCMSP數(shù)據(jù)庫和PCSD PDB數(shù)據(jù)庫（https://www.rcsb.org/）搜索下載小分子化合物和蛋白質(zhì)的3D結(jié)構(gòu)，將其分別導(dǎo)入PyMOL軟件進(jìn)行去水及加氫，導(dǎo)出為pdb格式，將pdb文件導(dǎo)入Auto Dock軟件靶蛋白選為受體，小分子選為配體并設(shè)置扭轉(zhuǎn)鍵后導(dǎo)出為pdbqt格式文件。將兩個(gè)文件重新導(dǎo)入Auto Dock軟件設(shè)置對(duì)接參數(shù)，運(yùn)行Autodockvina進(jìn)行對(duì)接，選取結(jié)合能最低的構(gòu)象為最優(yōu)構(gòu)象。采用PyMOL軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行可視化。

2 結(jié)果與分析

2.1 常見酚酸類化合物收集

在中國知網(wǎng)、PubMed及Web of science數(shù)據(jù)庫中搜索具有提高機(jī)體免疫力的常見酚酸類化合物，得到共計(jì)36個(gè)酚酸類化合物（表1），收集靶點(diǎn)共計(jì)496個(gè)，通過Cytoscape3.8.0軟件對(duì)上述酚酸類化合物及靶點(diǎn)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)關(guān)系構(gòu)建（圖1）和分析。按照degree值從高到低的順序進(jìn)行排序（表2），其中，連接靶點(diǎn)最多的為咖啡酸苯乙酯（Caffeic acid phenethyl ester），degree值為106，其次為阿魏酸乙酯（Ethyl ferulate），其degree值為100。

表2 常見酚酸類化合物Degree值排序Table 2 Order of degree value of common phenolic acids

圖1 常見酚酸類成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖Fig.1 Component - target network of common phenolic acids

表1 常見酚酸類化學(xué)成分信息Table 1 Information on chemical constituents of common phenolic acids

2.2 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)（PPI）構(gòu)建

通過GeneCard數(shù)據(jù)庫和OMIM數(shù)據(jù)庫收集免疫相關(guān)靶點(diǎn)共計(jì)16691個(gè)。利用Venny2.0.1將常見酚酸類化合物靶點(diǎn)與提高機(jī)體免疫力靶點(diǎn)取交集，得到常見酚酸提高免疫力的潛在作用靶點(diǎn)共454個(gè)（圖2）。

圖2 常見酚酸與提高免疫力靶點(diǎn)Venn圖Fig.2 Venn diagram of common phenolic acid for enhancing immune function

將常見酚酸調(diào)節(jié)免疫的潛在作用靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)分析（圖3），得到358個(gè)靶點(diǎn)，1633條邊，平均度值為7.21。

圖3 常見酚酸提高免疫力蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖Fig.3 Protein-protein interaction of common phenolic acid for enhancing immune function

將PPI結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape3.8.0進(jìn)行分析，依據(jù)degree值、betweenness centrality、closeness centrality進(jìn)行篩選，取每項(xiàng)均高于平均值的靶點(diǎn)，篩選得到34個(gè)核心靶點(diǎn)（表3），繪制出常見酚酸類化合物提高機(jī)體免疫力關(guān)鍵靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖（圖4）。圖中包括34個(gè)靶點(diǎn)，190條邊，節(jié)點(diǎn)越大、節(jié)點(diǎn)顏色越深代表該靶點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中越重要，由此可見SRC、MAPK1、HSP90AA1、AKT1、TP53、STAT3、JUN、RELA在酚酸類化合物提高機(jī)體免疫力的過程中發(fā)揮重要作用。

圖4 常見酚酸類化合物提高機(jī)體免疫力的核心靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖Fig.4 Core target network of common phenolic acid for enhancing immune function

表3 常見酚酸類化合物提高機(jī)體免疫力的核心靶點(diǎn)Table 3 Core targets of common phenolic acid for enhancing immune function

續(xù)表 3

2.3 GO功能分析及KEGG通路富集

將核心靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫進(jìn)行GO分析及KEGG分析。得到GO條目100條（FDR＜0.01，P＜0.01），其中BP條目58條，CC條目9條，MF條目33條。將各個(gè)條目基因數(shù)排名前15的條目進(jìn)行可視化（圖5）。結(jié)果顯示，這些靶點(diǎn)主要涉及正調(diào)控RNA聚合酶II啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄（positive regulation of transcription from RNA polymerase II promoter）、轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控，DNA模板化（positive regulation of transcription, DNA-templated）、凋亡過程的負(fù)調(diào)節(jié)（negative regulation of apoptotic process）等生物過程，且主要在核（nucleus）、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)（cytosol）、核質(zhì)（nucleoplasm）等部位通過蛋白結(jié)合（protein binding）、酶結(jié)合（enzyme binding）、相同蛋白質(zhì)結(jié)合（identical protein binding）等方式對(duì)生物過程進(jìn)行調(diào)節(jié)。

圖5 常見酚酸提高免疫力核心靶點(diǎn)的GO基因功能富集分析Fig.5 Go enrichment analysis of core targets of common phenolic acid for enhancing immune function

KEGG富集分析得到120條通路（FDR＜0.01，P＜0.01）。列出基因數(shù)量排名前20的通路（表4），并將分析結(jié)果可視化（圖6）。結(jié)果表明，常見酚酸類化合物提高機(jī)體免疫力主要涉及癌癥通路（Pathways in cancer）、多聚糖腫瘤通路（Proteoglycans in cancer）、丙型肝炎（Hepatitis C）、乙型肝炎（Hepatitis B）、甲狀腺激素信號(hào)通路（Thyroid hormone signaling pathway）等多條通路，其中與免疫直接有關(guān)的通路包括MAPK信號(hào)通路（MAPK signaling pathway）、PI3KAkt信號(hào)通路（PI3K-Akt signaling pathway）、TNF信號(hào)通路（TNF signaling pathway）、FcεRI信號(hào)通路（Fc epsilon RI signaling pathway）、T細(xì)胞受體信號(hào)通路（T cell receptor signaling pathway）等。用Cytoscape3.8.0軟件繪制核心靶點(diǎn)-成分-通路網(wǎng)絡(luò)圖（圖7），圖中包含85個(gè)節(jié)點(diǎn)，360條邊，圖中一個(gè)成分可對(duì)應(yīng)多個(gè)靶點(diǎn)，一個(gè)靶點(diǎn)可對(duì)應(yīng)多條通絡(luò)，可見酚酸通過多途徑、多靶點(diǎn)起作用。

圖6 常見酚酸提高免疫力核心靶點(diǎn)KEGG通路富集分析Fig.6 KEGG pathway analysis of core targets of common phenolic acid for enhancing immune function

圖7 核心靶點(diǎn)-成分-通路網(wǎng)絡(luò)圖Fig.7 Core target-component-pathway network

表4 常見酚酸提高免疫力核心靶點(diǎn)KEGG通路富集分析結(jié)果Table 4 KEGG pathway analysis of core targets of common phenolic acid for enhancing immune function

2.4 分子對(duì)接

采用AutoDock軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證，蛋白質(zhì)選取核心靶點(diǎn)中degree值為前5的靶點(diǎn)，分別為SRC（PDB ID:4hxj）、MAPK1（PDB ID:7nr8）、HSP90AA1（PDB ID: 7kw7）、AKT1（PDB ID:1unq）、TP53（PDB ID:2k8f），小分子選取核心靶點(diǎn)-成分-通路網(wǎng)絡(luò)中Degree值排名前5的化合物，分別為迷迭香酸、迷迭香酸甲酯、鞣花酸、阿魏酸乙酯、芥子酸。以結(jié)合能為篩選條件，結(jié)合能越低結(jié)合構(gòu)象越穩(wěn)定（表5），結(jié)合能小于-5.0 kcal/mol，說明分子對(duì)接結(jié)果良好。將各靶點(diǎn)中結(jié)合能最低的結(jié)果運(yùn)用PyMOL軟件進(jìn)行可視化（圖8）。

圖8 關(guān)鍵靶點(diǎn)與關(guān)鍵成分分子對(duì)接模式圖Fig.8 Molecular docking pattern of key component and key targets

表5 關(guān)鍵靶點(diǎn)與關(guān)鍵成分的分子對(duì)接結(jié)合能（kcal/mol）Table 5 Binding energy of key component and key targets (kcal/mol)

3 討論與結(jié)論

免疫系統(tǒng)是維持機(jī)體健康的重要防線，免疫系統(tǒng)功能下降會(huì)導(dǎo)致各種疾病的產(chǎn)生，提高免疫系統(tǒng)功能可以抵御外來病原微生物入侵、清除體內(nèi)有害成分、突變及衰老細(xì)胞，從而達(dá)到維持機(jī)體健康，避免疾病的目的。本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法對(duì)常見酚酸類化合物提高機(jī)體免疫力的作用靶點(diǎn)及作用機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)分析。

分析結(jié)果表明，常見酚酸類化合物提高機(jī)體免疫力的核心靶點(diǎn)有34個(gè)，其作用機(jī)制主要涉及SRC、MAPK1、HSP90AA1、AKT1、TP53、STAT3、JUN、RELA等多個(gè)靶點(diǎn)。SRC屬于非受體酪氨酸激酶家族，是膜受體與細(xì)胞質(zhì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的重要紐帶，通過參與TBK1介導(dǎo)的IFN1通路、IL-33介導(dǎo)的DUOX1通路啟動(dòng)先天性免疫應(yīng)答[16-17]。MAPK是一類進(jìn)化保守的絲/蘇氨酸蛋白激酶，MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)在先天免疫中起重要作用[18]，有研究表明MAPK1可以介導(dǎo)T、B細(xì)胞的生長分化，通過調(diào)節(jié)體液免疫和細(xì)胞免疫提高機(jī)體免疫能力[19]。HSP90AA1是熱休克蛋白的核心成員之一，具有極強(qiáng)的免疫應(yīng)答效應(yīng)，自然界中的致病菌可刺激機(jī)體產(chǎn)生HSP90AA1，誘導(dǎo)細(xì)胞自噬，可以有效的控制早期感染[20]。AKT1是調(diào)節(jié)免疫、降低炎癥反應(yīng)、抗癌的關(guān)鍵靶點(diǎn)，有研究發(fā)現(xiàn)，AKT1基因敲除的小鼠其巨噬細(xì)胞偏向于致炎的M1型極化[21]，而激活A(yù)KT1會(huì)導(dǎo)致巨噬細(xì)胞偏向于抗炎的M2型極化[22]，M2型巨噬細(xì)胞有著強(qiáng)大的免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用[23]。TP53是一種抑癌基因，起到控制細(xì)胞周期的作用[24]，同時(shí)參與了DNA修復(fù)機(jī)制，對(duì)于內(nèi)源或外源因素導(dǎo)致的DNA損傷起修復(fù)作用，在免疫調(diào)節(jié)過程中起重要作用[25]。STAT3一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，在發(fā)育或成熟的組織中起到調(diào)節(jié)免疫及炎癥反應(yīng)的作用[26]，研究表明，STAT3可以在病原菌入侵時(shí)可迅速增加中性粒細(xì)胞的供應(yīng)，啟動(dòng)先天免疫來控制感染[27]。JUN參與了免疫細(xì)胞的增殖與分化，有研究表明，抑制JUN信號(hào)通路可明顯降低炎癥浸潤小鼠血漿中炎癥因子的表達(dá)量[28]。RELA是NF-κB家族的重要成員，靜息狀態(tài)下，RELA與IκB結(jié)合，受到刺激時(shí)I-κB降解激活RELA發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用，調(diào)控NF-κB下游靶基因[29]。

由核心靶點(diǎn)-成分-通路網(wǎng)絡(luò)中可知，核心靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)成分有31個(gè)，其中連接核心靶點(diǎn)數(shù)量較多的成分分別為迷迭香酸、迷迭香酸甲酯、鞣花酸、阿魏酸乙酯、芥子酸。細(xì)胞凋亡是控制免疫反應(yīng)的一種方式，免疫抑制劑可以通過誘導(dǎo)免疫細(xì)胞凋亡來抑制有害的免疫反應(yīng)，迷迭香酸可以作為免疫抑制劑調(diào)控T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的非正常增殖，對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)起到調(diào)節(jié)作用[30]。梁正敏等[31]研究表明，迷迭香酸可以顯著下調(diào)IL-4水平的升高，顯著上調(diào)IFN-γ水平的降低，明顯改善卵清蛋白引發(fā)的哮喘及免疫調(diào)節(jié)失衡。迷迭香酸甲酯在體外免疫實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出良好的免疫抑制活性，研究表明，迷迭香酸甲酯可通過抑制IL-2的產(chǎn)生來抑制T細(xì)胞的增殖[32]，然而其抑制IL-2的產(chǎn)生機(jī)制還需進(jìn)一步探索。鞣花酸是一種天然的免疫調(diào)節(jié)劑，可以抑制脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的樹突狀細(xì)胞中共刺激分子的表達(dá)，阻斷LPS誘導(dǎo)的JNK的激活，使促炎因子IL-12和IFN-γ表達(dá)減少，通過調(diào)節(jié)LPS對(duì)樹突狀細(xì)胞的影響來調(diào)節(jié)免疫[33]。阿魏酸乙酯作為阿魏酸的衍生物之一具有廣泛的藥理作用與生物活性，由于其脂溶性較阿魏酸高，其進(jìn)入細(xì)胞膜的能力強(qiáng)，藥效也隨之增強(qiáng)。有研究表明，阿魏酸乙酯可以通過激活 AMPK/Nrf2信號(hào)通路來緩解脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷，并抑制了促炎因子的表達(dá)[34]。芥子酸可通過抑制巨噬細(xì)胞內(nèi)NF-κB的活性來調(diào)節(jié)炎癥及免疫反應(yīng)[35]，同時(shí)芥子酸還具有很高的抗氧化及抗菌活性，且其抑制食源性致病菌的同時(shí)不會(huì)對(duì)乳酸菌產(chǎn)生影響[36]。

酚酸類化合物調(diào)節(jié)免疫的能力可能與其抗氧化能力和抗炎能力有關(guān)[37]，酚酸類成分具有特定的酚羥基，這種空間結(jié)構(gòu)是影響生物活性的關(guān)鍵因素[38]。據(jù)報(bào)道，化合物影響免疫系統(tǒng)功能主要是因?yàn)槠浣Y(jié)構(gòu)中含有羥基，影響了酶或電子的傳遞[11]。酚羥基中和自由基后失去一個(gè)氫形成穩(wěn)定的半醌式結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定的自由基，從而終止鏈?zhǔn)椒磻?yīng)[38]，同時(shí)，羥基作為強(qiáng)供電子基團(tuán)可以顯著增強(qiáng)酚酸類化合物的抗氧化活性，當(dāng)苯環(huán)上的羥基數(shù)量小于4時(shí)，其抗氧化能力與可以形成氫鍵的羥基數(shù)量成正相關(guān)[39]。Nakamura等[40]通過化學(xué)結(jié)構(gòu)研究證明迷迭香酸中抗氧化的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是鄰二酚羥基，迷迭香酸是鄰二酚羥基化合物的二聚體，這表明RoA可能比簡(jiǎn)單的酚類藥物具有更大的自由基清除作用，且C3位的共軛雙鍵對(duì)其具有增效作用。Yuan等[41]研究表明，迷迭香酸甲酯中的羰基可以螯合金屬基質(zhì)酶-1（MMP-1）中的鋅離子形成配位鍵，另一個(gè)羰基與氮原子形成離子鍵，末端的兩個(gè)酚羥基與酶的疏水結(jié)構(gòu)域形成氫鍵，迷迭香酸甲酯與MMP-1的高親和度導(dǎo)致了酶的失活從而影響一系列的病理過程。眾所周知，羥基的數(shù)量和位置可能會(huì)顯著影響多酚的抗氧化活性[42]，所以在相同條件下，由于二聚體鞣花單寧中羥基更豐富，會(huì)表現(xiàn)出比單體鞣花單寧更高的抗氧化活性[43]。但鞣花酸在鞣鏈單寧抗氧化能力測(cè)試中顯示出最有效的ABTS清除活性[43]，盡管鞣花酸的羥基比二聚體和單體鞣花單寧少，這種現(xiàn)象可能是由于鞣花酸的分子量較低，降低了空間位阻并提高了其靈活性。阿魏酸乙酯酚羥基的鄰位有甲氧基結(jié)構(gòu)，形成分子內(nèi)氫鍵，所以氫原子與自由基結(jié)合能力降低，其抗氧化能力有限[44]，阿魏酸乙酯清除自由基能力低于阿魏酸，但乙基酯化降低了阿魏酸乙酯的極性，表現(xiàn)出較高的親脂性，促進(jìn)該化合物在細(xì)胞膜上的運(yùn)輸，可使其進(jìn)入細(xì)胞發(fā)揮作用[45]。芥子酸在酚羥基的鄰位位置具有兩個(gè)甲氧基，兩個(gè)強(qiáng)供電子基團(tuán)使氫原子更容易被自由基獲取，所以芥子酸是單體結(jié)構(gòu)中最有效的抗氧化劑[46]。

為進(jìn)一步了解核心靶點(diǎn)的功能及作用通路，對(duì)34個(gè)核心靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能富集及KEGG通路富集分析，GO分析結(jié)果顯示，常見酚酸類成分主要調(diào)控RNA聚合酶II啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄正調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控，DNA模板化、凋亡過程的負(fù)調(diào)節(jié)、RNA聚合酶II啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的負(fù)調(diào)控等方面。KEGG通路富集分析結(jié)果顯示，常見酚酸類化合物提高機(jī)體免疫力主要涉及癌癥通路、多聚糖腫瘤通路、丙型肝炎、乙型肝炎、甲狀腺激素信號(hào)通路、EB病毒感染通路、病毒致癌作用、MAPK信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、催乳素信號(hào)通路等多條信號(hào)通路，說明酚酸類化合物通過調(diào)節(jié)多條通絡(luò)發(fā)揮調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力的作用。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果顯示，迷迭香酸、迷迭香酸甲酯、鞣花酸、阿魏酸乙酯、芥子酸在核心靶點(diǎn)-成分-通路網(wǎng)絡(luò)中degree值較高，因此將五種化合物與核心靶點(diǎn)排名前五的靶點(diǎn)SRC、MAPK1、HSP90AA1、AKT1、TP53進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果顯示其結(jié)合能大部分小于-5 kcal/mol，說明常見酚酸的關(guān)鍵成分與核心靶點(diǎn)蛋白結(jié)合穩(wěn)定。

綜上所述，本研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測(cè)了常見酚酸類化合物提高機(jī)體免疫力的關(guān)鍵成分、作用靶點(diǎn)，其關(guān)鍵成分有迷迭香酸、迷迭香酸甲酯、鞣花酸、阿魏酸乙酯、芥子酸，核心靶點(diǎn)有SRC、MAPK1、HSP90AA1、AKT1、TP53、STAT3、JUN、RELA等，其作用機(jī)制在于通過癌癥通路、多聚糖腫瘤通路、丙型肝炎、乙型肝炎、MAPK信號(hào)通路等多條通路調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力，下一步需要對(duì)分析得到的酚酸、靶點(diǎn)及通路進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，為進(jìn)一步研究及臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。