BCCIP蛋白在胃癌組織中的表達及其臨床意義

崔 倪,王延楠,單悅展,周遠航，倪勁松,馮 野*，房學東*

(1.吉林大學中日聯誼醫院 胃腸外科，吉林 長春130033；2.吉林大學第一醫院二部 病理科，吉林 長春130031)

BCCIP(BRCA2 And CDKN1A Interacting Protein)是一種進化保守蛋白，參與維持基因組穩定性和細胞周期進程，以具有不同C末端結構域的BCCIPβ及BCCIPα兩種類型存在于人類中。BCCIP基因表達是腫瘤抑制中重要的BRCA2輔助因子，其作為腫瘤抑制因子在多種腫瘤中起作用。已有研究證實，BCCIP基因在卵巢癌、腎細胞癌及結直腸癌等組織中表達降低，研究也表明，BCCIP的低表達狀態成為肝細胞癌患者生存率低的獨立預后因素[1-2]。然而其他研究發現，BCCIPβ在食管鱗狀細胞癌中高表達，并與腫瘤分級，腫瘤細胞增殖和侵襲顯著相關，可能作為一種致癌基因促進了食管癌的進展，導致其不良預后[3]。 目前BCCIP基因在腫瘤中表達的研究結果不盡相同，且有關BCCIP在胃癌中表達的研究甚少。我們的研究旨在分析BCCIP在胃癌中的表達及其與臨床相關指標之間的相關性，進而探討BCCIP表達對胃癌預后的意義。

1 材料與方法

1.1 標本來源

本研究隨機選取2017年1月至2018年10月間吉林大學第一醫院二部病理科原發性胃腺癌110例石蠟標本，并選取同一個患者癌旁正常胃粘膜組織作對照。其中男性患者87例，女性患者23例，患者平均年齡61.71歲，所選病例患者術前均無放化療，標本切片經2名病理醫生復閱。

1.2 實驗方法

免疫組化染色(IHC)采用S-P免疫組織化學染色方法，使用全自動免疫組化儀(Thermo Fisher)進行染色，分析110例胃癌組織和正常胃粘膜組織中BCCIP、Ki67和突變型P53的表達：

將所選病例石蠟標本切成2 μm切片，置于烘干箱70度烤片1 h；二甲苯溶液中浸泡20 min脫蠟到乙醇浸泡15 min，用純水沖洗酒精；將切片放入含EDTA緩沖液的高壓鍋中加熱修復2.5 min，用涼水冷卻后轉移到PBS緩沖液中浸泡20 min；滴加80 μl過氧化氫液封閉10 min；滴加一抗試劑孵育1 h，PBS緩沖液清洗；滴加二抗試劑，孵育30 min；用DAB顯色液顯色5 min；蘇木素中染色復染2.5 min，后經分化、反藍、脫水和透明及封片；將染色組織切片放于光學顯微鏡(Olympus)下觀察、記錄、采集圖像。

1.3 結果判定

BCCIP表達主要定位于細胞核，以棕黃色顆粒沉著判為陽性。評分采用雙評半定量法：A:陽性細胞百分率<10%：0分，11-25%：1分，26-50%：3分，>50%：4分；B：依據組織染色程度進行評分：不著色：0分，淺黃色：1分，棕黃色：3分。再計算著色范圍與染色程度的和，兩項相加后，所得分數<3，判為陰性(-)；2-3，判為弱陽性(+)；4-5，判為中等陽性(++)；≥6，判為強陽性(+++)。

P53和Ki-67的判讀方法：每張組織片隨機選取10個高倍鏡視野，計數陽性細胞的百分率，陽性細胞≤10%，判為陰性；陽性細胞>10%，判為陽性。

1.4 統計學分析

采用SPSS軟件分析系統，采用配對秩和檢驗分析BCCIP在胃癌組織及正常胃粘膜組織中的表達差異；秩和檢驗分析胃癌中BCCIP的表達與各項臨床指標(腫瘤分化程度、淋巴結轉移、腫瘤分期)之間的關系；Spearman相關分析法分析胃癌中BCCIP的表達與各項臨床指標(患者性別、年齡、腫瘤分化程度、淋巴結轉移、腫瘤分期)及Ki67和P53的相關性。

2 結果

2.1 BCCIP在胃癌組織中的表達

BCCIP在正常胃粘膜組織及胃癌組織中的表達主要表達于細胞核(圖1)。在110例胃癌組織中有104例BCCIP陽性表達，陽性表達率為94.55%，其中26例強陽性表達，38例中等陽性表達，40例弱陽性表達，6例陰性表達；110例正常胃粘膜組織中BCCIP的陽性表達率為100%，BCCIP強陽性表達69例，中等陽性表達33例，弱陽性表達8例，陰性表達0例。110例標本中有68例(61.82%)BCCIP在胃癌中的表達強度低于其相配對的正常胃組織，且BCCIP在胃癌和正常組織中表達的差異具有統計學意義(P<0.01，見表1)。

圖1 BCCIP在胃癌和正常胃粘膜組織中的表達(200×)

表1 胃癌組織及正常胃粘膜組織中BCCIP的表達

2.2 BCCIP與腫瘤分化程度的關系

免疫組化結果顯示，BCCIP在不同分化程度胃癌中的表達程度的差異顯著，(P<0.01見圖2，表2)。16例高分化胃癌中，10例BCCIP強性陽性表達，4例中等陽性表達，2例弱陽性表達，0例陰性表達；56例中分化胃癌中，10例BCCIP強陽性表達，21例中等陽性表達，24例弱陽性表達，1例陰性表達；38例低分化胃癌中，6例BCCIP強陽性表達，13例中等陽性表達，14例弱陽性表達，5例陰性表達。

圖2 BCCIP在胃癌組織中的表達(200×)

表2 BCCIP的表達與胃癌分化程度的關系

2.3 BCCIP與腫瘤分期的關系

10例T1分期中7例BCCIP強陽性表達，1例中等陽性表達，2例弱陽性表達，0例陰性表達；15例T2分期中2例BCCIP強陽性表達，10例中等陽性表達，3例弱陽性表達，0例陰性表達；76例T3分期中14例BCCIP強陽性表達，25例中等陽性表達，33例弱陽性表達，4例陰性表達；9例T4分期中3例BCCIP強陽性表達，2例中等陽性表達，2例弱陽性表達，2例陰性表達。胃癌中BCCIP的表達在不同腫瘤分期中表達差異顯著(P<0.05，見表3)。

2.4 BCCIP與淋巴結轉移的關系

78例有淋巴結轉移標本中12例強陽性表達，26例中等陽性表達，34例弱陽性表達，6例陰性表達；32例無淋巴結轉移標本中，14例強陽性表達，12例中等陽性表達，6例弱陽性表達，0例陰性表達。胃癌中BCCIP在有淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組的表達差異顯著(P<0.01，見表4)。

表3 BCCIP的表達與胃癌腫瘤分期的關系

表4 胃癌中BCCIP的表達與淋巴結轉移的關系

2.5 P53、Ki67在胃癌組織中的表達

P53和Ki67在胃癌組織中陽性表達于細胞核(見圖3)。P53在110例胃癌標本中有55例陽性表達，55例陰性表達，陽性率50%；P53在110例正常胃粘膜組織中有1例陽性表達，99例陰性表達，陽性率0.91%，P53在正常組的表達高于胃癌組，統計分析結果顯示P53在胃癌組與正常組表達的差異顯著，具有統計學意義(P<0.01，見表5)。P53在胃癌中的表達與患者年齡、性別、腫瘤分期無關，與淋巴結轉移正相關(r=0.413，P<0.01)；與分化程度負相關(r=-0.290，P<0.01，見表6)。Ki67在110例胃癌中有106例陽性表達，4例陰性表達，陽性率96.36%；在110例正常胃粘膜組織中有45例陽性表達，65例陰性表達，陽性率40.9%。與正常胃粘膜組織相比，Ki67在胃癌中表達明顯升高(P<0.01，見表5)；110例胃癌中Ki67的表達與患者年齡、性別及腫瘤分期無關，與淋巴結轉移正相關(r=0.372，P<0.01)；與分化程度負相關(-0.224，P<0.05，見表6)。

圖3 Ki-67、P53在胃癌組織中的表達(200×)

表5 胃癌及正常組織中P53及Ki67的表達

2.6 BCCIP與P53、Ki67及臨床指標的相關性分析

采用Spearman相關分析顯示胃癌中BCCIP的表達與胃癌患者性別、年齡無關；與腫瘤分期、淋巴結轉移、Ki67、P53的表達負相關(r=-0.226，-0.355，-0.198，-0.311，P<0.05)；與腫瘤分化程度正相關(r=0.292，P<0.01；見表6)。

表6 胃癌組織中BCCIP與P53、Ki-67及臨床指標的相關性分析

3 討論

胃癌是全球癌癥相關死亡率的主要原因，預后不良，晚期胃癌的中位總生存期≤12個月。導致胃癌發展的因素包括環境、遺傳及其他誘發因素，并且幽門螺桿菌的感染是主要因素之一。開展對于正常細胞穩態至關重要的信號傳導途徑的研究有助于開發靶向治療的新型藥物。遺傳學研究揭示相關基因的表達改變可能在促進胃癌發生的易感性方面發揮了重要作用[4]。哺乳動物的BCCIP基因最初被鑒定為BRCA2相互作用蛋白，BCCIP在DNA修復，DNA復制應激抑制，細胞周期調控，有絲分裂和核糖體生物發生中具有關鍵作用[5]。多項研究報道BCCIP是腫瘤抑制基因，在多種腫瘤中表達下調，包括膠質母細胞瘤、腎細胞癌、卵巢癌、乳腺癌等，其表達減低與腫瘤發生及進展相關。然而也有研究報道稱BCCIP在食管鱗狀細胞癌中表達增加，可能是患者預后不良的標志物。有關BCCIP在胃癌中的表達情況的研究尚未見報道。為了探索BCCIP與胃癌的關系，我們通過免疫組織化學染色方法，分析了BCCIP在胃癌中表達的情況。結果顯示BCCIP在胃癌中的表達強度明顯低于與之同源的正常胃粘膜組織，兩組間BCCIP表達差異顯著。

為了探究BCCIP在胃癌中表達的潛在作用，我們進一步分析了胃癌中BCCIP的表達與臨床指標之間的相關性，發現胃癌中BCCIP的表達與患者性別、年齡無關；與腫瘤分期、淋巴結轉移及Ki67、突變型P53的表達負相關；與腫瘤分化程度正相關。本研究結果與lin Z等人在肝細胞癌中的研究結果相似，BCCIP在肝細胞癌(HCC)中表達下調，其表達水平與HCC多種臨床病理因素呈負相關，包括腫瘤分級，腫瘤分期和Ki67的表達[4]。這提示BCCIP可能成為胃癌預后良好的指標之一。

Ki-67是癌癥的重要預后標志物，其增殖指數超過10%-14%表示高危預后類別[6]。為此我們分析了Ki67在胃癌中的表達，并分析其與BCCIP在胃癌中的相關性。我們的研究顯示，胃癌中Ki67的表達與患者年齡、性別及腫瘤分期無關，與淋巴結轉移正相關；與腫瘤分化程度及BCCIP的表達負相關。這一研究結果與Liu G等人研究相似，即Ki67在胃癌中表達上調，并與淋巴結轉移、腫瘤大小、TNM分期及患者預后不良有關[7]。并且在我們的研究中還發現胃癌中BCCIP的表達與Ki67呈負相關，然而，這與Chen L等人在食管鱗癌(ESCC)中的研究結果相反，他們發現BCCIP在食管鱗狀細胞中表達升高，并與Ki67呈正相關，同時與腫瘤分級、腫瘤侵襲性顯著相關，表明了BCCIP也是一種致癌基因，并與ESCC不良預后有關[3]。

綜上所述，本研究結果表明BCCIP與胃癌的臨床指標之間具有一定的相關性，有望成為一種為臨床判斷胃癌預后的新型標記物，但目前仍需更多的前瞻性臨床實驗研究來驗證BCCIP的表達異常對評估胃癌預后的意義。