液相色譜-串聯質譜法對云南省白扁豆中多種農殘的質量檢測分析*

鄧淙友，王閩予，羅文安，謝文凱，官永河，吳輝強，曲麗媛

（廣東一方制藥有限公司/廣東省中藥配方顆粒企業重點實驗室，廣東佛山 528244）

豆科植物白扁豆（Dolichos lablab L.,DLL），在中國和印度等亞非洲地區廣泛種植。在傳統醫學中，白扁豆是經典的藥食兩用的農作物，其具有一定的健脾理氣，化濕消暑的作用，被用來治療胃腸道疾病。在現代醫學中，白扁豆提取物被驗證具有抗高膽固醇血癥、中毒、胃腸道痙攣、霍亂、嘔吐、腹瀉的作用，也具有其抗糖尿病、抗炎、鎮痛、抗氧化[1-3]、降血脂、殺蟲和抗石活性。市面上銷售的白扁豆以顆粒飽滿、均一，果實干燥，果皮顏色為白色者為佳，而結莢率與產量等息息相關；同時在種植過程中，白扁豆常會產生銹病、葉斑病、蚜蟲等病蟲害[4]。為保證產量和經濟效益，農戶常常施以大量的農藥或者肥料以保證白扁豆的產量，而這種農藥過度使用的現象會導致大量的農藥殘留。農藥殘留是影響食品安全的最重要問題之一，隨著我國大量農藥的禁止，農藥殘留的風險逐漸降低。然而，仍然可以檢測到一些劇毒的農藥。目前，應用于農殘檢測的主要方法有：氣相色譜法、高效液相色譜法、電位滴定法、化學法、免疫分析法、毛細管電泳法等，但上述方法靈敏度較低很難達到痕量物質監測。隨著GC-MS/MS和UPLC-MS/MS方法的廣泛應用，高分辨率質譜篩選方法的高靈敏度和可進行特異性監控的優勢使得其成為未來農藥監測的發展趨勢。基于上，本論文采用固態萃取-UPLC-MS/MS聯用技術，通過離子對監測方法對藥典規定的33種習用農藥建立了監測體系，并對來自云南產地的15批白扁豆進行多農藥殘留檢測。結果表明，氧甲拌磷、氨氟靈和鼠立死為主要檢出農藥均處于較低的風險水平。

1 材料與方法

1.1 樣品采集信息 共采集源于云南省的15批白扁豆樣品，并經中國中醫科學院中藥研究所進行DNA鑒定為為豆科植物扁豆Dolichos lablab L.的干燥成熟種子。

由圖5可知，不同pH發酵條件下得到的小麥醬油滋味有明顯差異。相比于自然pH發酵的醬油，pH 6.5條件下發酵的醬油鮮味更強，這與其含有更多的谷氨酸有關。二者在咸味上無明顯差異，但pH 6.5小麥醬油的苦味更強，自然發酵醬油則在甜味、酸味上更強。pH 6.5小麥醬油的苦味更加強烈，原因不明。

表1 15批次白扁豆樣品采集信息

1.2 主要儀器 島津LC40-8045三重四極桿液質聯用儀（日本島津有限公司）；ME204E型萬分之一分析天平、XP26型百萬分之一分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；DC12H防腐型12位氮吹儀（ANPEL公司）；MTV-100多管漩渦混合儀（杭州奧盛儀器有限公司）；LXJ-ⅡC型低速臺式大容量離心機（上海安亭科學儀器廠）；Milli-Q超純水裝置（美國默克公司）

1.3 試劑PRiMEHLB固相萃取柱（美國Waters公司）；提取試劑包（迪馬科技有限公司，6g無水硫酸鎂、1.5g醋酸鈉）、乙腈（色譜純：賽默飛公司）、丙酮（分析純：廣州化學試劑廠）、正己烷（色譜純：天津市科密歐化學試劑有限公司）、乙酸乙酯（分析純：西隴科學股份有限公司）、日本島津526種農藥混標套裝，貨號：380-03586-A（526種農藥混標套裝）。乙酸（分析純：西隴科學股份有限公司）；其余試劑均為分析純；水為超純水。

1.4 溶劑配制 對照品貯備溶液的制備精密稱取適量的農藥對照品，分別用乙腈配制成濃度為1g/L的對照品的溶液，于-20℃保存備用。

2.2 方法學驗證 精密量取上述各對照品貯備液適量，配制成混合標準品溶液，測定標準曲線。各標準曲線線性關系良好，線性系數（r）均在99%以上，檢出限范圍在0.0002～0.03（mg/kg）之間，可滿足標準定量范圍0.005～0.1（mg/kg）的測定。以白扁豆藥材作為空白基質，進行基質加標回收率實驗，分別取6份樣品進行測定，加樣回收率均在70.3%～127.4%之間，RSD均在24.6%之內，基本滿足白扁豆中中農藥殘留分析的要求，具體結果見表4。

綜上所述,本研究發現排除明顯的眼底疾病對視網膜厚度的影響,術前CV較大,CAT較厚的白內障患者在術后獲得更好的視力,而CST因其變異程度較高,誤差較大,本研究未發現其與白內障術后最佳矯正視力的相關性。所有因素包括年齡都會影響黃斑視網膜神經纖維的厚度,即黃斑視網膜厚度。這會進一步影響黃斑部視網膜功能,最終影響中心矯正視力。這些細微的變化往往不會被肉眼或其他檢查發現。因此SD-OCT術前對黃斑部視網膜厚度的測量,包括CV和CST的測量可以在術前對白內障術后的最佳矯正視力有一定的預估作用,從而為選擇人工晶狀體提供可靠有力的依據。[4]OCT可以作為在黃斑區視網膜功能和術后視力的準確評估的重要方法。

1.6 LC-MS/MS檢測條件

生態建設涉及多行業多部門,強化地方生態建設部門的組織體系,加強多部門的協調統一,形成合力,在統一規劃的基礎上，使各部門的生態建設投資按照“渠道不亂，用途不變，各投其資，各記其功”的原則，各司其職，各盡其責，集中投入，對水土流失進行規模化綜合治理。建議成立京津冀生態建設協調管理機構。

1.4.3 基質混合對照品溶液的制備 分別精密稱取6份空白基質，每份3.0g，置氮吹儀上于40℃水浴濃縮至約0.4mL，臨用前用已經配制成濃度分別為5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L與400μg/L的系列基質混合對照品溶液。

1.6.2 質譜條件 以三重四極桿串聯質譜儀檢測；離子源為電噴霧離子源，依據表3選擇正離子或負離子掃描模式。監測模式為多反應監測，各化合物保留時間、監測離子對的參考值見表3。為提高檢測靈敏度，可根據保留時間分段監測各農藥。

1.4.2 混合對照品溶液的制備 精密移取上述各對照品貯備液適量，用含0.05%醋酸的乙腈分別制成濃度為l00μg/L和1000μg/L的混合對照品溶液，于-20℃保存備用。

表2 梯度洗脫表

1.6.1 色譜條件[5]以十八烷基硅烷鍵合核殼硅膠為填充劑（柱長15cm，內徑為3mm，粒徑為2.7μm）；以0.05%甲酸溶液（含10mmol/L甲酸銨）為流動相A，以0.05%甲酸的甲醇溶液（含10mmol/L甲酸銨）為流動相B，按下表2進行梯度洗脫；柱溫為35℃，流速為0.4ml/min。

2 實驗結果與討論

2.1 農藥質譜條件的摸索 采用多反應監測模式，對522種農藥進行質譜方法開發，通過檢測定量和定性離子對進行快速分析策略進行樣品測定。定性離子對具有該農藥的結構特征性片段；定量離子對的響應值和穩定性均符合相應要求。并同時根據該農藥的最佳錐孔電壓和離子對的碰撞能，具體篩選出來離子對見表3，幾個代表性農藥質譜圖見圖1。

1.5 供試品制備 取適量供試品，粉碎成粉末（過三號篩）后，精密稱取約3.0g供試品與15mL的1%冰醋酸溶液混合均勻后，放置30min后，精密加入乙腈15mL與內標溶液100μL，快速渦旋振蕩5min，加入7.5g的無水硫酸鎂與無水乙酸鈉混合粉末（4:1），快速渦旋振蕩3min，冰水浴10min，離心（4000r/min）5min，棄去沉淀物。取上清液9mL，置已預先裝有凈化材料的分散固相萃取凈化管（無水硫酸鎂900mg，N-丙基乙二胺300mg，十八烷基硅烷鍵合硅膠300mg，硅膠300mg，石墨化炭黑90mg）中，快速渦旋振蕩5min，離心（4000r/min）5min，精密吸取上清液5ml，氮吹至約0.4mL，加乙腈定容至lmL，渦旋混勻，用微孔濾膜（0.22μm）濾過，取續濾液，即得。

表3 522種農藥質譜信息（節選）

圖1 代表性農藥質譜圖

1.4.1 內標貯備溶液的制備 精密稱取適量的氘代倍硫磷對照品，用乙腈配制成濃度為1000mg/L的內標貯備溶液，于-20℃保存備用。

在高速公路橋梁施工項目中，伸縮縫的焊接過程非常關鍵，要從U形鋼筋加固開始，有效減少預埋筋和異型鋼筋梁加固的不匹配問題，確保錨桿和梁端預埋件焊接拉力和伸縮型鋼筋管理焊接整體壓力的一致性，從而維護管理項目的基本水平。需要注意的是，技術部門為了有效對后期牢固性和焊縫的飽滿性進行約束，就要整合電焊固定效果，確保在一定程度上維護技術結構。

體育課程內容分為課內和課外兩部分，對于課內的內容體育教師可以自行把控，但是對于課外的體育鍛煉就是處于愛莫能助的狀態。在運動手環的幫助下，課外鍛煉也變得可控。通過運動手環的GPS定位功能，能夠對學生的課外鍛煉進行全面情況了解，活動時間、活動范圍、活動距離、心率情況等一概能夠掌握。

表4 農藥含量測定方法學結果

續表

2.3 云南不同產地的白扁豆農藥殘留樣品測定 分別將15批白扁豆的樣品進行農藥殘留分析，具體結果如表所示。在白扁豆中，藥典規定的522農藥中有18種被檢測出殘留，分別涵蓋了殺蟲劑、除草劑、殺菌劑、有機殺螨劑、植物生長調節劑和殺鼠劑[6]，其中：氧甲拌磷（殺蟲劑）在各批次中均有檢出，氨氟靈（除草劑）在13批次的白扁豆中均有檢出，鼠立死（殺鼠劑）在其中9批次的白扁豆中均有檢出，檢出的農藥殘留情況如表5所示。

表5 15批次白扁豆中農藥殘留分布情況

2.4 膳食風險評估 農藥殘留主要影響食品藥品的安全性，《中華人民共和國食品藥品安全法》規定食品的生物性、化學性和物理危害性進行評估以作為其膳食安全性指標。在我國，白扁豆種植廣泛，年產量和銷量逐步上升，2020年白扁豆年產達17.4萬噸，云南省為白扁豆的中國主產地之一，也是主要出口產地之一，為準確評估云南省白扁豆的膳食風險。對市面上采集到的來自于云南的15批白扁豆樣品進行測定，被主要檢測出的氨氟靈對人和牲畜低毒，甲拌磷屬于高毒農藥。GB2763-2016中指出甲拌磷的每日允許攝入量（ADI值）為0.0007mg/kg b.w，按照最大殘留限值0.01mg/kg計算，一個體重60kg的健康成年人，每日攝取大于4.2Kg的白扁豆才可能存在安全風險。

3 結論

本研究通過UPLC-MS/MS聯用技術，檢測農藥特征離子對建立了藥典規定的522種習用農藥的檢測方法，該方法靈敏度高檢測迅速，可以滿足白扁豆中農藥殘留的快速檢測需求。同時應用該方法檢測了來自來自云南省的15批白扁豆樣品的農藥殘留，并針對檢測結果進行了膳食暴露風險評估，為白扁豆的食品藥品監督管理體系的建立奠定了理論依據。