血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4檢測對分化型甲狀腺癌的診斷價值

王曄龍，于海文

上海市嘉定區南翔醫院普外科，上海 201802

分化型甲狀腺癌占甲狀腺癌的90%以上，由甲狀腺濾泡狀上皮細胞惡化而來，多數患者預后較好，惡性程度低。但由于分化型甲狀腺癌起病較為隱匿，臨床表現不典型，影像學特征與甲狀腺良性病變常常具有交叉性，導致存在一定的漏診和誤診[1]。近年來，甲狀腺相關的實驗室指標在診斷甲狀腺癌方面已經成了研究熱點。β-Klotho為編碼單程跨膜蛋白，主要在肝臟、胰腺和脂肪組織中表達，近些年發現在甲狀腺癌的組織和細胞中表達，是成纖維生長因子(FGFs)及其受體(FGFRs)的重要輔助因子，在腫瘤細胞增殖、血管形成和組織分化中具有重要作用，FGF/FGFRs信號通路幾乎參與了所有惡性腫瘤的發生發展[2-3]。本組研究通過檢測甲狀腺癌患者血清β-Klotho、成纖維生長因子19(FGF-19)和成纖維生長因子受體4(FGFR-4)水平，觀察其在分化型甲狀腺癌的輔助診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2019年1月至2021年12月在本院確診為分化型甲狀腺癌患者98例納入甲狀腺癌組。其中男39例，女59例；年齡22～59歲，平均(41.82±8.27)歲；病程1～24個月，平均(3.23±1.03)個月；分化類型：低分化27例，中高分化71例；組織類型：乳頭狀癌65例，濾泡狀癌33例；腫瘤分期：Ⅰ期28例，Ⅱ期27例，Ⅲ期32例和Ⅳ期11例。選擇同期本院收治的甲狀腺良性腫瘤患者36例納入良性病變組，其中男13例，女23例；年齡23～59歲，平均(41.18±7.38)歲；病程2～24個月，平均(3.51±1.13)個月；病理類型：局灶性亞急性甲狀腺炎6例，甲狀腺腺瘤17例，局灶性橋本甲狀腺炎8例，結節性甲狀腺腫5例。兩組年齡、性別和病程等基線資料比較，差異有統計學意義(P<0.05)，具有可比性。納入標準：入組資料完整；經病理確診；依從性好。排除標準：合并其他部位的腫瘤；術前行放療、化療和免疫治療；合并肺部結核、肝炎、肺炎等急慢性感染性疾病；合并高血壓、冠心病和糖尿病等慢性疾病；孕婦和哺乳期女性；智力障礙和精神性疾病。所有患者或家屬簽署知情同意書，本研究經醫院倫理委員會審核通過。

1.2方法

1.2.1血液標本保存和指標檢測 兩組受試者入組后和手術后1周抽取肘靜脈空腹血液標本5 mL，放置于抗凝管中，采用3 000 r/min速度進行離心，時間約10 min，取上清液放置于-70 ℃的冰箱中備用。采用酶聯免疫吸附試驗測定血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平，試劑盒購自上海聯邁生物工程有限公司。

1.2.2觀察指標 觀察兩組治療前后血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平，探討血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平與臨床指標的關系，以及其對甲狀腺癌的診斷效能和各指標間的相關性。

2 結 果

2.1兩組治療前后血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平比較 入院時，甲狀腺癌組血清β-Klotho水平明顯低于良性病變組，而血清FGF-19和FGFR-4水平明顯高于良性病變組(P<0.05)。術后，兩組血清β-Klotho水平較入院時明顯升高，而血清FGF-19和FGFR-4水平較入院時明顯降低(P<0.05)。術后兩組血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組治療前后血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平比較

2.2臨床指標與血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平的關系 血清β-Klotho水平在有淋巴結轉移、浸潤深度T3+T4和Ⅲ+Ⅳ期患者中明顯低于無淋巴轉移、浸潤深度T1+T2和Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05)，而血清FGF-19和FGFR-4水平在有淋巴結轉移、浸潤深度T3+T4和Ⅲ+Ⅳ期患者中明顯高于無淋巴轉移、浸潤深度T1+T2和Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05)。血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平在年齡、性別、分化程度、組織類型和腫瘤最大徑方面比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 臨床指標與血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平的關系

2.3血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4檢測對甲狀腺癌的診斷效能 以甲狀腺良性病變為對照，血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4對甲狀腺癌具有較高的輔助診斷效能，甲狀腺疾病根據是否為甲狀腺癌進行二元Logistic回歸分析，得方程Y=-1.43×Xβ-Klotho+0.05×XFGF-19+0.17×XFGFR-4-1.54，聯合檢測的靈敏度為80.6%，特異度為97.2%，曲線下面積(AUC)為0.944，明顯高于β-Klotho、FGF-19和FGFR-4單獨檢測(Z=3.307、3.953、4.477，P<0.05)；而3個指標單獨檢測診斷甲狀腺癌的AUC比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表3、圖1。

表3 血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4檢測對甲狀腺癌的診斷效能

圖1 血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4檢測診斷甲狀腺癌的ROC曲線

2.4甲狀腺癌患者血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平之間的相關性分析 甲狀腺癌患者血清β-Klotho水平與FGF-19和FGFR-4水平呈負相關(r=-0.732、-0.648，P<0.05)，而血清FGF-19水平與FGFR-4水平呈正相關(r=0.816，P<0.05)。

3 討 論

分化型甲狀腺癌早期由于缺乏特異性的癥狀，尤其與甲狀腺良性疾病難以鑒別，主要行輔助檢查，如B超、CT和活體組織檢查等。B超和CT缺乏特異性，活體組織檢查具有創傷，患者的依從性較差。對血液標本進行檢測具有微創、可以重復、價格低廉和依從性好等優勢，并且血清學指標在出現輕度癥狀前3～6個月開始已經出現異常，故血清學指標成為腫瘤早期診斷的重要方法之一。

本組研究顯示甲狀腺癌組血清β-Klotho水平明顯低于良性病變組，術后血清β-Klotho水平較入院時明顯升高，說明血清β-Klotho來源可能與甲狀腺癌有關。β-Klotho為FGFR-4與FGF-19高親和力結合和活性所必需的共同受體[4]，盡管α-Klotho 被認為是一種通用的腫瘤抑制因子[5]，但β-Klotho的致癌作用仍不清楚。有研究表明，α-Klotho 在多種惡性腫瘤(包括乳腺癌、胰腺癌、肺癌、結直腸癌和胃癌等)中表現為抑制因子，并認為可以作為腫瘤預后的指標[5]。關于β-Klotho在癌癥發展中的作用知之甚少，在不同腫瘤中的表達具有一定差異：在前列腺癌細胞中β-Klotho表達水平明顯高于正常細胞，并且沉默β-Klotho基因能夠抑制細胞增殖[6]；而在肝癌的研究中與正常肝細胞比較β-Klotho表達水平明顯降低，發現誘導肝癌細胞β-Klotho高表達能夠明顯抑制細胞增殖[7]。同時發現血清β-Klotho水平在有淋巴結轉移、浸潤深度T3+T4和Ⅲ+Ⅳ期患者中明顯低于無淋巴轉移、浸潤深度T1+T2和Ⅰ+Ⅱ期患者，說明血清β-Klotho水平與甲狀腺癌的預后有一定的聯系。有研究顯示頭頸部鱗狀細胞癌患者Klotho基因表達水平與患者的中位生存期呈正相關，認為Klotho基因低表達和DNA高甲基化是患者預后不良的潛在標志物[8]。本組研究顯示，血清β-Klotho為5.5 pg/L時，其診斷甲狀腺癌的靈敏度為82.7%，特異度為75.0%，AUC為0.808，說明血清β-Klotho檢測在診斷甲狀腺癌時具有較高的輔助診斷效能。

本組研究發現，血清FGF-19水平在甲狀腺癌組明顯高于良性病變組，術后血清FGF-19水平較治療前明顯降低，說明血清FGF-19水平與甲狀腺癌具有一定的聯系。FGF-19不僅在正常生理條件下對代謝具有重要作用，而且在癌癥的發生、發展中具有明顯促進作用，在體外實驗中轉染FGF-19能夠促進肝癌細胞的增殖和遷移能力，并且抑制肝癌細胞的凋亡[9]；在另一項實驗中阻斷FGF-19的表達可以抑制結腸癌細胞的生長[10]。本組研究顯示血清FGF-19水平在有淋巴結轉移、浸潤深度T3+T4和Ⅲ+Ⅳ期患者中明顯高于無淋巴轉移、浸潤深度T1+T2和Ⅰ+Ⅱ期患者，說明血清FGF-19與甲狀腺癌的預后相關，與文獻[11]報道的結果類似：FGF-19在分化型甲狀腺癌組織中的表達水平明顯高正常組織，并發現FGF-19過表達與TNM高分期、甲狀腺外浸潤、淋巴結轉移和遠處轉移具有明顯的關系，并且通過敲除FGF-19的表達可以抑制甲狀腺癌細胞的侵襲和轉移。本組研究還顯示，當血清FGF-19為152.41 pg/mL時對診斷分化型甲狀腺癌具有較高的診斷效能，其靈敏度為59.2%，特異度為94.4%，AUC為0.823，說明血清FGF-19檢測在診斷甲狀腺癌時具有較高的輔助診斷效能。

本組研究發現甲狀腺癌患者血清FGFR-4水平明顯高于甲狀腺良性病變組，術后血清FGFR-4水平較入院時明顯降低，說明FGFR-4的表達水平與甲狀腺癌具有關聯。FGFR-4是FGF-19的主要同源性受體，FGFR-4在多種腫瘤(結腸癌、前列腺癌、鱗狀細胞癌和肺癌等)中出現過表達[12]，通過激活細胞外調節蛋白激酶導致腫瘤細胞的增殖。在甲狀腺癌中關于FGFR-4的研究仍較少。在甲狀腺正常組織和腫瘤組織中均有FGFR-4的表達，在侵襲性甲狀腺癌中表達最為明顯，其表達水平與甲狀腺癌的惡性程度呈正相關，轉染FGFR-4的腫瘤細胞能夠促進其的增殖和侵襲能力，采用FGFR-4抑制劑能夠抑制內源性受體的表達，明顯抑制腫瘤細胞的增殖[13]。本組研究還發現血清FGFR-4高表達與淋巴結轉移、腫瘤浸潤深度和腫瘤分期具有有關，說明血清FGFR-4高表達與甲狀腺癌的預后有一定的關系。本組研究顯示，血清FGFR-4為25.54 ng/mL時，其診斷甲狀腺癌的靈敏度為72.4%，特異度為77.8%，AUC為0.764，說明血清FGF-19檢測對甲狀腺癌具有較高的輔助診斷效能。本組研究還發現血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4聯合檢測對甲狀腺癌具有更高的診斷效能，明顯高于單個指標的檢測，其靈敏度為80.6%，特異度為97.2%，說明3個指標在診斷甲狀腺癌時具有一定的互補性。進一步相關性分析發現，甲狀腺癌患者血清β-Klotho水平與FGF-19和FGFR-4呈負相關，而血清FGF-19水平與FGFR-4呈正相關。現已知FGF-19-FGFR-4信號通路在惡性腫瘤細胞分化、遷移和增殖中具有重要作用[14]，而β-Klotho對這個信號系統具有明顯的調節作用。

總之，β-Klotho、FGF-19和FGFR-4參與了甲狀腺癌的發病過程，聯合檢測有助于提高對甲狀腺癌的輔助診斷效能。