乙型肝炎性原發性肝癌患者乙肝病毒DNA載量與免疫功能的關系

王 丹

江蘇省鹽城市第二人民醫院中西醫結合肝病科 224000

原發性肝癌在臨床上十分常見，惡性程度較高，危及患者生命[1]。該病病因主要為乙型肝炎，乙型肝炎發病率極高，且發病較為隱匿，重視度不足，為原發性肝癌發病率居高不下的重要性原因。報道顯示，原發性肝癌發病期間腫瘤細胞會誘導免疫抑制，對Treg進行上調，腫瘤免疫逃逸，影響預后[2]。有研究發現，乙肝病毒DNA載量在評估乙型肝炎原發性肝癌疾病的發展中具有重要意義，且乙型肝炎原發性肝癌患者可能會誘導甚至加重細胞免疫功能紊亂，從而促使腫瘤細胞生長、轉移，影響預后[3]。但目前，臨床關于乙型肝炎性原發性肝癌患者乙肝病毒DNA載量與免疫功能的關系報道較少，且不深入。基于此，本文選擇我院收治的乙型肝炎原發性肝癌患者與健康體檢者進行對比分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月—2022年2月我院收治的乙型肝炎性原發性肝癌患者60例(觀察組)，取同期健康體檢人員60例(對照組)，對照組：男33例、女27例，年齡30～77歲，平均年齡(53.50±9.21)歲，體質量指數(BMI)18～23，平均BMI 20.50±1.12；觀察組：男35例、女25例，年齡32～77歲，平均年齡(54.50±9.25)歲，BMI 19～22，平均BMI 20.50±1.10；兩組患者臨床資料具有同質性(P>0.05)。診斷標準：依據《肝病診療指南》[4]，經病理檢查確診為乙型肝炎性原發性肝癌。納入標準：符合上述診斷標準者；年齡30～77歲；已簽署同意書。排除標準：肝轉移癌、其他惡性腫瘤者；合并心、腦、血管疾病；合并局部感染/全身性感染者；近期使用免疫調節劑者；免疫功能障礙者；臨床資料不完整；依從性不佳者。

1.2 方法 獲得受試者知情同意情況下，保證無菌抽取2ml的EDTA抗凝血，混勻吸取100μl全血，使其混合于CD3+、CD4+、CD8+檢測試劑中，于37℃避光環境下，孵育15min。孵育后依次加入2ml溶血素，再次混勻、孵育，待液面清亮后應用1ml/管BD鞘液，以1 500r/min轉速持續離心處理2遍，時間5min內，以400μl BD鞘液重懸細胞。采用流式細胞儀(廠家：美國Becton Dicknson，型號：FACSCalibur)，對兩組研究對象CD3+、CD4+、CD8+T細胞亞群水平、調節性T細胞(Treg)含量進行檢測，并計算CD4/CD8比值。以熒光定量PCR法，對兩組研究對象的乙肝病毒DNA載量進行測定、對比。測定兩組受試對象TNM分期情況。

2 結果

2.1 兩組T淋巴細胞亞群及Treg細胞含量對比 與對照組比較，觀察組CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值明顯更低，CD8+%水平、Treg細胞含量明顯更高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組T淋巴細胞亞群及Treg細胞含量對比

2.2 不同TNM分期患者乙肝病毒DNA載量、T細胞亞群免疫功能分析 60例乙型肝炎性原發性肝癌患者中TNM分期為Ⅱ期者28例、Ⅲ期者32例。相較于TNM分期為Ⅱ期的患者，Ⅲ期患者的乙肝病毒載量明顯更高，CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值更低，CD8+%、Treg細胞含量明顯更高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同TNM分期患者乙肝病毒DNA載量、T細胞亞群免疫功能分析

2.3 乙肝病毒DNA載量與T細胞亞群免疫功能相關性分析 經Spearman相關性分析，乙肝病毒DNA載量與CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值呈負相關關系(r=-0.789、-0.856、-0.812，P<0.05)，與CD8+%、Treg細胞呈正相關關系(r=0.889、0.882，P<0.05)。見表3。

3 討論

近年來，原發性肝癌疾病發病率呈逐漸上升趨勢，該病的發生多與肝硬化、病毒性肝炎、化學致癌物質等有關，患者常見肝區疼痛、消瘦、食欲減退、全身及消化道癥狀、肝大等，嚴重威脅患者生命安全[5]。報道認為，原發性肝癌多是由于感染乙肝病毒后，若長期處于慢性肝炎的狀態，則極易導致肝硬化，造成肝癌[6]。現階段，乙型肝炎已經發展為一個世界性的公共衛生問題，且該疾病的發病率一直居高不下，大多數的情況下，乙型肝炎病毒并不會損害肝細胞，多經由肝表面乙型肝炎病毒行免疫應答，肝臟長時間為慢性炎癥的狀態。近年來，報道指出乙肝病毒患者的DNA載量與其術后康復效果具有直接關系，且與疾病進展、TNM分期具有一定相關性[7]。為進一步探討乙型肝炎性原發性肝癌患者乙肝病毒DNA載量與免疫功能的關系，為臨床診斷及治療此病提供可靠的依據，本文選擇我院乙型肝炎性原發性肝癌患者與健康體檢者作為探討對象，進行對比分析。

本文結果表明，與對照組比較，觀察組CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值明顯更低，CD8+%、Treg細胞含量明顯更高。李富[8]在相關研究中發現，與對照組比較，觀察組患者CD4+%明顯更低，CD8+%、Treg細胞含量明顯更高，與本文結果具有一致性。相較于健康群體，乙型肝炎性原發性肝癌患者CD3+%、CD4+%、CD8+%、CD4/CD8比值等T細胞亞群、Treg細胞具有明顯的變化。分析原因可能為，肝癌微環境下的機體免疫狀態與肝癌的發生及發展具有直接關系，免疫相關細胞、細胞因子在肝癌發展的整個過程中具有重要作用，對于肝癌患者具有不良的影響。

CD3+是一種成熟的T細胞共同分化抗原，表達于所有成熟的T細胞表面。基于表面分化抗原的不同，可以分為CD4+、CD8+兩大種類，通過此兩大種類細胞亞群的表達量，有助于反映患者的機體免疫情況。其中CD4+細胞亞群于免疫系統中具有輔助調節的作用，CD8+會誘導形成CTL，CTL結合于特異性靶抗原后，會釋放穿孔素，破壞、誘導肝細胞凋亡，最終可發揮抗腫瘤及抗病毒的作用。Treg為一種免疫抑制T細胞，可分泌多種細胞因子，抑制細胞毒性T淋巴細胞的成熟，從而抑制機體對腫瘤細胞的殺傷作用。研究結果進一步提示，若乙肝患者感染HBV，淋巴細胞亞群的免疫功能會發生不同程度的受損情況，主要是由于乙肝病毒可經由自身樹突狀細胞的成熟致使乙肝病毒特異性T淋巴細胞生存明顯減少，從而導致免疫功能顯著降低。

許怡等[9]報道顯示，乙肝患者病情進展為肝癌后，CD3+、CD4+T淋巴細胞的表達量會顯著降低，提示乙肝肝癌患者細胞功能受損越嚴重，腫瘤細胞更易發生免疫逃逸，引發肝癌。本文結果顯示，相較于TNM分期為Ⅱ期的患者，Ⅲ期患者的CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值更低，CD8+%水平、Treg細胞明顯更高。這與許怡等報道具有一致性。但本文研究還發現，與Ⅱ期患者比較，Ⅲ期患者乙肝病毒DNA載量明顯更高(P<0.05)。數據表明，隨著患者病情的進一步進展，淋巴細胞免疫功能更易受損，TNM分期越高，乙肝病毒DNA載量亦越高。原因可能為，乙型肝炎性原發性肝癌發生發展期間，會產生大量的免疫抑制因子，此因子在降低外周血中CD3+、CD4+細胞含量方面具有重要作用，使CD8+細胞、Treg細胞含量明顯提高，損傷T淋巴細胞免疫功能。由此可見，乙肝病毒DNA載量增高可作為患者預后不良的有效預測因素[10]。

綜上所述，乙型肝炎性原發性肝癌患者乙肝病毒DNA含量與CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值呈負相關，與CD8+%、Treg細胞呈正相關，且TNM分期越高，乙肝病毒DNA載量越高，在對該病進行診斷及治療中應重點檢測其T細胞亞群免疫功能指標，從而控制肝癌的進展，延長患者生存期。