結直腸癌患者HOXA9、FGFR1基因表達情況及臨床意義研究

鄭華雨

河南省滑縣人民醫院病理科 456400

結直腸癌(CRC)是我國發病率第2位的常見惡性腫瘤，多見于中老年群體，近年來我國CRC發病率逐年上升，且出現年輕化趨勢[1-2]。目前CRC患病機制尚未完全明確，研究顯示，多種癌基因、抑癌基因共同參與調控其發生發展[3]。同源盒A9(HOXA9)是HOX基因A簇中的成員之一，有證據表明其在結腸癌病灶內表達明顯升高，可能促進結腸癌惡性轉變過程[4]。成纖維細胞生長因子受體1(FGFR1)是一類具有自身磷酸化活性的受體酪氨酸激酶，在多種惡性腫瘤組織中呈高表達[5]，但其在CRC中的作用機制尚未明確。基于此，本文探討HOXA9、FGFR1水平變化與CRC患者臨床分期的相關性。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 經我院倫理委員會審批通過，選取2017年8月—2018年8月我院110例CRC患者，其中男62例，女48例；年齡47～81歲，平均年齡(56.73±7.54)歲；臨床分期(TNM分期)：Ⅰ期21例，Ⅱ期28例，Ⅲ期41例，Ⅳ期20例；腫瘤類型：腺癌102例，鱗腺癌8例；分化程度：高分化18例，中分化34例，低分化58例。CRC臨床分期、腫瘤類型、分化程度均參照《中國結直腸癌診療規范(2017年版)》[6]判定。1.2 選例標準 (1)納入標準：①參照《中國結直腸癌診療規范(2017年版)》[6]診斷為CRC，并經病理診斷確診；②首次檢出；③未接受相關治療；④患者知曉本研究，已簽署同意書。(2)排除標準：①合并其他原發惡性腫瘤者；②自身免疫性疾病患者；③血液系統疾病患者；④具有明顯炎癥細胞浸潤癌旁組織者。

1.3 方法 所有研究對象均行手術或組織活檢采集癌組織標本及癌旁(距病灶邊緣>5cm，且病理結果顯示無癌細胞)正常組織標本，取組織標本，采用Trizol溶液(購自上海名勁生物科技有限公司)提取組織總RNA，采用反轉錄試劑盒(購自賽默飛世爾科技)進行反轉錄，合成cDNA，通過實時熒光定量PCR(qRT-PCR)法檢測癌組織、癌旁正常組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達情況，qRT-PCR試劑盒購自北京華夏遠洋科技有限公司，引物設計：HOXA9 mRNA上游引物5’-TGTCCCTGACTGACTATGCTT-3’，下游引物5’-TGCTCGGTCTTTGTTGATTTT-3’；FGFR1 mRNA上游引物5’-GGCTGTATGAAAAGGGTGGGAATG-3’，下游引物5’-GGTGCGTCGTGAGGTCTGG-3’；以GAPDH為內參基，上游引物5’-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3’，下游引物5’-GGAACGCTTCACGAATTTG-3’。因引物均由上海生工生物工程股份有限公司合成。反應條件：95℃10min；(95℃15s、60℃30 s、72℃30s)×40個循環。應用公式2-ΔΔct計算HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA相對表達水平。

1.4 觀察指標 (1)癌組織、癌旁正常組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達情況。(2)不同臨床分期CRC患者癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達情況。(3)分析HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達與CRC患者臨床分期的相關性。(4)不同預后CRC患者癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達情況。

1.5 統計學方法 數據處理采用SPSS22.0軟件，計量資料以均數±標準差描述，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗。相關性分析采用Spearman相關系數模型。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 癌組織、癌旁正常組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達比較 CRC患者癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達量均較癌旁正常組織高(P<0.05)。見表1。

表1 癌組織、癌旁正常組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達比較

2.2 不同臨床分期癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達比較 隨著CRC患者臨床分期升高，癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達量逐漸升高(P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床分期癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達比較

2.3 HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達與臨床分期的相關性 通過Spearman相關系數模型驗證，發現CRC患者癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達量與臨床分期間存在正相關關系(r=0.601、0.574，P均<0.05)。

2.4 不同預后癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達比較 110例CRC患者隨訪過程中失訪3例(家庭住址變遷、聯系方式變更)，完成隨訪的107例患者中，死亡21例，生存86例，生存率為80.37%(86/107)。死亡患者入院時癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達量均較生存患者高(P<0.05)。見表3。

表3 不同預后癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達比較

3 討論

CRC患病早期癥狀不明顯，多數患者確診時已進展至中晚期，近年來CRC在臨床診斷及治療上已取得新突破，但患者遠期生存率仍較低[7]。探尋新的分子標記物作為CRC的早期診斷、治療及預后評估的參考依據，一直是臨床研究的重點。

研究顯示，HOXA是人體組織器官正常發育必需的蛋白，其基因表達異常可引發多種疾病，也是導致惡性腫瘤發生發展的因素之一[8]。HOXA9是HOXA家族的主要成員，HOXA9蛋白在膀胱癌組織中的表達上調，與臨床特征及預后關系密切，可為臨床治療提供新思路[9]。本文結果顯示，CRC患者癌組織中HOXA9 mRNA表達量明顯高于癌旁正常組織，且與CRC患者臨床分期呈正相關，說明HOXA9 mRNA在CRC的發生發展過程中可能發揮正向調節作用，推測HOXA9 mRNA表達升高可能促進腫瘤細胞的增殖。新近研究發現，CRC癌組織中HOXA9 mRNA與FGFR1 mRNA表達量呈正相關，兩者可能共同促進CRC的發展[10]。本文結果顯示，CRC患者癌組織中FGFR1 mRNA表達量均高于癌旁正常組織，與上述研究結果一致，且FGFR1 mRNA表達量與患者臨床分期間存在正相關關系，提示FGFR1 mRNA在CRC發生發展過程中也可能發揮促癌作用。FGFR1被證實是一種血管源性生長因子受體，與血管形成及維持血管通透性密切相關，其基因表達增加可通過上調FGFR1蛋白水平促進腫瘤新血管生成，為腫瘤的發生發展提供有利條件[11]。相關研究顯示，敲減FGFR1基因表達可通過影響PI3K/AKT信號通路抑制嬰幼兒血管瘤內皮細胞的活力，并誘導其凋亡，阻礙細胞遷移和侵襲，從而控制腫瘤進展[12]。結合本文結果推測抑制HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達可能作為控制CRC發生發展的新靶點。此外，本文進一步探討了HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達與CRC患者遠期預后的關系，發現預后為死亡患者入院時癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達量明顯高于生存患者，提示兩者表達升高可增加患者病死率，推測早期檢測HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達情況可作為判斷CRC患者預后的生物學指標。

綜上所述，HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA在CRC患者癌組織過表達，其表達量與患者臨床分期及預后密切相關。