含羞草醇提物鎮痛抗炎抗氧化活性研究*

趙春梅，楊 鷗，周理強 ，李 旺，周銘濤

(云南省藥物研究所/云南白藥集團創新研發中心/云南省中藥和民族藥新藥創制企業重點實驗室，云南 昆明 650111)

豆科含羞草屬植物含羞草(Mimosapudica L.)的全草[1]。為披散半灌木狀草本，生于曠野、山溪邊、草叢或灌木叢中。分布于我國西南及福建、臺灣、廣東、海南、廣西等地。文獻記載含羞草具有清熱利尿，化痰止咳，安神止痛的功效。用于感冒，小兒高熱，急性結膜炎，支氣管炎，胃炎，腸炎，泌尿系結石，瘧疾，神經衰弱；外用治跌打腫痛，瘡瘍腫毒[2]。為了證明其清熱、止痛的功效，進行了鎮痛、抗炎的功效研究，并進行抗氧化研究。

1 實驗材料

1.1 藥物 含羞草醇提取物，由云南省藥物研究所提供，70%乙醇提取3次，減壓回收，干燥。提取率為12.5%。使用時用純水配制。藥效試驗給藥劑量以急性毒性試驗結果為依據確定。阿司匹林腸溶片，100 mg/片，Bayer Schering Pharma生產，批號：BJ10778；水飛薊賓膠囊，天津天士力圣特制藥有限公司，批號：750702017；SOD試劑盒A001-1，南京建成生物工程研究所，批號：20171026；MDA試劑盒A003-1，南京建成生物工程研究所，批號：20171031；冰醋酸，天津市天達凈化材料精細化工廠，批號：020112；二甲苯，廣東省化學試劑工程技術研究開發中心，批號：20090831；無水乙醇，國藥集團化學試劑有限公司，批號：20150930。

1.2 動物SPF級昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，由廣東省醫學實驗動物中心提供。許可證號：SCXK(粵)2013-0002。小鼠分性別飼養于空調實驗室內，室溫(25±2)℃，相對濕度40%～70%，喂顆粒標準飼料，自由飲水和攝食。

2 方法

2.1 鎮痛試驗[3]取小鼠40只，體重18～22 g，雌雄各半，隨機分為4組，組別及劑量如表1，按照表1劑量灌胃給藥，每日1次，連續6 d，給藥容積為20 mL/kg。末次給藥后45 min，小鼠腹腔注射0.6%冰醋酸10 mL/kg/只，立即記錄15 min內的扭體反應(小鼠出現腹部內凹、軀干與后肢伸張，臀部抬起反應為準)次數，并計算其抑制率。

表1 含羞草醇提取物對醋酸所致小鼠扭體反應的影響

抑制率=[扭體次數(空白對照均數)-扭體次數(給藥均數)]×[扭體次數(空白對照均數)]

含羞草醇提取物以2.01 g/kg，4.00 g/kg(相當于生藥16.08 g/kg，32.00 g/kg)的劑量連續灌胃給藥6 d，2組均能不同程度抑制醋酸所致小鼠扭體性疼痛，抑制率分別為：30.7%、41.3%，4.00 g/kg劑量組作用明顯，與空白對照組相比較具有顯著性差異。顯示出鎮痛作用。

2.2 抗炎試驗[4]選用18～22 g小鼠40只，按體重隨機分為4組，每組雌雄各5只，分組及給藥情況見表2。各組均預先每日灌胃給藥1次，連續7 d，對照組灌服等容量純水，各組灌胃容積均為20 mL/kg體重。末次給藥后30 min，各組小鼠于右耳兩面均勻涂抹二甲苯0.05 mL，左耳不涂為對照。致炎后1h脫頸椎處死動物，用直徑6 mm的打孔器將雙耳同部位等面積切下，取耳片稱重，以兩耳片重量之差作為腫脹度。

表2 含羞草醇提取物對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響

含羞草醇提取物以2.01 g/kg，4.00 g/kg(相當于生藥16.08 g/kg，32.00 g/kg)的劑量連續灌胃給藥7 d，2組均能不同程度抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，抑制率分別為：32.22%、25.09%，2.01 g/kg劑量組作用明顯，與空白對照組相比較差異具有統計學意義。

2.3 抗氧化試驗[5]取18～22 g小鼠50只，雌雄各半，隨機分為空白對照組，水飛薊賓陽性組(0.175 g/kg)，含羞草低、高劑量組，共5個組，每組10只。各組動物每日按20 mL/kg容積給藥，連續30 d。末次給藥后60 min，空白組給予純水，其余各組均一次性灌胃給予50%的乙醇溶液，所有動物禁食不禁水16 h，摘眼球取血，制備血清，測定SOD活力、MDA含量。處死后取肝臟計算肝臟指數。進行統計學檢驗。

表3 含羞草對乙醇氧化損傷小鼠肝臟指數、血清SOD活力和MDA含量的影響

與空白對照組比較，模型組肝臟指數上升，且有顯著性差異(P<0.001)，表明乙醇產生的自由基氧化損傷肝臟，肝細胞中脂肪堆積，造模成功。與模型組比較，水飛薊賓，含羞草4 g/kg高劑量均可明顯抑制乙醇氧化損傷引起的肝臟指數上升(P<0.05)。

與空白組比較，模型組血清MDA含量明顯升高，具有顯著性差異(P<0.01)，造模成功。與模型組比較，水飛薊賓，含羞草2 g/kg，4 g/kg劑量均可明顯降低模型小鼠血清中MDA的含量，且差異具有統計學意義(P<0.05，P<0.01)。

與空白組比較，模型組血清SOD含量明顯降低，具有顯著性差異(P<0.05)，造模成功。與模型組比較，水飛薊賓，含羞草4 g/kg劑量均可明顯升高模型小鼠血清中SOD的含量，且具有顯著性差異(P<0.05)。

2.4 小鼠急性毒性實驗[6]

2.4.1 正式實驗 根據預實驗的結果將KM小鼠40只隨機分為2組，即溶媒對照組和含羞草13.34 g/kg·bw 1個劑量組，每組20只，♀♂各10只。動物禁食不禁水約6 h 55 min～7h8 min后，按40 mL/kg體重一次灌胃給予相應供試品，觀察其急性毒性反應和死亡情況，以后每天觀察1次，連續14 d；于給藥第4、7、14 d稱量體重；觀察結束處死動物，大體解剖觀察各動物臟器、器官的體積、顏色、質地等有無明顯異常。

2.4.2 試驗結果與分析

2.4.2.1 毒性反應 小鼠灌胃給予供試品含羞草醇提物后，在4 h內出現毒性反應，主要表現為豎毛。存活動物至第2 d恢復。給藥組動物的毒性反應見表4。

表4 含羞草醇提物小鼠灌胃給藥急性毒性試驗急性毒性癥狀及動物死亡情況

2.4.2.2 死亡情況 觀察期內各組動物均無死亡。

2.4.2.3 體重 試驗期間，給藥后第3 d，各劑量組小鼠體重持續增長，與溶媒對照組比較無顯著性差異(P>0.05)；至給藥后第7 d，13.34 g/kg·bw含羞草雄、雌鼠體重增長緩慢，與溶媒對照組比較具有顯著性差異(P<0.001)；至給藥后第14 d，各劑量組小鼠體重持續增長，與溶媒對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表5。

表5 含羞草小鼠灌胃急性毒性試驗各組動物的體重

2.4.2.4 解剖觀察 觀察14 d結束后脫頸椎處死的動物進行大體解剖觀察，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、卵巢、子宮、精囊、前列腺、睪丸、胃、腸及胸腔、腹腔，各組織和器官的體積、顏色、質地等，含羞草醇提物各劑量組、溶媒對照組各小鼠器官均無肉眼所見異常。

2.4.3 毒性 在本實驗條件下，對含羞草醇提物不同劑量進行24 h內小鼠單次灌胃給藥急性毒性試驗，可見動物于4 h內出現毒性反應，主要表現為豎毛。至第2 d恢復。試驗結束對存活動物進行大體解剖觀察，各組動物臟器、器官的體積、顏色、質地等均未見明顯異常。含羞草醇提物24 h內小鼠灌胃給藥最大給藥量為13.34 g/kg·bw(相當于生藥106.72 g/kg·bw)，各組均未出現動物死亡。

3 小結

含羞草是云南民間常用藥。具有清熱利尿，化痰止咳，安神止痛的功效。含羞草全草藥理作用研究較少。為了探討和開發含羞草的藥用價值，本文對其進行了初步安全性及鎮痛、抗炎、抗氧化藥理作用的實驗研究。急性毒性實驗顯示，含羞草醇提物24 h內小鼠灌胃給藥最大給藥量為13.34 g/kg·bw(相當于生藥106.72 g/kg·bw)，各組均未出現動物死亡。表明含羞草毒性很低。含羞草能抑制醋酸所致小鼠扭體性疼痛，能抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，可提高SOD的活性，降低MDA的含量。表明含羞草具有具有鎮痛、抗炎、抗氧化作用。實驗結果為含羞草將來產品研發和臨床應用提供了科學依據。