血漿miR-27、microRNA-125在糖尿病視網膜病變患者中的表達意義

林婷婷

大慶油田總醫院眼科，黑龍江大慶 163001

2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus， T2DM）是

以多種病因導致糖代謝紊亂為特征的慢性代謝疾病，而糖尿病視網膜病變（diabetic retinopathy, DR）是T2DM所引起的較為嚴重的全身微血管并發癥，是損害患者視功能的重要原因[1-2]。T2DM的發生與飲食、生活習慣、年齡等相關，近年臨床發病率呈明顯升高趨勢，DR的患病率也隨之增加，嚴重影響廣大群眾身心健康[3]。相關研究發現，微小核糖核酸（microRNAs， miR）參與細胞增殖、分化與凋亡等過程，與血管病變地發生密切相關[4]。miR-27為miR家族主要成員，已被臨床證實與心血管病變進程存在密切關系，直接參與調節炎癥氧化應激反應等過程，并可干擾機體脂代謝。而miR-125能經調節P38/MAPK信號通路，參與腫瘤進展。miR-125b為miR-125家族的一員，參與調控各種病理與生理過程，其異常表達和糖尿病進程、胰島素抵抗等關系密切。然而對miR-27、miR-125b是否參與DR發病過程尚未明確，還有待進一步研究。基于此，本研究以2019年6月—2021年6月大慶油田總醫院收治的63例DR患者為研究對象，分析miR-27、miR-125b在DR患者機體內的表達。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將本院收治的63例DR患者納入觀察組，同期收治的60例單純T2DM患者納入對照組，另將同期于本院體檢的59名健康體檢者納入健康組。研究經醫學倫理委員會批準。健康組中男36名，女23名；年齡39～69歲，平均年齡為（56.42±5.57）歲。對照組中男31例，女29例；年齡40～68歲，平均年齡為（56.37±5.48）歲。觀察組中男33例，女30例；年齡41～68歲，平均年齡（56.29±5.41）歲。3組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 納入與排除標準

納入標準：DR患者經實驗室檢查確診；眼壓正常；所有研究對象臨床資料齊全；納入對象均是自愿參與，簽訂知情同意書。排除標準：合并凝血功能異常者；存有惡性腫瘤者；肝腎功能衰竭者；近期有手術與創傷史者；存有白內障、青光眼等眼部疾患者；存有精神疾患，或存有語言或視聽障礙，難以進行正常交流者；合并免疫系統疾病者。

1.3 方法

標本采集：所有研究對象于入組后的第2天，采集其空腹5 mL靜脈血，留存待檢。檢測方法：運用Trizol法提取血液內的總RNA，運用Nanodrop2 000 C超微量分光光度計測定RNA濃度與純度，依據反轉錄試劑盒把總RNA合成cDNA，然后制備逆轉錄反應體系，以2-ΔΔCt法計算miR-27、miR-125b相對表達量。

1.4 觀察指標

①3組miR-27、miR-125b相對表達量對比。②miR-27、miR-125b檢測DR的效能：繪制受試者工作曲線（ROC），探究miR-27與miR-125b單獨和聯合檢測診斷DR的效能。

1.5 統計方法

采用SPSS 20.0統計學軟件分析數據，符合正態分布的計量資料以（±s）表示，多組間比較采用方差分析；繪制ROC，探究miR-27與miR-125b單獨和聯合檢測診斷DR的效能，以曲線下面積（area under curve, AUC）進行診斷價值評價（AUC≤0.5表明無診斷價值；0.5＜AUC≤0.7表明診斷價值較低；0.7＜AUC≤0.9表明診斷價值中等；AUC＞0.9則表明診斷價值較高）。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組miR-27、miR-125b相對表達量比較

觀察組的miR-27與miR-125b相對表達量高于對照組與健康組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 3組miR-27、miR-125b相對表達量對比(±s)

表1 3組miR-27、miR-125b相對表達量對比(±s)

組別健康組（n=59）對照組（n=60）觀察組（n=63）F值P值miR-27 1.03±0.16 1.88±0.24 2.87±0.35 742.737＜0.001 miR-125b 1.15±0.19 2.21±0.20?2.69±0.32 622.002＜0.001

2.2 miR-27、miR-125b檢測DR的效能

ROC結果顯示，miR-27、miR-125b聯合檢測的AUC[0.916（95%CI：0.857～0.975）]高于兩項指標單獨檢測[0.877（95%CI：0.808～0.945）、0.837（95%CI：0.766～0.908）]。見表2、圖1。

圖1 miR-27、miR-125b檢測DR效能的ROC圖

表2 miR-27、miR-125b檢測DR的效能

3 討論

T2DM約占糖尿病患病人數的90%，為臨床常見與多發疾病，呈血糖升高、胰島素抵抗及胰島素相對缺乏等特征，患者病發后伴體重減輕、煩渴及頻尿等癥狀表現，部分患者還伴有酸痛、多食及疲倦等表現，若不及時入院診治，隨著病情持續發展會誘發微血管病變，導致多種并發癥，還可能導致腎臟衰竭、截肢等[5]。DR是臨床常見的、嚴重的糖尿病微血管并發癥，現已被證明DR可損害T2DM患者視功能，致使患者視力障礙，甚至失明[6]。近年相關報道指出，DR為蛋白質非酶糖基化反應、多元醇通路激活、miRNA基因調控及蛋白激酶C激活等不同基因參與調節的階段性疾病，尤其miRNA參與DR發病過程已引起臨床重點關注[7]。

miRNA作為非編碼單鏈小分子RNA，存在為高度保守性，調控超過50%的蛋白質轉錄與翻譯，已被臨床證實參與2型糖尿病、惡性腫瘤、心血管病變及炎癥反應形成等相關過程。miR-27為其家族內的一員，是常見的小分子RNA類型，首次由宮頸癌細胞株分離獲得，現已被證實在乳腺癌等多種實體瘤的發病、增殖與遷移過程中起到參與作用[8]。miR-27具有促血管生成等作用，可通過阻止靶基因轉錄，加速血管內皮生長因子受體2的信號傳導，促使血管新生[9]。本研究結果顯示，觀察組的miR-27相對表達量高于對照組與健康組，表明miR-27參與DR的發病過程。其原因為miR-27常分布在血管與細胞豐富的組織內，與血管功能及穩態的關系高度密切，于血管內皮細胞中表達較高，能對血管內皮細胞功能實施調控，干擾血管的穩態及功能，參與受損血管地修復及新生、老化等相關病理、生理過程[10-11]。而DR呈糖尿病微血管病變與視網膜新生血管等特點，miR-27過度表達會促使DR新生血管形成，對血管生長因子的表達實施誘導，加快細胞分化、增殖，加重眼部病變。miR-125家族進化過程中高度保守，由miR-125b、miR-125a、miR-125b-2組成。其中miR-125b是一種潛在的臨床診斷與預后評估標志物，在多種惡性腫瘤病灶組織內表達水平顯著上調，能加速腫瘤病灶細胞增殖與轉移進程，強化腫瘤細胞侵襲性；且在不同惡性腫瘤的化療耐藥中發揮不同調節作用，被臨床認為是治療惡性腫瘤的潛在靶點。有臨床研究證實，2型糖尿病患者的外周血相關單核細胞內miR-125b表達明顯上調，說明miR-125b可能參與2型糖尿病有關發病機制，還可能是臨床治療糖尿病的新靶點生物分子[12]。同時，miR-125b能夠參與調節胰島素信號通路，其表達水平升高可能與DR患者的胰島素抵抗有關[13]。本研究結果顯示，觀察組miR-125b相對表達量高于對照組與健康組，表明miR-125b與DR患者的病情聯系緊密。本研究ROC結果顯示，miR-27、miR-125b聯合檢測的AUC[0.916（95%CI：0.857～0.975）]高于兩項指標單獨檢測[0.877（95%CI：0.808～0.945）、0.837（95%CI：0.766～0.908）]，提示聯合檢測miR-27、miR-125b可提高DR早期檢出率。其原因為miR-27、miR-125b聯合檢測可避免單一指標檢測的不足，為DR診斷提供更為可靠的參考，故診斷準確性更高。

綜上所述，DR患者的血清內miR-27、miR-125b呈高表達，對兩項指標進行聯合檢測可為臨床診斷DR提供較為可靠的參考。