高遷移率族蛋白B1在糖尿病周?chē)窠?jīng)病變患者血清中的表達(dá)及臨床意義

馬永賓

常州市金壇第一人民醫(yī)院，江蘇常州 213200

糖尿病周?chē)窠?jīng)病變（diabetic peripheral neuropathy, DPN）是糖尿病最為嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，影響高達(dá)60%的糖尿病患者，且經(jīng)常會(huì)發(fā)生難以愈合的足部潰瘍，最終導(dǎo)致壞疽，甚至截肢[1]。由于DPN早期發(fā)病隱匿，當(dāng)出現(xiàn)臨床癥狀時(shí)，周?chē)窠?jīng)病變多已經(jīng)進(jìn)展至晚期。因此，早期診斷對(duì)于延緩DPN的進(jìn)展，進(jìn)而改善其不良結(jié)局具有重要意義。目前，神經(jīng)肌電圖神經(jīng)傳導(dǎo)速度檢查和震動(dòng)感覺(jué)閾值分別被認(rèn)為是臨床診斷DPN的重要評(píng)估手段，但這兩者不僅需要專(zhuān)門(mén)的醫(yī)師進(jìn)行繁瑣的操作，且不能實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的臨床篩查，限制了其臨床的應(yīng)用[2-3]。探尋新型、高效且無(wú)創(chuàng)的DPN診斷生物標(biāo)志物顯得尤為重要。DPN被認(rèn)為是一種炎癥性疾病[4]。研究表明，高遷移率族蛋白B1（high mobility group box 1 protein, HMGB1）是一種促炎細(xì)胞因子，其不僅可以以被動(dòng)形式從壞死細(xì)胞中釋放，也可作為主動(dòng)形式響應(yīng)炎癥信號(hào)。Thakur V等[5]研究表明，在糖尿病神經(jīng)疼痛性大鼠和小鼠模型中，脊髓背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中HMGB1的表達(dá)顯著升高，且在體外高糖誘導(dǎo)的神經(jīng)元中HMEG1表達(dá)亦顯著升高。這提示，HMGB1可能是DPN潛在的生物預(yù)測(cè)指標(biāo)。然而，目前關(guān)于HMGB1在DPN患者血清中的水平以及對(duì)DPN臨床診斷價(jià)值尚不清楚。因此，本研究擬通過(guò)檢測(cè)2021年1—12月常州市金壇第一人民醫(yī)院收治的50例DPN患者血清中HMGB1的含量，進(jìn)而評(píng)估其對(duì)DPN臨床應(yīng)用的診斷價(jià)值，從而為DPN的早期診斷提供一種潛在生物預(yù)測(cè)指標(biāo)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院內(nèi)分泌科收治和確診的DPN患者50例作為DPN組和同期本院健康體檢者20名為對(duì)照組。對(duì)照組男14名，女6名；平均年齡（56.75±15.31）歲。DPN組患者男31例，女19例；平均年齡（60.90±10.48）歲。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究已通過(guò)常州市金壇第一人民醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)；②符合DPN診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，且無(wú)糖尿病足、視網(wǎng)膜病變及嚴(yán)重肝、腎、心主要臟器病變癥狀。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期糖尿病等特殊類(lèi)型的糖尿病者；②腰椎性病變、格林巴利綜合征等原因誘發(fā)的非糖尿病性周?chē)窠?jīng)病變者；③目前正在使用的非甾體性藥物者；④伴發(fā)其他疾病者，如腫瘤、嚴(yán)重的肝臟疾病、自身免疫疾病以及其他類(lèi)型的感染性疾病者。

1.3 方法

①血清標(biāo)本采集與處理：DPN患者和健康體檢正常者空腹采集靜脈血標(biāo)本，其中采集的靜脈全血分別放入乙二胺四乙酸鹽(ethylenediamine tetraacetic acid, EDTA)抗凝紫色頭真空管（2 mL）中用于分析糖化血紅和含有分離膠的黃色頭真空管中（5 mL）。隨后將黃色頭的真空管置于離心機(jī)中，3 000 rpm，離心5 min分離血清用于生化和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)檢測(cè)。

②血清生化項(xiàng)目檢測(cè)：將上述離心獲得的血清置于AU5800全自動(dòng)生化分析儀（Becman Coulter）檢測(cè)血糖相關(guān)生化指標(biāo)。使用H9糖化血紅蛋白檢測(cè)分析儀（普門(mén)）檢測(cè)。

③血清HMGB1含量檢測(cè)：人HMGB1試劑盒、ELISA試劑盒購(gòu)自武漢華聯(lián)科生物技術(shù)有限公司（貨號(hào)：HM10235），具體操作步驟參加試劑盒說(shuō)明書(shū)。使用AMR-100酶標(biāo)儀（杭州奧盛儀器有限公司）檢測(cè)450 nm處光密度值并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線后計(jì)算樣本中HMGB1的濃度。

1.4 觀察指標(biāo)

①兩組空腹血糖、餐后2 h血糖水平；②兩組血清中HMGB1的濃度。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以(±s)表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血糖指標(biāo)比較

DPN組空腹血糖以及糖化血紅蛋白顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組血糖指標(biāo)對(duì)比(±s)

表1 兩組血糖指標(biāo)對(duì)比(±s)

血糖指標(biāo)空腹血糖（mmol/L）糖化血紅蛋白（%）對(duì)照組（n=20）4.92±0.31 3.53±0.85 DPN組（n=50）9.41±3.40 9.05±2.66 t值5.880 9.030 P值＜0.05＜0.05

2.2 兩組血清中HMGB1含量分析

對(duì)照組和DPN組患者血清中HMGB1的含量分別為（28.70±7.46）ng/mL、（112.64±27.69）ng/mL，DPN組的HMGB1含量顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=13.311，P＜0.001）。見(jiàn)圖1。

圖1 兩組患者血清中HMGB1含量

3 討論

DPN是糖尿病最為常見(jiàn)和早期發(fā)展的并發(fā)癥，約占糖尿病患者的60%，其經(jīng)常會(huì)導(dǎo)致反復(fù)性的足部潰瘍，最終進(jìn)展為足部壞疽而截肢，這也是全球截肢的第二大原因[6]。由于DPN早期發(fā)病隱匿，多數(shù)罹患DPN的患者臨床確診時(shí)神經(jīng)病變程度已進(jìn)展至晚期，從而錯(cuò)過(guò)最佳的治療時(shí)機(jī)，且預(yù)后較差。目前，對(duì)DPN早期診斷仍然缺乏有效的檢測(cè)手段。神經(jīng)肌電圖神經(jīng)傳導(dǎo)速度檢查等為DPN的診斷提供了有價(jià)值的參考，但其操作繁瑣，價(jià)格昂貴，且不利于臨床開(kāi)展大規(guī)模的篩查應(yīng)用。在本研究中，通過(guò)檢測(cè)DPN患者血清中的HMGB1含量，在一定程度上為早期篩查和診斷DPN提供了可參考的生物預(yù)測(cè)指標(biāo)。

HMGB1是一種存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的高度保守的核蛋白。在病理?xiàng)l件下，HMGB1可以通過(guò)壞死或受損的體細(xì)胞被動(dòng)釋放到細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外環(huán)境，從而參與炎癥地發(fā)生和發(fā)展，且已被證實(shí)其是炎癥發(fā)生的“觸發(fā)因素”[7-9]。近年來(lái)，研究表明HMGB1在神經(jīng)炎癥和神經(jīng)病態(tài)地發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。Thakur V等[5]研究顯示，HMGB1在糖尿病疼痛性神經(jīng)病變大鼠和小鼠模型的脊髓背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中的表達(dá)水平顯著升高，且在體外高糖誘導(dǎo)的神經(jīng)元中HMGB1表達(dá)也顯著升高。在尿鏈霉素誘導(dǎo)的糖尿病神經(jīng)病變性疼痛模型中，腰椎背角神經(jīng)元中HMGB1表達(dá)顯著上調(diào)[10]。這些研究主要在動(dòng)物模型及細(xì)胞水平進(jìn)行探究，而在人DPN血清中未見(jiàn)報(bào)道。基于臨床前轉(zhuǎn)化研究考慮，本研究探索人DPN患者血清中HMGB1的表達(dá)情況，結(jié)果顯示DPN患者血清中的HMGB1含量顯著高于健康體檢的對(duì)照組（P＜0.05）。這提示HMGB1可能在DPN的進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮了一定的作用。Zhao H等[11]報(bào)道，靶向HMGB1地表達(dá)能抑制炎癥反應(yīng)促進(jìn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存活，進(jìn)而改善了糖尿病視網(wǎng)膜病變。本研究也進(jìn)一步為DPN，尤其是下肢神經(jīng)病變提供了潛在的治療靶點(diǎn)。

最近報(bào)道顯示，膿毒血癥患者血清中HMGB1含量顯著升高，且認(rèn)為測(cè)量膿毒血癥患者血清中的HMGB1對(duì)于臨床判斷膿毒血癥長(zhǎng)期預(yù)后以及初始治療決策具有相當(dāng)重要的價(jià)值[12-14]。這提示，HMGB1可能作為膿毒血癥患者的預(yù)后生物預(yù)測(cè)指標(biāo)。在研究中，DPN患者血清中的HMGB1含量顯著高于健康體檢的對(duì)照組（P＜0.05）。提示HMGB1可能是潛在DPN生物預(yù)測(cè)指標(biāo)[15-17]。然而，值得注意的是，本研究樣本量較小，接下來(lái)仍需要臨床多中心聯(lián)合研究以驗(yàn)證其有效性。此外，本研究仍存在局限性，沒(méi)有評(píng)估初次發(fā)現(xiàn)的糖尿病患者血清中HMGB1的含量，在接下來(lái)的研究中也將對(duì)此進(jìn)行進(jìn)一步的對(duì)比研究，從而為HMGB1成為DPN診斷生物預(yù)測(cè)指標(biāo)成為可能。

綜上所述，DPN患者血清中HMGB1顯著升高，檢測(cè)HMGB1對(duì)于臨床早期診斷和篩查DPN具有一定的參考價(jià)值，也為DPN的治療提供了潛在的靶點(diǎn)。