RET指樣蛋白3在惡性腫瘤發生發展中的作用研究進展

孫程妍，杭曉朦，程凱，陳政華，馬維昌，李文杰

濱州醫學院煙臺附屬醫院甲狀腺乳腺外科，山東煙臺 264100

惡性腫瘤是威脅人類健康的主要疾病，其復發轉移仍是困擾臨床醫生的主要難題［1］。隨著精準醫學的發展，尋找惡性腫瘤新的分子標志物以及治療靶點，避免腫瘤的復發、轉移則顯得尤為重要。RET指樣蛋白3（RFPL-3）作為RET 指樣蛋白（RFPL）家族的主要成員，在調節細胞的生長和分化中具有重要作用。研究顯示，RFPL-3同源的RFP 蛋白存在于不同的細胞質、細胞核，并通過ERK 信號轉導通路參與細胞周期的調控［2-3］。與此同時，RFPL-3可提高1 型人免疫缺陷病毒（HIV-1）的預整合復合物（PIC）的整合活性［4］。值得注意的是，RFPL-3 在不同惡性腫瘤中的表達有差異，其在乳腺癌、肺癌、甲狀腺癌中呈高表達，而在睪丸生殖細胞腫瘤中呈低表達［5］。因此，RFPL-3 可能在不同腫瘤中所發揮的作用不同。本文對RFPL-3 在乳腺癌、肺癌、睪丸生殖細胞腫瘤（TGCT）、甲狀腺癌發生發展中的作用作一綜述，為治療惡性腫瘤的新靶點研究提供依據。

1 RFPL-3在乳腺癌發生發展中的作用

乳腺癌是嚴重威脅女性健康的一種疾病，RFPL-3 在正常乳腺組織及乳腺癌組織內均呈高表達，提示其在乳腺癌的發病中扮演重要角色。研究顯示，RFPL-3 可以與CREB 結合蛋白（CBP）協同促進脂肪干細胞（ASCs）誘導的乳腺癌細胞增殖，其機制是ASCs 分泌的干細胞因子（SCF）可觸發乳腺癌細胞中MEK/ERK 通路的激活，導致轉錄共激活因子CBP 的核募集，隨后通過乙酰化組蛋白與RFPL-3協同促進人端粒逆轉錄酶基因（hTERT）轉錄和端粒酶活性上調，從而誘導惡性腫瘤細胞增殖［7-10］。雖然RFPL-3 和CBP 均可調控hTERT 的活性，但RFPL-3蛋白不能完全調節hTERT 表達，這表明其他因素可能參與了細胞增殖的調節［11］。例如，轉錄因子激活蛋白2（AP-2）在許多人乳腺癌細胞系中表達，可以激活C-erbB-2 和雌激素受體啟動子，并促進細胞增殖，或者其他因素干擾RFPL-3 的功能［12］。此外，Importin13（IPO13）可以通過RFPL-3 內的功能性核定位信號（NLS）和隨后的hTERT 表達上調，來介導RFPL-3的核導入［13］。

RFPL-3不但可以通過促進hTERT轉錄和上調端粒酶活性來介導乳腺癌的發生，而且一旦當其環指結構上的位點與RET受體酪氨酸激酶發生融合時，也會介導腫瘤進展；其具體機制是RFPL-3中富含半胱氨酸的鋅結合結構域，可以介導蛋白質之間相互結合；當其與RET受體酪氨酸激酶發生融合時，就會促使原癌基因RET激活，從而調節腫瘤細胞增殖［14］。

同樣，RFPL-3因其具有RING 結構域，并且每一環指結構域連有兩個鋅離子，所以具有E3泛素酶的作用，這也是其促使乳腺癌細胞增殖的重要因素。研究顯示，RING E3 作為骨架可使泛素E2 轉移到底物特定位點進行修飾，從而使抑癌蛋白p53 泛素化及降解，導致p53蛋白保持在較低水平，達到負調控作用，從而參與乳腺癌的生長和增殖［15］。

因此，RFPL-3高表達是促進乳腺癌細胞增殖的重要因素，未來可將RFPL-3作為臨床上乳腺癌治療的重要靶點，以進一步提高患者的生存率，改善患者預后。

2 RFPL-3在肺癌發生發展中的作用

目前，RFPL-3可以通過 MAPK 通路和轉化生長因子β（TGF-β）/Smad 通路參與肺癌的病情進展［16］。一項關于RFPL-3 在MAPK 通路中作用機制的研究顯示，當表皮細胞生長因子（EGF）與細胞膜上的表皮細胞生長因子受體（EGFR）結合時，EGFR 接收細胞外生長、增殖信號，通過下游MAPK/ERK 信號通路傳遞到細胞核，激活下游MEK 信號蛋白（RAS/RAF/MEK/ERK），進而增加ERK 表達，上調RFPL-3和hTERT 蛋白表達，使腫瘤細胞RFPL-3 蛋白表達升高［17］。過表達的RFPL-3 蛋白還會增加MEK 信號通路上游分子（Ras、Raf）表達，具有Ras 激活劑的功能，繼而升高ERK 表達，激活癌蛋白表達。在非小細胞肺癌（NSCLC）中，由于RFPL-3 距離端粒較近，所以RFPL-3 的乙酰化更容易調控hTERT 活性和促進肺癌細胞增殖［18］。除此之外，RFPL-3 能夠與TGF-β 受體結合，從而促進TGF-β 信號通路活性，導致Smad 依賴的信號通路激活，上調p-Smad2 蛋白表達，從而促進肺腫瘤細胞增殖、遷移和侵襲［19］。

RFPL-3 調控肺癌細胞增殖的另一個重要機制是，RFPL-3與p53重要的負調控因子雙微體同源基因2（MDM2）在p53的N端轉激活結構域（TAD）的結合位點重疊，從而競爭MDM2與p53的結合，促進p53的泛素化降解，導致腫瘤細胞增殖和遷移能力增強［20］。此外，除了在肺癌中發揮主要的促細胞增殖作用，RFPL-3蛋白還能夠通過螺旋結構域的自我結合形成多聚化，作為多蛋白復合體的組裝支架，識別亞細胞區，協同HDAC1抑制E2F3和E2F4轉錄，從而在肺癌發展過程中發揮抗增殖活性［20］。但總體來說，RFPL-3在肺癌發生發展的作用以促進腫瘤細胞增殖為主。

以上研究表明，RFPL-3是NSCLC細胞增殖和遷移的重要調控因子，可作為治療靶點，進一步提高NSCLC患者的治療效果，延長其生存時間。

3 RFPL-3在TGCT發生發展中的作用

最新研究顯示，TGCT發病率呈上升趨勢，并且其中15%～30%的患者仍會在治療后出現復發和轉移，而用于診斷TGCT 和判斷其預后的臨床方法仍然不足［21］。與正常睪丸組織相比，TGCT中RFPL-3表達降低，且與患者腫瘤分期、淋巴結分期、轉移分期呈負相關關系［22］。TGCT組織中存在高甲基化和低拷貝數的RFPL-3，而沉默RFPL-3 可增強TGCT 淋巴細胞的增殖和侵襲能力，提示其作用機制是受遺傳因素（拷貝數變異）和表觀遺傳因素（DNA甲基化）控制的。下游信號通路分析研究顯示，RFPL-3表達下調促進了腫瘤細胞增殖和轉移相關通路的激活，包括細胞外基質（ECM）-受體相互作用、黏著斑信號通路、黏附連接信號通路以及PI3K/Akt 信號、Wnt 信號和Hippo 信號。當RFPL-3下調時，可引起以下改變：①促進ECM與細胞表面膜整合素受體相連，細胞的形狀及細胞分化、遷移能力也隨之發生變化；②促進局灶黏附激酶激活，而局灶黏附激酶可通過多種信號通路，在細胞周期調節、生長調節、黏附、細胞骨架組裝、運動和存活中發揮重要作用。研究顯示，局灶黏附激酶在多種腫瘤組織中呈高表達，在腫瘤發生、發展、侵襲和轉移中具有重要作用［23］。此外，免疫獲益人群中可能存在較高水平的RFPL-3表達，而且RFPL-3與B細胞、CD8+T淋巴細胞、細胞毒性T淋巴細胞和自然殺傷細胞等免疫激活細胞的浸潤呈正相關關系，與Th17、Th2等免疫抑制細胞的浸潤呈負相關關系［24-25］。因此，睪丸特異性RFPL-3在TGCT的發生發展中具有腫瘤抑制作用，可用作TGCT的預后預測因子，以及評估TGCT免疫治療效果的分子標志物。

4 RFPL-3在甲狀腺癌發生發展中的作用

甲狀腺癌作為最常見的內分泌惡性腫瘤，占所有內分泌惡性腫瘤的90%以上［26］。研究顯示，導致惡性腫瘤細胞增殖的重要原因在于RFPL-3 對YAP的修飾，從而激活Hippo信號通路所導致［27］。具體機制是：RFPL-3 的RING 結構域通過與YAP 的WW 結構域發生蛋白質—蛋白質相互作用，從而影響YAP蛋白的穩定性，并促進YAP 的單泛素化，從而抑制YAP蛋白的k11和k48連鎖多泛素化，促進YAP介導的Hippo信號通路激活，導致細胞轉化和甲狀腺癌的發生與發展［28-29］。也就是說，RFPL-3 介導的YAP 單泛素化修飾是導致甲狀腺癌發生發展的主要機制。

綜上所述，RFPL-3 作為一種特殊的蛋白，因其特有結構而具有很多功能，賦予泛素連接酶活性的RING 結構域，以及能夠進行自我結合的螺旋結構域，均在乳腺癌、肺癌、TGCT、甲狀腺癌等惡性腫瘤的發生中具有重要作用。隨著全球惡性腫瘤發病率的逐年升高，以及精準醫學的發展，臨床上對惡性腫瘤治療精準性及靶向性需求日益增加，尋找有效的惡性腫瘤治療靶點并研發相關的靶向藥物則顯得尤其重要。RFPL-3 有望成為惡性腫瘤的潛在治療靶點，并為患者的治療提供更多選擇，從而改善患者的治療效果和預后。