特異性IgG抗體親和指數在人梅毒原發感染中的診斷價值*

李建春

南昌大學第一附屬醫院，江西省南昌市 330006

梅毒是梅毒螺旋體(TP)感染引發的一種慢性傳染性疾病，其臨床表現因人而異，早期主要以侵犯皮膚、生殖器為主，隨著病情的進展會逐漸擴散至淋巴、血液循環甚至全身組織，導致多器官損傷[1-2]。早期診斷是提升治療效果及預后的基礎，梅毒螺旋體明膠凝集試驗(TPPA)以高敏感度、高特異性的優勢被普遍作為人感染梅毒診斷的“金標準”，但該種檢測方式操作難度大、對醫師專業素質要求極高且費用昂貴，無法在早期篩查中推廣[3-4]。此外，在檢測指標選擇方面，外周血液中IgG抗體在診斷原發人梅毒感染中需要動脈監測，而以IgM陽性為原發感染的指標會出現假陽性的情況。近年來，人們發現特異性IgG抗體(Tp-IgG)親和指數(AI)在診斷原發性感染性疾病中效果較好，該檢測方法操作簡單，只需在常規IgG的酶免疫反應中進行尿素變性、洗脫便可實現[5]。目前，特異性IgG抗體親和力法在巨細胞病毒感染、艾滋病毒感染診斷中均得到應用且效果顯著[6-7]。本研究則分析酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測梅毒螺旋體Tp-IgG AI在原發人梅毒感染診斷中的可行性。

1 資料與方法

1.1 樣本來源 選取2019年4月—2021年4月間我院收治的梅毒螺旋體感染患者87例，其中男49例、女38例，年齡21～55歲，平均年齡(31.5±7.8)歲，病程4個月～3年，平均病程(1.3±0.4)年。納入標準：(1)參考《中華人民共和國衛生行業標準指南共識：新版梅毒診斷標準(WS 273-2018)》中的診斷標準；臨床表現為發熱、淋巴結腫大、硬下疳及皮疹等癥狀；(2)臨床資料完整，檢查依從性良好；(3)患者對試驗知情且自愿簽署同意書；(4)經醫院倫理委員會批準。排除標準：(1)伴其他傳染性疾病者；(2)合并肝腎等重要臟器器質性損傷、免疫系統疾病者；(3)意識障礙、無法正常交流者。

1.2 方法

1.2.1 ELISA檢測TP-IgG及TP-IgM：實驗前30min將試驗試劑置于20～25℃的環境中，嚴格按照試劑盒的操作說明進行實驗步驟：(1)按照1∶101的比例稀釋血液樣本；(2)將被純化的TP抗原的聚苯乙烯孔，在各孔中加100μl陰性、陽性對照和稀釋樣品，預留1孔不加試劑；(3)將反應板蓋上后放置于(37±1)℃環境孵育60min；(4)孵化后加經辣根過氧化物酶標記的兔抗人-IgG、IgM結合物(購自丹麥DAKO生物科技公司)，再行孵育和清洗，加原色和酶底物避光處理，再加H2SO4抑制液，最后用酶標儀測定各孔OD值。

結果判定標準[8]：TP-IgG酶標儀檢測的OD值≤0.25為陰性；0.25

1.2.2 ELISA法檢測TP-IgG AI：(1)血清標本以1∶101稀釋，加入被純化TP抗原的聚苯乙烯孔(每例均做平行2孔)，37℃孵育；(2)一孔用PBST緩沖液洗滌5次，另外一孔用PBST洗滌1次，使用蛋白變性劑(尿素8.0mol/L+硫氰酸銨3.0mol/L+鹽酸胍4.0mol/L+二乙胺35.0mmol/L),10min后PBST洗滌1次；(3)所有孔加100μl辣根過氧化物酶標記的兔抗人-IgG結合物(1∶6 000)，37℃孵育1h，去除孔內液體，用PBST洗滌5次，在每孔中加顯色劑，經H2SO4終止反應后測定孔內OD值。AI=溫和蛋白變性劑洗脫孔內標本OD值/(PBST)洗脫孔內標本OD值。

1.3 觀察指標 (1)感染類型分組標準[9]：基于TP-IgG、TP-IgM抗體檢測對梅毒螺旋體感染患者進行分組：既往感染組(A組)，TP-IgG檢測為陽性而TP-IgM檢測為陰性；繼發/再感染組(B組)，TP-IgG檢測為陽性而TP-IgM檢測為弱陽性；原發感染組(C組)，TP-IgG檢測為陰性而TP-IgM檢測均為陽性/強陽性。(2)TP-IgG AI診斷原發人梅毒感染的靈敏度、特異度：以是否為原發感染者分為兩組，分析不同診斷標準時TP-IgG AI診斷原發人梅毒感染的效能。實驗中分別以TP-IgG AI<20%、<25%、<30%、<35%、<40%、<45%、<50%等標準時診斷的敏感度和特異度。(3)對比原發人梅毒感染及非原發人梅毒感染患者TP-IgG AI值及分布情況。

2 結果

2.1 87例患者感染類型情況 87例梅毒螺旋體感染患者經TP-IgG及TP-IgM檢測結果顯示，既往感染組52例(59.77%)，繼發/再發感染組患者14例(16.09%)，原發感染組21例(24.14%)，見表1。

表1 87例梅毒螺旋體感染患者的類型分析

2.2 TP-IgG AI在原發人梅毒螺旋體感染與非原發感染的效能 基于TP-IgG與TP-IgM檢測的結果，以是否為原發人梅毒螺旋體感染者分為兩組：原發感染組21例，非原發感染組66例。分析顯示當TP-IgG AI值>35%且<40%時Youden指數最高(0.732)，見表2。

表2 檢測TP-IgG AI不同標準時的敏感度、特異度

2.3 原發與非原發人梅毒螺旋體感染組患者TP-IgG AI值及分布情況 非原發感染組患者 AI值顯著高于原發感染組(t=8.105,P<0.05);非原發感染組患者AI值多分布在45%～50%，而原發感染組多集中在<35%，非參數檢驗u=7.635，P<0.05。見表3。

表3 原發感染組與非原發感染組TP-IgG AI值及分布情況

3 討論

梅毒螺旋體感染早期呈潛伏狀態，可無臨床癥狀，隨著病情進展會出現多系統器官損傷，甚至引發各種并發癥，嚴重危害患者的身心健康[10-11]。該癥按照病情進展情況一般分為Ⅰ～Ⅲ期，且隨著分期的進展不僅對自身機能損傷更為嚴重，還會提升傳染性。梅毒螺旋體無法在體外生長，因此梅毒感染的診斷及療效評估需要依靠既往病史、臨床癥狀和實驗室檢查做綜合評估，尤其依賴實驗室血清學指標[12]。梅毒血清學實驗中依據抗原類型分為非特異性抗原、特異性螺旋體抗原兩種類型。TRUST主要用于檢測梅毒血清非特異性抗體，但非特異性抗體的效價會隨著病情進展與梅毒病毒活動性呈平衡態，因此多被應用于療效評估、復發或再感染的血液學指標[13]。梅毒特異性抗體及非特異性抗體同時檢測能夠一定程度排除生物學假陽性顯像[14]。目前，歐美等發達國家梅毒管理指南[15]中多推薦將特異性抗體作為梅毒早期篩查指標，從檢測效率來看特異性抗體的檢出時間較非特異性節約兩周時間，再結合患者的臨床癥狀表現則能夠幫助醫師發現感染，并且迅速響應制定針對性的治療措施。

TP感染后會刺激人體產生特異性IgG、IgM及IgE等抗體，因此通過檢測TP-Ig抗體便可間接判斷[16]；與此同時，鑒別既往感染、繼發感染及原發感染對臨床治療意義重大。TP-IgG是梅毒螺旋體感染后患者最先產生的抗體且能長期存在其體內，已有大量實驗室建立了TP特異性IgG抗體ELISA檢測標準，但多以自己設定的標準為參考值，缺乏統一的診斷標準；再加上TP-IgG在診斷時需要動態監測導致漏診率高，因此無法在梅毒感染篩查中推廣。TP-IgM也是在病毒感染早期產生的抗體，但其在血液中持續時間一般低于16周[17]，基于TP-IgM出現早、存留時間短的特點能夠作為原發人梅毒感染的診斷指標。但僅通過檢測TP-IgM抗體鑒別原發性人梅毒感染存在以下幾個問題：(1)少部分感染患者血液中特異性IgM長期存在[18]。(2)特異性IgM抗體檢測期間很容易被其他病毒感染產生干擾或交叉反應，從而出現假陽性[19-20]。(3)部分潛伏感染、復發感染者血液中也存在少量的被激活的特異性IgM抗體。TP病毒感染早期機體產生的特異性IgG抗體親和力較低，經幾周發育親和力不斷增加，因此TP-IgG AI鑒別診斷原發TP感染成為研究的熱點。

本研究依據TP-IgG、TP-IgM聯合檢測對87例患者的類型進行區分，結果顯示既往感染占比59.77%，繼發/再發感染占比為16.09%，而原發感染占比為24.14%。觀察發現當AI值<40%時原發TP與非原發TP的鑒別診斷Youden指數最高為0.732；此外，發現原發TP組患者AI值明顯低于非原發感染組(P<0.05)。觀察AI值分布情況發現，原發TP組AI值多集中在<35%的范圍，而非原發TP組AI值集中在45%～50%區間，由此說明TP-IgG AI能夠一定程度鑒別診斷原發TP感染。

綜上所述，TP-IgG AI診斷原發人梅毒感染具有一定價值，本研究的不足有兩個方面：首先，納入樣本量較小，可能造成實驗結果偏倚；其次，未依據病情程度(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級)來觀察TP-IgG AI的差異，希望在以后盡量開展大樣本、多中心臨床研究，以獲得更精確的數據為人梅毒感染的診斷治療提供參考。