子宮腺肌病治療前后miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p表達及臨床意義

李麗娟，侯延新，吳雪靜，孫宏偉，金鴻楠

(1.河北省承德市第三醫院婦瘤科，河北 承德 067000；2.河北省承德市婦幼保健院檢驗科，河北 承德 067000；3.河北省平泉市醫院婦產科，河北 平泉 067500)

子宮腺肌病好發于30～50歲女性，發病率10%～47%，且呈逐年升高趨勢[1]。子宮動脈栓塞術(uterine artery embolization，UAE)治療子宮腺肌病在短期內能取得一定療效，但中遠期效果未明，選取適宜療效評估工具是當前重點研究方向之一[2]。組織病理學檢查雖能有效鑒別子宮腺肌病，但其存在創傷性、療效評估有限等不足之處。最新研究表明，子宮腺肌病患者血循環及其他液體中存在豐富、穩定的miRNA，如miR-103a-3p、miR-101-3p，但其在子宮腺肌病療效評估中仍缺乏大量循證支持[3-4]。另有學者指出，子宮腺肌病發病關鍵因素是在位內膜向肌層侵襲、生成形成異位內膜，可溶性細胞間黏附分子(soluble intercellular adhesion molecule-1，sICAM-1)是維持細胞穩定重要因子，其表達異常可增強細胞黏附侵襲能力，加劇疾病進展，但具體機制未明[5]。本研究統計子宮腺肌病治療前后miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p表達，以期為調整治療方案提供有利依據。報告如下。

1 資 料 與 方 法

1.1一般資料 選取2019年7月—2021年7月承德市第三醫院子宮腺肌病患者125例作為研究組，納入標準：符合子宮腺肌病診斷標準[6]：表現為月經不調、痛經等癥狀，結合超聲檢查確診；年齡27～50歲；病程≥5個月；子宮體積60～100 cm3；排除標準：合并其他生殖系統疾病(盆腔炎、陰道炎、宮頸癌)；重要臟器器質性病變；采集相關資料時不配合；放置宮內節育器；近4周內接受性激素藥物治療。另選擇同期87例月經正常、無痛經的健康體檢者作為對照組，婦科檢查正常，無生殖系統疾病及全身性系統疾病。研究組：年齡30～50歲，平均(40.42±4.11)歲；體重50～65 kg，平均(57.11±2.24)kg；病理分級：Ⅰ級38例，Ⅱ級67例，Ⅲ級20例；痛經程度：輕度41例，中度60例，重度24例；對照組：年齡28～50歲，平均(39.56±5.68)歲；體重48～65 kg，平均(55.96±3.72)kg。2組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。

本研究經醫院倫理委員會審核批準通過。所有患者及其家屬均知情同意且簽署知情同意書。

1.2方法 ①分別于治療前、治療6個月后清晨，采集2 mL空腹外周肘靜脈血，以3 000 r/min速度離心10 min，取上清液，采用Trizols試劑盒(美國Sigma公司)提取血清總RNA，經逆轉錄為cDNA模板，采用實時熒光定量PCR儀(美國BioRad公司)及試劑盒擴增血清中miR-103a-3p、miR-101-3p，程序設置為95 ℃預變性90 s，95 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸20 s，共40個循環，以2-△△CT法進行半定量分析，計算miR-103a-3p、miR-101-3p表達；取石蠟標本，采用免疫組織化學法測定可溶性細胞間黏附分子1(soluble intercellular adhesion molecule-1，sICAM-1)水平，應用HMIAS-200行全自動醫學彩色圖像分析系統對免疫組織化學標本進行圖像分析，顯微鏡下測量平均吸光度值。②應用視覺模擬評分法(visual analogue scale，VAS)[7]評估痛經程度，0～3分為輕度，4～6分為中度，7～10分為重度。③研究組均接受UAE，平臥位，局部麻醉，采用Seldinger技術行一側股動脈置管，5.0 F Cobra導管完成雙側子宮動脈，結合患者實際選取適宜非球形聚乙烯醇(直徑300～500、500～700、700～900 μm)，X線透視下行子宮動脈栓塞，栓塞結束后行數字減影血管造影檢查，以子宮動脈血流中斷為宜。治療6個月后評估治療效果[8]，分為完全緩解(痛經完全消失，子宮體積較治療前縮小≥50%，月經規律，月經量正常)、明顯緩解(疼痛評級降低2個級別以上，子宮體積較治療前縮小30%～49%，月經周期及月經量明顯改善)、部分緩解(疼痛評級降低2個級別以內)和無效(痛經、子宮體積及月經周期均無明顯變化，甚至出現盆腔不適)4個等級。完全緩解和部分緩解定義為臨床有效，部分緩解和無效確定為臨床無效。

1.3觀察指標 ①2組治療前、治療6個月后miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p水平。②研究組不同痛經強度患者治療前、治療6個月后miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p水平。③研究組不同療效患者治療前、治療6個月后miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p水平。④miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p差值與痛經強度、效果相關性。⑤miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p差值預測子宮腺肌病療效價值。

1.4統計學方法 應用SPSS22.0統計軟件分析數據。計量資料比較采用獨立樣本t檢驗、配對t檢驗和SNK-q檢驗，相關性研究采用Spearman分析，繪制受試者工作曲線(receiver operating characteristic，ROC)及曲線下面積(area under the ROC curve，AUC)分析各指標對子宮腺肌病療效預測價值。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.12組治療前后各指標表達 治療前研究組miR-103a-3p、miR-101-3p水平高于對照組，sICAM-1水平低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。治療后，研究組miR-103a-3p、miR-101-3p水平低于治療前，sICAM-1水平高于治療前，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組治療前后各指標表達

2.2研究組不同痛經強度患者各指標表達 治療前、治療6個月后研究組重度患者miR-103a-3p、miR-101-3p水平高于輕度、中度患者，sICAM-1水平低于輕度、中度患者，且中度患者miR-103a-3p、miR-101-3p水平高于輕度，sICAM-1水平低于輕度，差異有統計學意義(P<0.05)。治療后，2組miR-103a-3p、miR-101-3p水平低于治療前，sICAM-1水平高于治療前，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 研究組不同痛經強度治療前后各指標表達

2.3研究組不同效果患者各指標表達 治療前、治療6個月后研究組有效患者miR-103a-3p、miR-101-3p水平低于無效患者，sICAM-1水平高于無效患者，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 研究組不同效果患者各指標表達比較

2.4各指標與痛經強度、效果相關性分析 miR-103a-3p、miR-101-3p與痛經強度呈正相關，與效果呈負相關(P<0.05)；sICAM-1與痛經強度呈負相關，與效果呈正相關(P<0.05)。見表4。

表4 各指標與痛經強度、效果相關性分析

2.5各指標對子宮腺肌病療效預測價值 ROC曲線顯示，miR-103a-3p差值預測子宮腺肌病療效的AUC為0.800(95%CI：0.719～0.866)，最佳截斷值>0.43，敏感度為64.00%，特異度為81.00%；sICAM-1差值預測子宮腺肌病療效的AUC為0.827(95%CI：0.749～0.889)，最佳截斷值≤0.21，敏感度為96.00%，特異度為63.00%；miR-101-3p差值預測子宮腺肌病療效的AUC為0.772(95%CI：0.689～0.843)，最佳截斷值>580.75，敏感度為64.00%，特異度為91.00%。見圖1。

圖1 各指標對子宮腺肌病療效預測價值

2.6各指標聯合預測子宮腺肌病療效價值 根據2.5結果選取敏感度及特異度最佳指標進行聯合，其中敏感度最佳為sICAM-1，特異度最佳為miR-101-3p，2者差值聯合預測子宮腺肌病療效的AUC為0.909(95%CI：0.844～0.953)，敏感度為84.00%，特異度為81.00%。見圖2。

圖2 各指標聯合預測子宮腺肌病療效價值

3 討 論

子宮腺肌病多表現為痛經，月經過多及不孕等，嚴重影響患者生活質量，盡早診治是控制子宮腺肌病進展重要手段[9]。CT、超聲是鑒別子宮腺肌病重要手段，但隨其臨床應用逐漸增多，誤診及漏診風險顯著增加。因此，探索敏感度及特異度強的子宮腺肌標志物尤為迫切。

miRNAs是一類小分子非編碼單鏈RNA大分子，具有高度穩定性、組織特異性等特點，在疾病篩查及初步診斷中具有廣泛應用前景，但有關miRNAs與子宮腺肌病相關研究報道較少[10]。miR-103a-3p是miRNA家族成員之一，在子宮內膜癌、卵巢癌等生殖系統疾病中均呈高表達，可促進癌細胞增殖、遷移[11]。陳新元等[12]研究顯示，子宮腺肌病患者血清miR-103a-3p表達顯著高于健康者，且其表達與痛經程度呈正相關，推測原因與其調控多種核質腺嘌呤核苷三磷酸結合的生物學過程有關，可促進子宮腺肌病發展，加重痛經程度。miR-101-3p是miRNA101家族成員，甘霖[13]研究顯示，子宮腺肌病患者血清miR-101-3p有顯著差異性表達，且其表達隨著月經量增多、痛經加重而升高，可作為生物標志物單獨用于子宮腺肌病早期篩查。本研究顯示，研究組miR-101-3p、miR-103a-3p表達均高于對照組，且與痛經程度呈正相關，與上述研究結論相似，說明miR-101-3p、miR-103a-3p在子宮腺肌病病情評估中具有重要作用。本研究結果顯示，治療前、治療6個月后研究組有效患者miR-103a-3p、miR-101-3p水平低于無效患者，且差值小于無效患者。痛經是子宮腺肌病常見主訴，痛經緩解情況是評價子宮腺肌病療效重要指標[14]，故本研究中療效評估以痛經緩解情況為主。UAE可切斷子宮血流，減少病灶組織血供，縮小病灶組織，緩解痛經程度，下調血清miRNAs表達[15]。ROC曲線顯示，miR-103a-3p、miR-101-3p預測子宮腺肌病UAE療效的AUC為0.800、0.772，提示血清miR-103a-3p、miR-101-3p對于評估子宮腺肌病患者UAE治療效果具有一定臨床價值，可將其作為本病治療靶點之一。

ICAM-1是一種跨膜免疫球蛋白，主要分布于子宮內膜腺上皮和間質細胞、白細胞、血管內皮細胞，其機制為調節細胞間、細胞和基質間黏膜作用；參與細胞信號轉導、腫瘤轉移浸潤、血管生長、免疫炎性反應等生理病理過程[16-18]。一般情況下，ICAM-1多以sICAM-1形式存在體液中，現有資料顯示，ICAM-1在正常內膜中呈高表達，其次是子宮腺肌病、子宮異位癥，符合本研究結論[19]。這可能與子宮腺肌病在位內膜細胞間黏膜作用下降，基底膜細胞間隙增大，物理屏障功能減弱有關，導致內膜突破基底膜向肌層浸潤、轉移。sICAM-1表達隨著痛經程度增加而降低，可見其水平持續降低提示病情程度嚴重。本研究還顯示，治療前、治療6個月后有效患者sICAM-1水平高于無效患者，且單純預測子宮腺肌病UAE療效的AUC為0.827，佐證sICAM-1可作為評價子宮腺肌病UAE療效重要工具之一。

從圖1結果來看，miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p單純預測子宮腺肌病UAE療效價值仍存在提升空間，加以子宮腺肌病發病機制復雜，三者參與子宮腺肌病不同發病機制，納入敏感度和特異度最佳的2個指標聯合預測更為全面、準確。研究顯示，聯合預測子宮腺肌病UAE療效的AUC為0.909，敏感度及特異度分別為84.00%、81.00%，提示聯合預測子宮腺肌病UAE療效價值高，可為后續治療方案調整及預后評價提供科學依據。

綜上所述，子宮腺肌病患者miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p呈異常表達，其表達與痛經強度、UAE治療效果有關，聯合檢測有助于提高療效預測價值，促進預后改善。但本研究仍存在不足之處，即樣本來源單一，樣本量過少，且未考慮病變范圍對子宮腺疾病患者各指標影響，日后仍需多中心、多渠道選取樣本，擴大樣本量，增設病變范圍這一概念進行研究證實。