CCT3在子宮頸病變組織中的表達與臨床病理特征關系及診斷價值

李曼，呂麗麗，萇雨環，侯巖巖，王夢格，葉國柳

蚌埠醫學院第一附屬醫院婦產科，安徽蚌埠 233000

子宮頸病變是指在子宮頸部位發生的各種良惡性病變，主要包括子宮頸癌和子宮頸上皮內瘤變（CIN）［1］。子宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，其發生發展是一個慢性持續過程，由HPV 感染形成CIN，進一步發展為浸潤癌［2］。CIN 與子宮頸癌密切相關，低級別上皮內瘤變（LSIL）大部分可消退，高級別上皮內瘤變（HSIL）被公認為是癌前病變。因此，對子宮頸病變的篩查和阻斷至關重要［3］。含TCP1的伴侶蛋白亞基3（CCT3）屬于伴侶蛋白家族成員，主要參與蛋白質的折疊和空間結構的形成［4］。研究顯示，CCT3 在許多腫瘤組織中表達升高，如肺腺癌［5］、頭頸部鱗癌［6］、肝癌［7］、乳腺癌［8］等，與腫瘤發生發展及不良預后相關。本研究擬通過分析CCT3 在子宮頸病變中的表達，并探討其對CIN 和子宮頸癌的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取蚌埠醫學院第一附屬醫院病理科2017—2020 年存檔的子宮頸蠟塊組織，包括正常子宮頸組織50 例、CIN 組織90 例（其中LSIL 40例，HSIL 50 例）、子宮頸癌組織90 例。入組標準：CIN 或子宮頸癌經病理檢查確診；術前HPV 分型或定量篩查。排除標準：合并其他腫瘤或重大疾病；術前已行放化療或藥物治療；臨床資料或隨訪缺失。本研究經蚌埠醫學院第一附屬醫院倫理委員會審批（批號2021KY039），并獲得患者知情同意。

1.2 CCT3檢測方法 將正常子宮頸、CIN和子宮頸癌組織用石蠟包埋，切4～5 μm厚切片，經過烘干、脫蠟和水化，在檸檬酸鈉緩沖液中抗原修復15 min；過氧化氫孵育10 min后洗滌3次；加入封閉液繼續孵育5 min阻斷非特異性結合。加入CCT3抗體（1∶200），4 ℃孵育過夜，洗滌3次后與二抗孵育結合。再次洗滌，DAB顯色，蘇木素復染，常規脫水，透明，封片，閱片。顯微鏡下隨機選取5個視野，按照染色強度和細胞陽性率進行評分。染色強度評分：淡黃色為1分，黃色為2分，棕色為3分；細胞陽性率評分：1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%～100%為4分。將兩項得分相乘，＜4分為CCT3陰性，≥4分為CCT3陽性。

1.3 統計學方法 采用R3.6.3 軟件和SPSS22.0軟件進行數據處理，Graphpad Prism 8 軟件繪圖。計量資料多組間比較采用方差分析；計數資料以頻數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。ROC 曲線分析CCT3在不同子宮頸病變中的診斷價值，通過聯合診斷實驗進行檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CCT3在不同子宮頸病變組織中的表達比較 免疫組化結果顯示，CCT3 主要定位于胞質，呈棕褐色，在正常子宮頸、CIN 和子宮頸癌組織中的染色程度依次增強。CCT3 在正常子宮頸、CIN、子宮頸癌組織中的陽性表達率分別為34.00%、58.89%、80.00%，CIN 和子宮頸癌組織高于正常子宮頸組織，子宮頸癌組織高于CIN組織（P均＜0.01）。

2.2 CCT3 與子宮頸病變臨床特征的相關性 在CIN 患者中，CCT3 表達與HPV 高 危 型感染（P＜0.001）和分級（P=0.017）有關，見表1；在子宮頸癌患者中，CCT3表達與HPV高危型感染（P=0.013）、分級（P=0.026）和淋巴結陽性（P=0.025）有關，見表2。

表1 CIN組織中CCT3表達與患者臨床病理特征的關系

表2 子宮頸癌組織中CCT3表達與患者臨床病理特征的 關系

2.3 CCT3 對子宮頸病變的診斷效能 CCT3 對CIN 診斷預測的ROC 曲線下面積（AUC）為0.702，P＜0.001，靈敏度為58.89%，特異度為66.00%；CCT3對子宮頸癌診斷預測的AUC 為0.802，P＜0.001，靈敏度為66.00%，特異度為80.00%。

2.4 CCT3 聯合HPV 高危型感染對子宮頸癌的預測價值 將90 例CIN 和90 例子宮頸癌資料合并，CCT3 聯合HPV 高危型感染對子宮頸癌的預測價值見表3、4。CCT3 聯合HPV 高危型感染檢測能顯著提高對子宮頸癌預測的敏感度（92.22%）和特異度（58.89%）。

表3 子宮頸病變中CCT3表達和HPV高危型感染的情況（例）

表4 CCT3聯合HPV高危型感染對子宮頸癌的預測價值（%）

3 討論

子宮頸病變的進展是一個循序漸進的過程，CIN 是子宮頸癌發生發展的關鍵階段，HPV 持續感染是關鍵因素［9］。目前對子宮頸病變的篩查通常采用“三階梯”：即HPV 和子宮頸液基細胞學檢測、陰道鏡檢查和子宮頸活檢。HPV 篩查大大提高了CIN和子宮頸癌的檢出率，但是它無法區分一過性感染和慢性感染，持續性感染更可能最終發展為子宮頸癌；陰道鏡檢查的結果通常以子宮頸活檢為準，作為三階梯中最關鍵的一步，子宮頸活檢取決于病理科醫生的主觀判斷，不同醫生可能會給出不同的組織學結論［10］。所以，仍需找到其他方式適當介入來提高對子宮頸病變篩查的準確率，生物標志物就是一種趨勢。

CCT3作為一種伴侶蛋白，以肌動蛋白和微管蛋白為底物，以ATP 依賴的方式促進真核細胞中約10%的蛋白質空間結構正確折疊和功能穩定發揮［11-12］。當CCT3 的ATP 結合位點發生突變時，可導致胞質內未翻譯的mRNA 積聚和降解，使蛋白質水平和定位發生變化［13］。當CCT3 數量或質量發生變化時，對蛋白質結構和功能的調節保護作用將會消失，并可促進體細胞的快速進化，甚至形成惡性轉化，導致腫瘤發生［14］。CCT3參與腫瘤發病的研究近幾年被廣為報道，HOU 等［15］發現在CCT3 肝細胞癌中表達上調，可以通過影響細胞周期和DNA 復制參與肝細胞癌的發生發展，LIU 等［16］認為CCT3 可以作為肝癌的潛在生物標志物，在診斷能力上甚至優于甲胎蛋白。CCT3 還可以作為miR233 的靶點，影響乳腺癌的臨床分期和不良預后。關于CCT3 在子宮頸癌中的研究也有報道，DOU 等［17］發現CCT3 與子宮頸腺癌的進展有關，抑制CCT3 可以通過抑制纖維連接蛋白1（FN1）從而促進子宮頸腺癌細胞的凋亡和周期阻滯，CCT3可以作為子宮頸癌一種新的有前景的生物標志物。

本研究發現CCT3 的表達隨著子宮頸病變的嚴重程度而呈逐漸上調，CCT3 在CIN 中表達較正常子宮頸組織升高，在子宮頸癌中表達量繼續升高。更進一步研究發現，CCT3的表達與子宮頸病變患者的HPV 高危型感染有關。這或許是CCT3 參與了HPV與癌基因和抑癌基因相互作用的過程，當然，這需要更多的研究去挖掘其中的機制。值得一提的是，我們分析CCT3 在HSIL 中表達較LSIL 中增高顯著，在LSIL 和正常子宮頸中表達無明顯差異，這和我們臨床的干預治療是一致的。此外，CCT3的表達可以將CIN 和子宮頸癌與正常子宮頸區分開來，這表明了CCT3對子宮頸病變具有較好的診斷價值。將CCT3的表達與HPV 高危型感染聯合，能顯著提高對子宮頸病變患者進展為子宮頸癌的預測能力。

綜上所述，CCT3 在CIN 和子宮頸癌中表達上調，具有較好的診斷潛力，有可能為子宮頸癌的早期篩查提供一些參考。