miR-1296、miR-1243在甲狀腺癌中的表達及其與術后復發、轉移的關系*

劉海楠，馮玉俊，郭連峰，王林娜，趙正歷

1.河北省殘疾人康復中心，河北石家莊 050081；2.衡水市人民醫院，河北衡水 053000

甲狀腺癌(TC)是頭頸部常見的惡性腫瘤，其中80%～90%為甲狀腺乳頭狀癌(PTC)，多數患者術后預后良好，但仍有30%的患者術后出現復發、遠處轉移，導致患者預后較差[1-2]。因此，積極尋找TC病情評估及監測術后復發、遠處轉移的標志物具有重要意義。研究發現，微小RNA(miRNA)參與惡性腫瘤的發生、進展，可為臨床有效治療癌癥提供新的策略[3]。miR-1296被證實在三陰性乳腺癌中具有巨大的治療功效，且在膠質瘤等多種癌癥中發現了miR-1296表達異常減少[4-5]。此外，miR-1243也是與惡性腫瘤密切相關的miRNA，具有調控腫瘤細胞增殖、遷移和侵襲的作用[6]。目前國內外關于miR-1296、miR-1243在TC中表達情況的研究較少，本研究重點探討TC癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平及其與術后復發轉移的關系，初步探討二者對TC發生發展及預后的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 經河北省殘疾人康復中心和衡水市人民醫院倫理委員會審批通過，選取2020年3月至2021年3月于河北省殘疾人康復中心和衡水市人民醫院治療的85例TC患者，男33例、女52例，年齡26～75歲、平均(54.89±9.37)歲，病理類型：乳頭狀癌72例、濾泡狀癌13例，病灶數目：單發50例、多發35例，腫瘤最大徑：≤2 cm 46例、>2 cm 39例；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期53例、Ⅲ～Ⅳ期32例，有頸部淋巴結轉移者30例，分化程度：低分化42例、中分化26例、高分化17例。納入標準：(1)符合TC診斷標準[7]；(2)首次檢出；(3)術前未進行放化療；(4)無手術禁忌；(5)對本研究知情同意并簽署知情同意書。排除標準：(1)術前已發生其他臟器轉移者；(2)合并嚴重感染或其他惡性腫瘤者；(3)精神疾病患者。

1.2儀器與試劑 RNA提取試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司，批號20191226。反轉錄試劑盒購自美國Promega公司。SYBR Premix Ex Taq Ⅱ試劑盒購自武漢科昊佳生物科技有限公司。miR-1296、miR-1243、U6引物均購自上海生工生物工程股份有限公司。

1.3方法 所有患者均取術中TC癌組織及癌旁組織(癌旁2 cm)，即刻送檢，采用實時熒光定量PCR檢測miR-1296、miR-1243表達水平。取100 mg組織標本，采用RNA提取試劑盒以Trizol法提取總RNA，采用反轉錄試劑盒反轉錄合成cDNA，參照SYBR Premix Ex Taq Ⅱ試劑盒說明書設計反應體系和反應條件，進行PCR，反應步驟：95 ℃ 15 min，95 ℃ 15 s，55 ℃ 30 s，70 ℃ 30 s，共40個循環；miR-1296正向引物為5′-ATGGACTTCCGGTCAGGTTCA-3′，反向引物為5′-GCCCTTGCCCAGTAGCTTCA-3′；miR-1243正向引物為5′-CAGGCATGGAGACGCTACTGA-3′，反向引物為5′-TCCGATCGCAGGTGACTGA-3′；以U6為內參基因，U6正向引物為5′-CTCGCTTCGGCAGCACATATACT-3′，反向引物為5′-ACGCTTCACGAATTTGCGTGTC-3′。應用公式2-ΔΔct計算miR-1296、miR-1243的相對表達水平。

1.4觀察指標 (1)癌組織、癌旁組織中miR-1296、miR-1243表達水平。(2)不同臨床病理特征(性別、年齡、病理類型、病灶數目、腫瘤最大徑、臨床分期、頸部淋巴結轉移、分化程度)患者癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平。(3)隨訪1年，統計患者術后復發、遠處轉移情況[8]，比較復發與未復發患者、遠處轉移與無遠處轉移患者癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平。

2 結 果

2.1癌組織、癌旁組織中miR-1296、miR-1243表達水平比較 TC患者癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平均較癌旁組織低(P<0.05)，見表1。

表1 癌組織、癌旁組織中miR-1296、miR-1243表達水平比較

2.2不同臨床病理特征患者癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平比較 不同性別、年齡、病理類型、病灶數目、腫瘤最大徑、腫瘤分化程度患者癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；臨床分期Ⅲ～Ⅳ期者癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平較Ⅰ～Ⅱ期者低(P<0.05)，有頸部淋巴結轉移者癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平較無轉移者低(P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床病理特征患者癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平比較

續表2 不同臨床病理特征患者癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平比較

2.3miR-1296、miR-1243表達水平與TC臨床病理特征的相關性 Spearman相關性分析顯示，TC組織中miR-1296、miR-1243表達水平與臨床分期、頸部淋巴結轉移(無=0，有=1)均呈負相關(r<0，P<0.05)，見表3。

表3 miR-1296、miR-1243表達水平與TC臨床病理特征的相關性

2.4不同預后患者癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平 隨訪1年，所有患者均完成隨訪，復發14例，發生遠處轉移10例。復發者癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平較未復發者低，遠處轉移者癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平較無遠處轉移者低(P<0.05)。見表4。

表4 不同預后患者癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平

續表4 不同預后患者癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平

2.5miR-1296、miR-1243表達情況與TC術后復發、遠處轉移的交互作用 以TC患者癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平均值為界，分為低表達(<均值)和高表達(≥均值)。交互作用分析顯示，癌組織中miR-1296低表達、miR-1243低表達與TC術后復發、遠處轉移中呈正向交互作用(γ=2.034、1.718，P<0.05)，且均為超相乘模型。見表5、6。

表5 癌組織中miR-1296、miR-1243表達情況與TC術后復發的交互作用分析

表6 癌組織中miR-1296、miR-1243表達情況與TC術后遠處轉移的交互作用分析

3 討 論

TC是起源于甲狀腺濾泡上皮或濾泡旁上皮細胞的惡性腫瘤，細針穿刺活檢是臨床診斷TC的重要方法，但穿刺活檢結果易受腫瘤大小、位置等因素影響，導致部分患者不能確診[9]。越來越多的研究顯示，miRNA可作為TC診斷的標志物[10-11]。

miR-1296是一種參與多種腫瘤發生發展的標志物，如ZANG等[12]認為miR-1296能抑制乳腺癌細胞的生長、遷移和侵襲。DENG等[13]研究顯示miR-1296表達與非小細胞肺癌預后相關，并通過Wnt信號抑制細胞增殖和侵襲。但miR-1296在TC中的研究較少。本研究結果顯示，TC患者癌組織中miR-1296表達水平明顯低于癌旁組織，且隨著TC患者臨床分期的增加、發生頸部淋巴結轉移，癌組織中miR-1296表達水平降低更明顯。可見，癌組織中miR-1296表達水平與TC的發生有關，并參與了TC腫瘤增殖及轉移。目前已知的miR-1296靶基因包括SRPK1、KEGG等，但miRNA的調節網絡相當復雜，miR-1296被證實與MAP17存在結合位點，二者表達呈負相關，其可能通過靶向調控MAP17參與TC的發生、發展[14]。而MAP17能通過降低p53的穩定性促進PTC的發生[15]。本研究還發現，TC癌組織中miR-1296表達水平與臨床分期、頸部淋巴結轉移呈負相關，進一步說明miR-1296低表達與TC進展有關。但季昳弛等[14]的研究結果顯示，癌組織中miR-1296相對表達量與PTC患者腫瘤最大徑密切相關。而本研究中不同腫瘤最大徑TC患者癌組織中miR-1296表達水平無明顯差異，與上述研究結果存在一定差異，這可能與研究對象、樣本量不同有關，仍需通過大樣本的前瞻性研究進一步驗證。

此外，有報道指出PTC患者癌組織中miR-1243表達下調，與PTC的進展呈負相關，可能具有抑癌作用，但其機制尚未明確[16]。本研究結果顯示，TC患者癌組織中miR-1243表達水平均低于癌旁組織，且TC癌組織中miR-1243表達水平與臨床分期、頸部淋巴結轉移呈負相關，與上述研究結果基本一致，說明miR-1243參與TC的發生，并可能發揮抑制TC進展的作用。miR-1243具有靶向抑制Akt1、Akt2表達的作用，而Akt1、Akt2則能促進腫瘤細胞增殖、轉移，miR-1243表達下調導致對Akt1、Akt2的抑制作用降低，從而促進PTC的發生發展[17-18]。但miR-1243是否能通過其他途徑調節TC的發生發展尚未可知。本研究結果顯示，復發、遠處轉移者癌組織中miR-1296、miR-1243表達水平明顯低于未復發、無遠處轉移者，提示癌組織中miR-1296、miR-1243表達與TC患者預后有關。本研究進一步分析了TC癌組織中miR-1296、miR-1243表達與術后復發轉移的關系，結果發現癌組織中miR-1296低表達與miR-1243低表達均會明顯增加術后復發、遠處轉移風險，且二者在TC術后復發、遠處轉移中均呈超相乘模型的正向交互作用，即miR-1296與miR-1243同時低表達會增加各自對預后的作用效應。分析其原因可能在于，miR-1296能抑制腫瘤細胞的生長、遷移和侵襲，其表達致使其上述抑制作用減弱，而miR-1243表達水平降低導致其靶向抑制Akt1、Akt2表達的作用減弱，證實Akt1、Akt2表達及活性增加，因此miR-1296與miR-1243同時低表達會促進腫瘤細胞增殖、轉移，增加術后復發、遠處轉移風險。由此可見，采用miR技術調控癌組織中miR-1296、miR-1243表達可影響TC惡性生物學特征即預后，可為TC的靶向治療提供新思路。

綜上所述，miR-1296、miR-1243在TC癌組織中的表達明顯降低，二者表達水平與TC臨床分期、頸部淋巴結轉移呈負相關，且在TC術后復發轉移中發揮負向調控作用，可作為評估TC臨床病理特征及預后的生物標志物。但本研究仍存在一定局限性，未探究TC患者血清中miR-1296、miR-1243水平及臨床意義，未來工作中仍需進一步深入探討。