THBS-1、PPBP聯(lián)合CTP對缺血性腦卒中的診斷價(jià)值分析*

路 康，吳文鋒，許 倩，常興芳

河北省第八人民醫(yī)院/河北省老年病醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北石家莊 050011

缺血性腦卒中是臨床最為常見的缺血性腦血管疾病，有高發(fā)病率、高致殘率以及高致死率的特點(diǎn)，嚴(yán)重威脅患者的生命安全[1-2]。快速、有效地診斷缺血性腦卒中對患者的治療及預(yù)后有重要意義。臨床診斷缺血性腦卒中主要是根據(jù)患者的臨床特點(diǎn)及影像學(xué)檢查[3-4]。CT灌注成像(CTP)的原理是經(jīng)靜脈注入對比劑后對腦組織進(jìn)行動(dòng)態(tài)CT掃描，獲得的數(shù)據(jù)經(jīng)過處理，就可以得到腦組織的血流灌注狀態(tài)。該方法已被證明具有良好的準(zhǔn)確性，目前廣泛被用于急診診斷早期缺血性腦卒中[5-6]。近年來，蛋白標(biāo)志物的檢測為更準(zhǔn)確地預(yù)防和診斷缺血性腦卒中提供了方法[7-8]。基于此，本研究對血小板反應(yīng)蛋白1(THBS-1)、前血小板堿性蛋白(PPBP)檢測聯(lián)合CTP用于缺血性腦卒中診斷的價(jià)值進(jìn)行探討。

1 資料與方法

1.1一般資料 將本院2020年1月至2021年1月收治的缺血性腦卒中患者136例納入研究作為研究組。另外，選取同期于本院體檢的健康志愿者100例作為對照組。研究組：男75例、女性61例，年齡43～70歲、平均(56.5±10.8)歲。對照組：男56例、女44例，年齡44～68歲、平均(56.1±9.5)歲。所有患者一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有缺血性腦卒中患者均符合中華醫(yī)學(xué)會中對缺血性腦卒中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]；所有患者均通過CT、核磁共振(MRI)等影像學(xué)檢查確診為缺血性腦卒中。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并心、肝、腎等器官功能不全者；(2)有凝血功能障礙者；(3)合并呼吸系統(tǒng)疾病者；(4)依從性差，無法配合研究者。所有納入研究者均對本研究知情同意。本研究經(jīng)本院倫理委員會審批通過。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集 采用3.2%枸櫞酸抗凝采血管抽取納入研究者清晨空腹肘靜脈血標(biāo)本。靜脈血標(biāo)本于4 ℃、4 000 r/min的條件下離心10 min，收集上清液之后在冰上進(jìn)行分裝，隨后于-80 ℃環(huán)境下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2CTP檢查 通過飛利浦Brilliance 64排多層螺旋CT進(jìn)行CTP檢查。患者取仰臥位，行頭顱CT平掃，注射50 mL碘普羅胺(速率為5 mL/s)，延遲2 s后進(jìn)行掃描，設(shè)置掃描層厚：0.625 mm，重建層厚：5 mm，螺距：0.8，視野：200 mm，掃描范圍為垂體窩下緣向顱頂96 mm，掃描線與顱底平行，管電壓：80 kV，管電流：120 mA，單次掃描時(shí)間：1.5 s，循環(huán)時(shí)間為3 s，間隔1.5 s，連續(xù)掃描18期。掃描后將容積數(shù)據(jù)傳輸至工作站通過CTP軟件包進(jìn)行分析處理，繪制時(shí)間-密度曲線，獲取平均通過時(shí)間(MTT)、達(dá)峰時(shí)間(TTP)、腦血容量(CBV)、腦血流(CBF)。

1.2.3THBS-1、PPBP檢測 從血漿中提取蛋白之后，采用Western blot對THBS-1、PPBP進(jìn)行檢測。每孔添加20 μg從血漿中提取的蛋白，加入蛋白緩沖液，隨后進(jìn)行10 min電泳，然后將電轉(zhuǎn)膜浸泡在10%的牛奶中，在常溫環(huán)境下封存90 min。加入稀釋后的一抗孵育1 d，次日取出之后使用TBST沖洗，加入二抗放置60 min，然后開始清洗與顯色。采用β-actin作為內(nèi)參，對THBS-1、PPBP蛋白的相對表達(dá)水平進(jìn)行檢測。

2 結(jié) 果

2.1兩組間CTP參數(shù)比較 與對照組相比，研究組MTT、TTP增加，CBV、CBF減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組CTP參數(shù)的比較

2.2不同嚴(yán)重程度缺血性腦卒中患者的CTP參數(shù)比較 與輕度組比較，中、重度組缺血性腦卒患者M(jìn)TT、TTP增加，CBV、CBF減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與中度組相比，重度組MTT、TTP增加，CBV、CBF減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同嚴(yán)重程度缺血性腦卒CTP參數(shù)對比

2.3兩組間THBS-1、PPBP蛋白表達(dá)水平比較 與對照組比較，研究組THBS-1、PPBP蛋白相對表達(dá)水平升高(P<0.05)，見表3、圖1。

表3 兩組THBS-1、PPBP蛋白相對表達(dá)水平比較

注：A為對照組；B為研究組。

2.4不同嚴(yán)重程度缺血性腦卒患者THBS-1、PPBP蛋白表達(dá)水平比較 與輕度組相比，中、重度組THBS-1、PPBP蛋白相對表達(dá)水平增加(P<0.05)；與中度組相比，重度組THBS-1、PPB相對表達(dá)水平增加(P<0.05)。見表4。

表4 不同嚴(yán)重程度缺血性腦卒THBS-1、PPBP蛋白相對表達(dá)水平比較

2.5CTP參數(shù)及THBS-1、PPBP蛋白表達(dá)水平與缺血性腦卒中病情嚴(yán)重程度的關(guān)系 MTT、TTP、THBS-1、PPBP均與缺血性腦卒中病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)(r>0，P<0.05)，而CBV、CBF與缺血性腦卒中病情嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)(r<0，P<0.05)，見表5。

表5 MTT、TTP、CBV、CBF、THBS-1、PPBP與缺血性腦卒中病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性

2.6CTP參數(shù)與THBS-1、PPBP蛋白表達(dá)水平的相關(guān)性 MTT、TTP與THBS-1、PPB均呈正相關(guān)(r>0，P<0.05)，CBV、CBF與PCBV、CBF均呈負(fù)相關(guān)(r<0，P<0.05)，見表6。

表6 CTP參數(shù)與THBS-1、PPBP蛋白表達(dá)水平的相關(guān)性(r)

2.7THBS-1、PPBP、MTT、TTP、CBV、CBF聯(lián)合用于缺血性腦卒診斷的ROC曲線分析 與THBS-1、PPBP、MTT、TTP、CBV、CBF單項(xiàng)診斷相比，六項(xiàng)聯(lián)合對缺血性腦卒中的診斷價(jià)值更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表7、圖2。

表7 THBS-1、PPBP、MTT、TTP、CBV、CBF聯(lián)合對缺血性腦卒中的診斷價(jià)值分析

圖2 THBS-1、PPBP、MTT、TTP、CBV、CBF單獨(dú)和聯(lián)合用于缺血性腦卒中診斷的ROC曲線

3 討 論

缺血性腦卒中的發(fā)生嚴(yán)重威脅患者身心健康及生命安全，給患者家庭帶來經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[10-11]。隨著人口老齡化的加快，缺血性腦卒中的危害越來越明顯。因此，研究缺血性腦卒中的防治有重大價(jià)值[12]。

隨著醫(yī)學(xué)影像技術(shù)的進(jìn)步，CTP、CT血管造影、CT平掃等手段在腦卒中診斷中的應(yīng)用越來越廣泛[13]。CTP可對腦卒中患者腦灌注狀態(tài)、梗死面積進(jìn)行檢查，與MRI檢查結(jié)果具有較高的一致性。有研究顯示，缺血性腦卒中發(fā)生后，患者腦血流量會明顯下降，CBV、CBF水平隨之降低，進(jìn)而導(dǎo)致MTT、TTP延長，并且與缺血性腦卒中嚴(yán)重程度有關(guān)[14-16]。造成參數(shù)變化的可能原因：早期主干供血?jiǎng)用}出現(xiàn)栓塞時(shí)，代償機(jī)制開始發(fā)揮作用，側(cè)支循環(huán)開始供給，由于側(cè)支循環(huán)代償血流路線較長,導(dǎo)致血流到達(dá)組織的時(shí)間延長[17-18]。CTP可在短時(shí)間內(nèi)完成對全腦血管、灌注情況的評價(jià)[19]。本研究結(jié)果顯示：缺血性腦卒中患者CBV、CBF減少，MTT、TTP增加，隨著病情嚴(yán)重程度的增加，CBV、CBF減少，MTT、TTP增加，表明缺血性腦卒中患者CTP參數(shù)存在異常，而且與病情嚴(yán)重程度相關(guān)，提示CBV、CBF、MTT、TTP可作為缺血性腦卒中診斷的有效參數(shù)。

THBS-1作為一種多功能細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，廣泛表達(dá)于人體組織細(xì)胞。THBS-1能夠與特定結(jié)構(gòu)域的多個(gè)不同蛋白多糖、細(xì)胞表面受體相互作用，從而發(fā)揮出不同的生物學(xué)效應(yīng)。THBS-1作為一種有效的血管生成調(diào)節(jié)因子，能夠抑制內(nèi)皮細(xì)胞的遷移及細(xì)胞外基質(zhì)中血管內(nèi)皮生長因子的釋放。有研究發(fā)現(xiàn)，THBS-1參與了血小板的聚集以及受限血管處血栓生成[20]。趙新玲等[10]報(bào)道，急性缺血性腦卒中患者THBS-1表達(dá)異常升高，對THBS-1進(jìn)行檢測有助于對急性缺血性腦卒中進(jìn)行診斷及預(yù)后評估，本研究的結(jié)果與該報(bào)道一致。

PPBP屬于CXC趨化因子家族的血小板衍生生長因子，能夠調(diào)節(jié)N-甲基-D-天冬氨酸受體的功能，從而減輕大腦中動(dòng)脈梗死后的腦損傷。PPBP還與多種疾病的病理生理機(jī)制相關(guān)，如誘導(dǎo)炎癥應(yīng)答、促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成[21-22]。本研究結(jié)果中，缺血性腦卒中患者PPBP表達(dá)異常升高，與缺血性腦卒中的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，對其進(jìn)行檢測有助于對缺血性腦卒中進(jìn)行準(zhǔn)確診斷。

雖然本研究結(jié)果表明THBS-1、PPBP蛋白表達(dá)水平與CTP參數(shù)相關(guān)，可用于缺血性腦卒中的診斷，但本研究納入研究的樣本量較少，有一定的局限性，在數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)時(shí)可能存在一定的偏倚，因此本研究的結(jié)果還需后續(xù)研究進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，CTP、THBS-1、PPBP有助于缺血性腦卒中的診斷，CTP參數(shù)與THBS-1、PPBP蛋白表達(dá)水平相關(guān)，可用于患者疾病情況的評估，值得臨床推廣。