氣相色譜法測定胃痛片中4種化學成分含量*

古炳明，鄔偉魁，劉佳

（廣東省梅州市食品藥品監督檢驗所，廣東 梅州 514011）

胃痛片是由蒼術、厚樸、香附、高良姜、陳皮、碳酸氫鈉等制成的中西藥復方制劑，具有芳香行氣、和中止痛功效，用于胃酸過多、胃痛及脘悶、嘔吐等屬氣滯證的治療［1］。現行質量標準《國家食品藥品監督管理總局國家藥品標準胃痛片質量標準》WS-11084（ZD-1084）-2002-2012Z［2］僅對方中厚樸、碳酸氫鈉的含量進行測定，含量控制標準單一且未對方中君藥蒼術進行定量分析，不符合多組分、多靶點的現代中藥質量控制要求。蒼術為君藥，具有燥濕健脾、祛風散寒功效，主要活性成分蒼術素含量高低常用作評價蒼術的質量［3-4］。香附為臣藥，有調經止痛、理氣解郁功效，主要活性成分為α-香附酮［5］。本研究中建立了測定胃痛片中蒼術素、厚樸酚、厚樸酚和α-香附酮含量的氣相色譜法，可為其質量標準提升提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AB204-N型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司，精度為萬分之一）；BP 211D型電子分析天平（德國賽多利斯公司，精度為十萬分之一）；8890型氣相色譜儀（安捷倫公司）；KQ-250DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率為300 W，頻率為50 kHz）。

1.2 試藥

蒼術素對照品（批號為111924-201806，含量以99.5%計），α-香附酮對照品（批號為110748-202016，含量以99.4%計），厚樸酚對照品（批號為110729-202015，含量以99.0%計），和厚樸酚對照品（批號為110730-201915，含量以99.8%計），均購于中國食品藥品檢定研究院；胃痛片（廣東嘉應制藥股份有限公司，批號分別為20180202，20190501，20200302）；乙酸乙酯（廣州市番禺力強化工廠，批號為633379-05653）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：HP-5毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25μm），（5%）-二苯基（95%）-二甲基聚硅氧烷為固定相；程序升溫：初始溫度為50℃、保持4 min，以10℃/min的速率升至120℃、保持10 min，以10℃/min的速率升至220℃、保持10 min，以10℃的速率升至250℃、保持4 min；進樣口溫度：280℃；火焰離子化檢測器（FID）溫度：300℃；載氣：氮氣；流速：2.0 mL/min；進樣量：1 μL；分流比：1∶1。

2.2 溶液制備

取蒼術素對照品5.18 mg，α-香附酮對照品7.54 mg，分別置20 mL棕色容量瓶中，以乙酸乙酯溶解并定容；取厚樸酚對照品26.33 mg、和厚樸酚對照品25.81 mg，分別置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容，制成各對照品貯備液。分別取各對照品貯備液1 mL，置同一10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯稀釋并定容，即得混合對照品溶液。取樣品，避光條件下操作，研細，取細粉2.0 g，精密稱定，置棕色容量瓶中，精密加入乙酸乙酯15 mL，稱定質量，超聲處理1 h，放冷后再次稱定質量，以乙酸乙酯補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。根據處方工藝分別制備缺蒼術、香附、厚樸的陰性對照品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：取2.2項下供試品溶液、混合對照品溶液及陰性對照品溶液各適量，按2.1項下色譜條件分別進樣測定，記錄色譜圖。供試品溶液中蒼術素、α-香附酮、厚樸酚、和厚樸酚色譜與混合對照品溶液色譜保留時間一致，各色譜峰分離良好，且陰性對照無干擾。色譜圖見圖1。

線性關系考察：分別精密吸取2.2項下各對照品貯備液0.60，0.80，1.00，1.20，1.40，1.60 mL，置同一10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯稀釋并定容，按2.1項下色譜條件進樣測定，以峰面積（Y）為縱坐標、各成分的質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標進行線性回歸。結果見表1。

表1 線性關系考察結果（n=6）Tab.1 Results of the linear relation test（n=6）

精密度試驗：取2.2項下混合對照品溶液適量，按2.1項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄色譜圖。結果蒼術素、α-香附酮、厚樸酚、和厚樸酚峰面積的RSD分別為0.32%，0.35%，0.52%，0.65%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取樣品（批號為20180202）適量，共6份，依法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件分別進樣測定，記錄色譜圖。根據回歸方程計算得蒼術素、α-香附酮、厚樸酚、和厚樸酚的質量分數的RSD分別為1.08%，0.75%，0.81%，0.96%（n=6），表明方法重復性良好。

1.蒼術素2.α-香附酮3.厚樸酚4.和厚樸酚A.供試品溶液B.混合對照品溶液C-E.陰性對照品溶液（分別缺蒼術、香附、厚樸）圖1氣相色譜圖1.Atractylodin 2.α-Cyperone 3.Magnolol 4.HonokiolA.Test solution B.Mixed reference solution C-E.Negative reference solution（lacking Atractylodis Rhizoma，Cyperi Rhizoma and Magnoliae Officinalis Cortex，respectively）Fig.1 GC chromatograms

穩定性試驗：取樣品（批號為20180202）適量，按2.2項下方法制備供試品溶液，分別于0，2，4，8，24 h時按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果蒼術素、α-香附酮、厚樸酚、和厚樸酚峰面積的RSD分別為1.25%，1.09%，1.13%，1.06%（n=5），表明供試品溶液24 h內穩定性良好。

加樣回收試驗：取樣品（批號為20180202）1.0 g，共6份，精密稱定，分別精密加入2.2項下混合對照品溶液5.0 mL，制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，計算回收率。結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果（n=6）Tab.2 Results of the recovery test（n=6）

2.4 樣品含量測定

取樣品（批號分別為20180202，20190501，20200302）適量，依法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，根據回歸方程計算蒼術素、α-香附酮、厚樸酚、和厚樸酚的含量，結果見表3。可見，各批樣品中成分含量存在差異，特別是未作規定的蒼術素和α-香附酮差異較大。

表3 胃痛片中4種成分含量測定結果（mg/g，n=6）Tab.3 Results of content determination of four constituents in Weitong Tablets（mg/g，n=6）

3 討論

3.1 色譜條件選擇

本研究中考察多種程序升溫的氣相色譜分離條件［6-8］，預試驗中，最初程序升溫條件均設置進樣口溫度和檢測器溫度為300℃；程序升溫，以100℃保持7 min，再以20℃/min的速率升至250℃，保持10 min，分流比為20∶1。但在該條件下部分化學成分未能出峰，同時升溫速率過快導致主成分色譜峰過于集中，分離度差。更改條件后，進樣口溫度為280℃；檢測器溫度為300℃；程序升溫，初始溫度為50℃，保持4 min；以10℃/min的速率升至120℃，保持10 min；再以1.0℃/min的速率升至250℃，保持4 min；分流比為20∶1。但發現在該條件下色譜峰的響應值較低，調整分流比，1∶1時響應值在合理范圍內且各色譜峰峰形對稱，分離度符合要求，結果穩定，故選擇分流比為1∶1。

3.2 溶液制備操作

試驗初期，混合對照品溶液的部分色譜峰出峰時間和峰面積都不太穩定，特別是穩定性試驗中，放置時間越長，蒼術素和α-香附酮的色譜峰面積越小。查閱文獻［9-11］，發現α-香附酮、蒼術素均為熱不穩定物質，且對光敏感、易氧化，故在對照品配置及供試品提取過程中，α-香附酮、蒼術素對照品及樣品均需避光保存。本研究中，供試品提取時間較長，為避免有效成分的分解失效導致檢測數據的不準確，超聲處理過程保持室溫，也可用冰袋控制溫度。

3.3 提取條件選擇

在制備供試品溶液和混合對照品溶液時，曾考察提取方法（超聲提取、超聲后離心提取）、提取溶劑種類（甲醇、乙醇、乙酸乙酯）、料液比及提取時間，發現以甲醇、乙醇作提取溶劑時，蒼術素和α-香附酮的色譜峰分離度很小，且受進樣時間長的影響，其他色譜峰不穩定，推測甲醇、乙醇的揮發性較大，導致目標成分濃度出現波動，采用乙酸乙酯為溶劑后解決了上述問題［12-14］。曾選擇α-蒎烯作為高良姜的定量指標，但后續研究發現無高良姜的陰性對照品中出現了α-蒎烯的干擾峰，查證文獻后得知香附揮發油中提取分離的單萜化合物有α-蒎烯、β-蒎烯、桉葉素、檸檬烯、γ-聚散花素和α-紫羅蘭酮等［15］。

3.4 方法評價

本研究中建立的方法操作簡便易行，精密度、重復性和準確度均良好，可為胃痛片的多成分含量測定和質量控制提供參考。