幾種營養源的附加對圓口銅魚(Coreius guichenoti)親魚生長與性腺發育的影響

吳興兵，楊德國，楊少榮，朱永久，胡文靜，朱挺兵，李學梅，孟子豪，何勇鳳

(1.中國水產科學研究院長江水產研究所，農業農村部淡水生物多樣性保護重點實驗室，武漢 430223；2.中國三峽建工(集團)有限公司，成都 610041)

圓口銅魚(Coreiusguichenoti)屬鯉形目(Cypriniformes)鯉科(Cyprinidae)鮈亞科(Gobioninae)銅魚屬(Coreius)，俗稱水密子、圓口等，是長江上游特有魚類[1-2]。圓口銅魚曾是長江上游江段主要優勢種和重要經濟魚類，因受水電工程建設、過度捕撈等影響，野生資源急劇衰減，2016年被《中國脊椎動物紅色名錄》列為極危物種，2021年被《國家重點保護野生動物名錄》列為二級保護動物(僅限野外種群)[3-5]。實現圓口銅魚規模化人工繁育，進行人工增殖放流成為保護和恢復其種群資源的必然選擇之一。

2010年以來，多家單位開展了圓口銅魚人工繁殖技術研究，直至2013年才開始獲得突破性進展[6-7]。圓口銅魚人工繁殖主要技術難點是應激反應、親魚性腺發育和病蟲害。親魚的營養狀況對雌魚產卵量、卵子質量有較大影響，進而影響到受精率和孵化率等，對親魚進行營養強化有助于提高其繁殖性能[8-9]。較高的飼料蛋白水平有利于卵黃蛋白原合成，促進魚類性腺發育[10]。常規高蛋白配合飼料的營養物質通常是為了滿足魚類生長需要，但難以完全滿足性腺正常發育需要[11]。因此，在投喂較高蛋白含量配合飼料的同時，針對性添加其他的營養物質或者輔以天然餌料是親魚培育的常用手段。

圓口銅魚是以肉食性為主的雜食性魚類，其食物種類中淡水殼菜等動物餌料占較大比例[15]。在日糧中添加脂肪酸、維生素E、卵磷脂和動物餌料可提高水產動物繁殖性能[11-14]。因此，為突破圓口銅魚人工養殖條件下性腺發育難關，本研究以高蛋白配合飼料作為基礎日糧，通過向基礎日糧中添加魚油、維生素E、卵磷脂及附加投喂動物餌料等方式，進行圓口銅魚親魚培育實驗，研究了飼料中不同營養源對圓口銅魚親魚生長發育的影響，以期為圓口銅魚規模化人工繁育和親魚飼料配制提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗魚和實驗條件

實驗用圓口銅魚收集自長江瀘州江段，人工馴養3年以上，年齡≥5齡，均為成熟個體，規格整齊、無病無傷。

實驗在室內循環水養殖系統中進行。循環水養殖系統水體總體積60 m3，養殖桶16個，單個養殖桶直徑1.98 m、水深70～75 cm、進水口流量3.0～3.2 m3/h。

實驗期間水溫8～23 ℃、pH 7.43～8.73、溶氧9.15～12.97 mg/L、氨氮0.03～0.16 mg/L、亞硝酸鹽氮0.003～0.026 mg/L。

1.2 實驗飼料及添加物

實驗基礎日糧為商品膨化飼料，粗蛋白42%、粗脂肪5.2%、灰分16.4%、水分12.1%。魚油為商品飼用魚油，EPA+DHA含量≥20%。卵磷脂為商品改性大豆磷脂(有效物質含量95%)。黃粉蟲(Tenebriomolitor)為鮮活個體。螺肉為新鮮去殼中華圓田螺肉，冷凍保存時間不超過5 d。

魚油、卵磷脂、維生素E(VE)采用噴灑法拌于基礎日糧中，干燥后投喂[16]。魚油、卵磷脂、維生素E添加量以基礎日糧日投喂量為基準進行計算(質量比)。黃粉蟲、螺肉在投喂基礎日糧時投喂，投喂量為基礎日糧日投喂量(質量)的25%。

基礎日糧、拌有卵磷脂等物質的飼料每天采用表觀飽食法投喂2次(8:30-9:30，21:00-22:00)，日投喂量根據魚體重計算，每次投喂量為日投喂量的1/2，并根據攝食情況和水溫變化及時調整，以實驗魚飽食且無剩餌為準。黃粉蟲、螺肉每天8:30投喂。

1.3 實驗設計

實驗分A、B、C三組進行。A組添加魚油、卵磷脂、黃粉蟲，設置4個實驗組(A1、A2、A3、A4)和1個對照組(A0)，實驗時間為2015年7月31日-2016年5月24日。B組添加維生素E，設置2個實驗組(B1、B2)和1個對照(B0)，實驗時間為2015年7月31日-2016年5月24日。C組添加卵磷脂、維生素E和螺肉，設置2個實驗組(C1、C2)和1個對照(C0)，實驗時間為2016年9月28日-2017年5月23日。具體設置詳見表1。

表1 實驗分組情況Tab.1 The experimental grouping

1.4 親魚成熟度判斷標準

雄魚成熟度采用精子活力觀察法判斷。取精子于顯微鏡下觀察精子活力，當精子快速運動時間≥10 s時認定為成熟精子，其個體為成熟雄魚。

雌魚成熟度采用親魚外部特征和挖卵相結合的方法判斷。腹部膨大，卵巢輪廓明顯，生殖孔變紅；卵粒大小整齊、飽滿，經魚卵透明液處理后，全部或大部分卵核出現偏位的認定為成熟卵，其個體為成熟雌魚。

1.5 數據分析

實驗結束后，測定實驗魚體長、體重，統計各組實驗魚數量、成熟雌魚數量、成熟雄魚數量，計算肥滿度(CF)、特定生長率(SCR)、成熟率(MR)、成活率(SR)。相關計算公式如下：

肥滿度(CF)=W/L3×100

特定生長率(SCR)=(lnW1-lnW0)/D×100%

成熟率(MR)=N1/N2×100%

成活率(SR)=N3/N0×100%

式中：W、L分別為實驗魚體重(g)和體長(cm)；W0、W1分別為實驗魚起始、結束時的體重(g)；D為實驗時間(d)；N1、N2分別為實驗結束時成熟雌(雄)魚的數量(尾)和成活雌(雄)魚的數量(尾)。N3為實驗魚終末數量(尾)，N0為實驗魚初始數量(尾)。

實驗數據采用SPSS 20.0和Microsoft Excel 2010進行統計處理，采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)檢驗各組之間的差異顯著性。實驗數據為平均值±標準差，顯著性水平定義為0.05。

2 結果

2.1 添加魚油、卵磷脂和黃粉蟲對圓口銅魚親魚生長與性腺發育的影響

經過300 d養殖，各組實驗魚成活率為100%。從生長指標看，卵磷脂組和組合組特定生長率最低，魚油組最高。卵磷脂組肥滿度最低，黃粉蟲組最高，魚油組和對照組次之(表1)。各組雄魚成熟率為100%，組合組(基礎日糧+5%魚油+2%卵磷脂+黃粉蟲)和卵磷脂組雌魚成熟率高于對照組(表2)。

表2 添加魚油、卵磷脂和黃粉蟲對圓口銅魚親魚生長與成熟率的影響Tab.2 Growth，survival rate and gonadal development of C.guichenoti fed diets adding fish oil，lecithin or T.molitor(L.)

2.2 添加維生素E對圓口銅魚親魚生長與性腺發育的影響

經過300 d養殖，各組實驗魚成活率均在90%以上。添加0.1%維生素E組、添加0.2%維生素E組和基礎日糧組實驗魚末體質量、肥滿度均無較大的差異。各實驗組特定生長率隨著維生素E添加量呈現升高趨勢(表2)。各組雄魚成熟率為100%，添加0.1%維生素E組、添加0.2%維生素E組雌魚成熟率均高于基礎日糧組(表3)。

表3 添加維生素E對圓口銅魚親魚生長與成熟率的影響Tab.3 Growth，survival rate and gonadal development of C.guichenoti fed diets adding vitamin E

2.3 添加卵磷脂、維生素E和螺肉對圓口銅魚生長與性腺發育的影響

經過240 d養殖，C0組(對照組)和C1組(基礎日糧+0.2%維生素E+2%卵磷脂)實驗魚成活率分別為(92.80±4.59)%、(92.93±9.74)%，C2組(基礎日糧+0.2%維生素E+2%卵磷脂+螺肉)因2個養殖桶(平行組)實驗魚實驗期間患病，成活率為(78.79±10.93)%，不過3個實驗組成活率無顯著差異。各組肥滿度、增重率和特定生長率均無顯著差異(表4)。

各組雄魚成熟率為100%，雌魚成熟情況呈現組間差異。C1組和C2組雌魚成熟率均顯著高于對照組，C1、C2組之間無顯著差異(表4)。

表4 添維生素E、卵磷脂和螺肉對圓口銅魚親魚生長與成熟率的影響Tab.4 Growth，survival rate and gonadal development of C.guichenoti fed diets adding lecithin，vitamin E or C.cathayensis meat

3 討論

卵磷脂為甘油磷脂混合物，在卵巢發育過程中對脂類物質從肝胰腺經血淋巴轉運到卵巢起著重要作用[17]。有研究表明，維生素E能有效去除體內各種有害自由基，保證卵膜結構完整性和卵中DNA不被氧化破壞，從而改善親魚繁殖性能[18]；在施氏鱘飼料中添加2%的卵磷脂，可提高施氏鱘后備親魚血清E2和Vg濃度，從而改善施氏鱘親魚的繁殖性能[19]；在真鯛(Pagrusmajor)飼料中維生素E的添加量達到2 000 mg/kg時，親魚的浮卵率、孵化率和正常仔魚的比例顯著提高[20]。本研究發現，在基礎日糧中單獨添加2%卵磷脂、0.1%VE、0.2%VE，雌性圓口銅魚成熟率均高于僅投喂基礎日糧。組合添加2%卵磷脂與0.2%VE時，圓口銅魚雌魚成熟率顯著高于基礎日糧組(P<0.05)。這說明在基礎日糧中單獨或組合添加卵磷脂和VE均對圓口銅魚性腺發育有促進作用。

圓口銅魚是一種應激性極強的魚類，其應激反應嚴重影響了其人工馴養和繁殖等工作的開展[7]。應激會影響水產動物內分泌與繁殖行為[21]。卵磷脂和VE都有緩解魚類應激反應，增強適應能力的作用[22-23]。這也是在基礎日糧中添加卵磷脂和VE可促進圓口銅魚親魚性腺發育的原因之一。

魚油富含DHA和EDA，對魚類性腺發育有促進作用[24]。本研究中單獨添加魚油并未能獲得成熟雌魚，在添加卵磷脂、黃粉蟲的同時添加魚油相對單獨添加卵磷脂也未能獲得顯著效果，這可能與魚油的添加量有關。張燕萍等[25]發現在黃鱔親本培育過程中，魚油在飼料中添加量過高(4%和6%)會降低蛋白質利用效率，造成雌鱔性腺發育變緩，絕對懷卵量減少。李仰真等[11]用沙蠶等鮮活餌料對半滑舌鰨親魚進行強化培育，獲得良好產卵效果。本研究顯示在圓口銅魚親魚培育過程中，每天增加投喂25%的動物餌料(黃粉蟲、螺肉)，相對其它實驗組并未明顯促進親魚性腺發育，甚至單獨在基礎日糧中添加黃粉蟲并未獲得成熟雌魚。這可能與圓口銅魚食性有關。圓口銅魚天然餌料中，螺類出現頻率為3.33%，且只出現在春季，而黃粉蟲并不是圓口銅魚天然餌料[15]。由此，有關魚油、黃粉蟲對圓口銅魚性腺發育是否有影響還需進一步探究。

卵磷脂、VE以及動物餌料對魚類生長具有促進作用[17-18,24]。本研究中，除VE單獨添加組特定生長率隨添加量增多而升高外，其他各實驗組圓口銅魚相對基礎日糧組并沒有出現顯著生長效果。這可能與本研究所用實驗魚均為成熟個體，且年齡都在5齡及以上有關。魚類快速生長期一般是在性成熟之前和性成熟1～2年，且在性成熟之后所消耗餌料大部分用于性腺發育及越冬物質積累[26]。

本研究表明，在進行圓口銅魚親魚培育時，在基礎日糧中單獨或組合添加卵磷脂與維生素E投喂圓口銅魚親魚可顯著提高雌魚成熟率。