運用Logistic 回歸聯合ROC曲線評估miR-19b-3p對抑郁癥療效的預測價值

蔣宏云，周晉波，劉 然

(四川省內江市第二人民醫院精神科，四川 內江 641100)

抑郁癥是最常見的一種心理性疾病，以持續性心情低落、興趣減退為典型特征的精神障礙，其具有較高的發病率，截止至2019年，我國抑郁障礙終身患病率為6.8%[1]。據2017年WHO有關全球疾病負擔統計顯示，抑郁障礙的傷殘調整生命年(從發病到死亡所損失的全部健康壽命)上升至第11位，且其可能成為僅次于心血管疾病的第二大疾病負擔源，給個體、家庭和社會帶來嚴重經濟負擔[2]。抑郁癥患者往往伴隨很高的自殺風險，有10%～15%患者死于自殺，抑郁癥導致的自殺是影響家庭及社會安定的重要因素之一[3]。目前，抑郁癥治療方式以藥物治療為主，常用的抗抑郁藥物能較好改善患者病情，治愈率較高，但仍有部分患者預后較差，且復發率較高[4]。鑒于此，明確影響抑郁癥患者預后不良的危險因素有助于該病的治療?，F如今，臨床上缺乏有效的預測抑郁癥患者預后的生物指標，因此研究抑郁癥患者血清指標對該病的預測顯得尤為重要。研究表明微小RNA(microRNA，miRNA)在抑郁癥患者腦組織、外周血中均存在異常表達[5]。miR-19b-3p是miRNA家族中的一員，其在正常人的外周血中表達較低，可穩定存在人體血清中，且有研究顯示其能調節神經細胞遷移[6]?，F有研究顯示，miR-19b-3p水平變化與生活壓力關系密切，可增加精神障礙的患病風險[7]。Chen等[8]研究顯示，miR-19b-3p是區分雙相抑郁癥和單相抑郁癥的生物標志物。而Yoshino等[9]研究發現，抑郁癥患者背外側前額葉皮層突觸中miR-19b-3p的表達呈明顯上調趨勢，可能參與了抑郁癥的發生與發展。但目前國內尚無關于血清miR-19b-3p水平對抑郁癥患者預后影響的研究報道，本研究以抑郁癥患者為研究對象，探討血清miR-19b-3p在此類患者治療前后差異性表達及其與預后相關性。

1 資 料 與 方 法

1.1一般資料 選取2019年1月—2020年6月本院收治的抑郁癥患者112例為研究對象(病例組)，另選取同期于本院進行體檢的健康志愿者60例作為對照組。2組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。納入標準：①病例組均符合美國精神障礙診斷與統計手冊第5版對抑郁癥的診斷標準[10]；②年齡≥18歲；③未合并其他類型精神疾?。虎苡谢镜臏贤ń涣髂芰?；⑤均知情同意。排除標準：①合并有嚴重心腦血管疾病或糖尿病；②近期服用過免疫抑制劑；③合并嚴重器質性病變；④伴有惡性腫瘤者；⑤伴有嚴重軀體疾病；⑥合并有感染性疾病者。

本研究經過醫院倫理委員會批準。

表1 2組一般資料比較Table 1 Comparison of general data between two groups

1.2方法

1.2.2血清miR-19b-3p水平檢測 采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction，PCR)法檢測血清中miR-19b-3p表達水平，病例組在治療前及治療后取患者空腹外周靜脈血4 mL，對照組于入院體檢時取空腹外周靜脈血4 mL，將獲取的血液樣品放入離心機，以3 500 r/min離心10 min，離心半徑10 cm，獲得血清，向血清樣本中加入細胞裂解液，采用Trizol試劑提取樣本中的總RNA，將獲得總RNA經Agilent Bioanalyzer 2100電泳質檢合格后在進行逆轉錄操作。采用逆轉錄試劑盒將總RNA逆轉為模板單鏈cDNA，采用rt-PCR法檢測miR-19b-3p相對表達量，PCR反應條件為：共40個循環，94 ℃變性3 min，退火后是55～59 ℃復性30 s，72 ℃延伸1 min。以U6為內參，其中miR-19b-3p逆轉錄正向序列：F5′-GACACTTAGCGATGAATTCAGAATA-3′，反向序列：R5′-GATGCTGCCTTAGCATGACCTAGG-A-3′，U6引物正向序列：F5′-TGACTAGCAGC-AGAGGATAATATCG-3′，反向序列：R5′-ACGTGGCGCATCATAGTACTTAGGC-3′。以2-△△Ct表示miR-19b-3p相對表達量。

1.2.3病例組臨床療效評估 在治療結束后對病例組進行臨床療效評估，評估標準[11]：參考漢密爾頓——抑郁量表(Hamilton Depression Scale，HAMD)評分，共包括24項問題，多數項目采用0～4分的5級評分法，少數項目采用0～2分的3級評分法，以HAMD評分減分率判定臨床療效，顯效：HAMD評分減分率>75%；有效：HAMD評分減分率在25%～75%；無效:HAMD評分減分率<25%，總有效率=(顯效+有效)/總例數×100%。

1.2.4分組 根據治療后臨床療效分為預后良好組和預后不良組，其中臨床療效顯效、有效的患者納入預后良好組(79例)，將治療無效的患者納入預后不良組(33例)[12]。

1.2.5資料收集 收集可能影響抑郁癥患者預后不良的相關因素，包括性別、年齡、抑郁癥家族史、治療依從性差、家庭社會支持情況[采用家庭支持量表(Family Support Scale,PSS-Fa)和社會支持評定量表(Social Support Rating Scale，SSRS)評估[13]]、體重指數(body mass index，BMI)、總病程、發作次數、婚姻狀況、與鄰里關系(采用自擬一般情況調查表進行調查)、伴有精神病癥狀、血清miR-19b-3p(治療前后)水平、居住地、運動情況(采用自擬一般情況調查表進行調查，經常、不經常)、重大生活事件、受教育情況。

1.3觀察指標 ①比較病對照組與病例組(治療前)血清miR-19b-3p表達水平；②病例組治療前后血清miR-19b-3p表達水平比較；③單因素分析可能影響抑郁癥患者預后不良的相關因素；④Logistic回歸分析明確影響抑郁癥患者預后不良的危險因素；⑤繪制受試者工作特征(receiver operating characteristical，ROC)曲線評價血清miR-19b-3p水平對抑郁癥患者預后的評估價值。

1.4統計學方法 應用SPSS 26.0統計軟件分析數據。計數資料比較采用χ2檢驗；計量資料比較采用獨立樣本t檢驗和配對t檢驗；抑郁癥患者預后不良的危險因素分析采用多因素Logistic回歸分析。預測價值分析采用ROC曲線。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1血清miR-19b-3p水平 治療前，病例組血清miR-19b-3p水平高于對照組(P<0.05)，治療后，病例組血清miR-19b-3p水平為低于治療前(P<0.05)。見表2。

表2 血清miR-19b-3p水平Table 2 Serum miR-19b-3p levels

2.2單因素分析影響抑郁癥患者預后不良的相關因素 預后不良組性別、年齡、BMI、總病程、婚姻狀況、居住地、運動情況、受教育情況與預后良好組比較差異無統計學意義(P>0.05)。預后良好組抑郁癥家族史(陽性)、治療依從性差、家庭社會支持情況差、與鄰里關系差、重大生活事件占比，發作次數、治療前后血清miR-19b-3p水平均高于預后良好組，治療猴的血清miR-19b-3p水平高于治療前，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 單因素分析影響抑郁癥患者預后不良的相關因素Table 3 Univariate analysis of related factors for poor prognosis in patients with depression

2.3Logistic回歸分析影響抑郁癥患者預后不良的危險因素 將抑郁癥患者預后情況作為因變量(預后良好=0，預后不良=1)，將單因素分析有意義的因素：抑郁癥家族史、治療依從性差、家庭社會支持情況、發作次數、與鄰里關系、伴有精神病癥狀、miR-19b-3p、重大生活事件作為自變量進行Logistic回歸分析，賦值見表4。經Logistic回歸分析顯示治療依從性差、家庭社會支持情況差、伴有精神病癥狀、miR-19b-3p水平(治療前后)、重大生活事件均是影響抑郁癥患者預后不良的危險因素(P<0.05)。見表5。

表4 Logistic回歸分析法賦值Table 4 Logistic regression analysis assignments

表5 Logistic回歸分析影響抑郁癥患者預后不良的危險因素Table 5 Logistic regression analysis of risk factors for poor prognosis in patients with depression

2.4血清miR-19b-3p水平對抑郁癥患者預后不良的預測價值 ROC曲線分析顯示，治療前血清miR-19b-3p水平預測抑郁癥患者預后不良的曲線下面積(area under curve，AUC)、敏感度、特異度、最佳截斷點分別為0.739、78.56%、64.28%、11.25。見圖1A。治療后血清miR-19b-3p水平預測抑郁癥患者預后不良的AUC、敏感度、特異度、最佳截斷點分別為0.756、80.75%、60.15%、7.14。見圖1B，表6。

圖1 不同時間點血清miR-19b-3p水平對抑郁癥患者預后價值評估ROC曲線圖A.治療前血清miR-19b-3p水平對抑郁癥患者預后價值評估ROC曲線圖;B.治療后血清miR-19b-3p水平對抑郁癥患者預后價值評估ROC曲線圖Figure 1 ROC curve of the prognostic value of serum miR-19b-3p levels at different time points in patients with depression

表6 不同時間點血清miR-19b-3p水平對抑郁癥患者預后的預測價值Table 6 Predictive value of serum miR-19b-3p levels at different time points for prognosis in patients with depression

3 討 論

抑郁癥是常見的精神障礙之一，近年來，隨著社會經濟快速發展，生活壓力的升高，不同年齡群體之間思想觀念的沖擊，促使抑郁癥發病率不斷提升，且呈年輕化發展趨勢[14]。目前，臨床上關于抑郁癥發病機制尚不明確，通過現有研究發現抑郁癥患者體內存在相應腦區神經元功能異常及氧化應激失衡等證據，懷疑抑郁癥發生可能與神經分化異常、線粒體功能障礙及免疫功能紊亂等有關[15]。藥物治療是治療抑郁癥首先方式，尤其是對中度及以上的患者而言，現有抗抑郁藥物能有效改善患者臨床癥狀，提高臨床治愈率及患者生存質量，預防復發，但仍有部分患者臨床癥狀改善效果不明顯，預后差[16]。因此，明確影響抑郁癥患者預后不良的危險因素，有助于改善患者預后，提高治愈率，已成為醫護工作者追求的目標。

miRNA是一類由18～22個核苷酸構成的單鏈非編碼蛋白質RNA，其被證實參與多種疾病的發生及發展[17]。據報道，miRNA在腦組織中大量表達，在中樞神經系統發育和神經元分化過程中扮演者重要角色，其通過參與調控神經干細胞增殖分化、神經遞質釋放、神經可塑性的形成等影響神經系統發育及相關疾病發展[18]。相關研究顯示已有多種miRNA參與了抑郁癥的發病與進展過程，如miR-34a[19]、miR-323a[20]、miR-326[21]等。Wang等[22]研究顯示miR-19b-3p沉默能顯著能加小鼠海馬神經祖細胞的增殖，調節神經元分化。劉濤等[21]研究顯示miR-19b-3p能調節巨噬細胞氧化應激機制。本研究主要分析miR-19b-3p在抑郁癥患者治療前后的表達差異性及其與預后的關系。miR-19b-3p首先對比了治療前病例組與對照組血清miR-19b-3p水平，結果顯示病例組血清miR-19b-3p水平高于對照組。同時病例組在治療后血清miR-19b-3p水平為低于治療前，提示血清miR-19b-3p可能參與了抑郁癥的發生及發展，可用于評估抑郁癥患者的臨床療效。分析其原因可能是因為血清miR-19b-3p能調控海馬神經細胞增殖及神經元分化，且能有效調節巨噬細胞氧化應激有關，相關研究有待進一步研究。

本研究結果還顯示預后良好組抑郁癥家族史(陽性)、治療依從性差、家庭社會支持情況差、與鄰里關系差、重大生活事件占比，發作次數、治療前后血清miR-19b-3p水平高于預后良好組。提示上述因素可能是影響抑郁癥患者預后不良的相關因素。為進一步確定影響抑郁癥患者預后不良的危險因素，本研究對單因素有統計學意義的因素進行Logistic回歸分析，結果顯示治療依從性差、家庭社會支持情況差、伴有精神病癥狀、miR-19b-3p(治療前后)、重大生活事件均是影響抑郁癥患者預后不良的危險因素。暗示了治療依從性差、家庭社會支持情況差、伴有精神病癥狀、miR-19b-3p(治療前后)、重大生活事件與抑郁癥患者預后不良的關系密切。提示影響抑郁癥患者預后不良的危險因素較多，其中治療依從性差會導致抑郁癥反復發作，加重疾病程度，不利于預后；而家庭社會支持情況差與重大生活事件易導致患者心理負擔過重，情緒不佳，這是誘發抑郁癥發生及產生治療抗拒的主要誘因之一，亦是導致患者反復發作的主要原因，從而不利于患者預后；伴有精神病癥狀的患者會加重病情，使得患者治療依從性差，導致治療效果差，進而影響預后；氧化應激與神經細胞的的增殖分化與抑郁癥的發生與發展關系密切，是影響抑郁癥患者預后的關鍵因素，而miR-19b-3p可能是通過影響患者機體內在海馬神經細胞的增殖分化或氧化反應影響患者病情，進而影響患者預后。上述結果揭示了抑郁癥患者預后受多種因素的影響，但本研究的重點在于觀察血清miR-19b-3p水平對抑郁癥患者預后的影響，故本研究對此類患者治療前后的水平進行ROC，觀察其對該類患者預后的評估價值。結果還顯示治療前血清miR-19b-3p水平預測抑郁癥患者預后不良的AUC、敏感度、特異度、最佳截斷點分別為0.739、78.56%、64.28%、11.25。治療后血清miR-19b-3p水平預測抑郁癥患者預后不良的AUC、敏感度、特異度、最佳截斷點分別為0.756、80.75%、60.15%、7.14。再次暗示了miR-19b-3p水平異常表達與抑郁癥的患者預后不良關系密切，血清miR-19b-3p水平可用于預測抑郁癥患者的預后。分析原因可能在于miR-19b-3p與氧化應激反應有關，能反映氧化應激的損傷程度，而氧化應激反應有參與抑郁癥的發生發展。另外miR-19b-3p能調節海馬神經祖細胞的增殖，參與神經元分化，神經分化情況與抑郁癥的發生相關。因此，miR-19b-3p是否是通過影響患者氧化應激反應與神經細胞的增殖與分化來影響抑郁癥的發生與發展的仍需進一步進行基礎研究來發掘。

綜上所述，血清miR-19b-3p在抑郁癥患者體內呈異常高表達，與此類患者預后有一定的關系，在一定程度上可作為抑郁癥患者預后的有效預測指標。本研究亦存在一定的不足，首先樣本量少，未對血清miR-19b-3p影響抑郁癥患者預后的機制進行研究，在今后的研究中可通過進行多中心研究擴大樣本量，同時可通過一系列基礎研究，觀察miR-19b-3p影響抑郁癥患者預后機制。其次，本研究中運動情況、鄰里關系是通過本院自擬一般情況調查表進行調查獲得，內容可能存在偏倚。