血清CKLF-1、COX-2水平對(duì)支氣管哮喘患兒臨床分型的價(jià)值*

谷志勇，劉一波

1.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院兒科，四川南充 637000；2.南充市第四人民醫(yī)院兒科,四川南充 637000

小兒支氣管哮喘是由嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)、T淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞等多種細(xì)胞和細(xì)胞組分一起參與的一種慢性呼吸道炎癥反應(yīng)疾病，可引起患兒反復(fù)發(fā)作性的喘息、咳嗽、氣促和胸悶等癥狀，以夜間和清晨比較嚴(yán)重[1]。多數(shù)支氣管哮喘患兒可經(jīng)過(guò)治療緩解或者自行緩解，而在臨床治療中，及時(shí)明確疾病臨床分型，并根據(jù)患兒具體分型制訂出最佳的治療方案以進(jìn)行對(duì)癥治療，有助于提高臨床治療效果[2]；反之，可能會(huì)出現(xiàn)治療方案與疾病類(lèi)型并不十分符合的情況，致使病情延誤，影響療效。因此，在小兒支氣管哮喘治療時(shí)進(jìn)行準(zhǔn)確地診斷和治療對(duì)減輕疾病痛苦，提高患兒生活質(zhì)量十分重要。有學(xué)者提出將小兒支氣管哮喘哮喘分為2個(gè)亞型，分別是以部分呼吸道EOS炎癥反應(yīng)為主的嗜酸細(xì)胞性哮喘(EA)和以部分呼吸道非EOS炎癥反應(yīng)為主的非嗜酸細(xì)胞性哮喘(NEA)[3]。對(duì)于年幼患兒來(lái)說(shuō)，誘導(dǎo)痰液不易操作，還易出現(xiàn)咽痛、咽干、惡心、嘔吐等不良反應(yīng)，而血清學(xué)指標(biāo)檢查方便、安全且快速。血清趨化素樣因子-1(CKLF-1)和環(huán)氧化酶-2(COX-2)是引起小兒支氣管哮喘的重要細(xì)胞因子，在機(jī)體炎癥反應(yīng)程度和免疫調(diào)節(jié)過(guò)程中發(fā)揮重要作用，根據(jù)其血清變化趨勢(shì)可以預(yù)測(cè)疾病的發(fā)展程度[4-5]。但關(guān)于血清CKLF-1、COX-2水平是否對(duì)小兒支氣管哮喘臨床EA、NEA分型具有評(píng)估價(jià)值，國(guó)內(nèi)目前尚缺乏相關(guān)研究。鑒于此，本研究通過(guò)探討血清CKLF-1、COX-2水平對(duì)小兒支氣管哮喘患兒臨床分型的評(píng)估價(jià)值，旨在為臨床鑒別診斷與治療提供理論依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2019年9月至2020年9月在川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院(以下簡(jiǎn)稱(chēng)本院)兒科就診的102例支氣管哮喘患兒作為疾病組，其中男52例，女50例；年齡1.5～13.0歲，平均年齡(5.37±1.11)歲；病程0.5～6.0年，平均(3.19±0.62)年，所有患兒均為急性發(fā)作期。同時(shí)選取健康體檢兒童90例作為健康組，男46例，女44例；年齡1.4～13.0歲，平均年齡(5.04±1.02)歲。兩組兒童的性別、年齡比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究已通過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患兒均符合《支氣管哮喘的臨床表現(xiàn)，診斷及鑒別診斷》[6]中支氣管哮喘的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且均屬于急性發(fā)作期；(2)健康組均經(jīng)體檢確認(rèn)健康；(3)兩組患兒均在14歲以下；(4)誘導(dǎo)痰細(xì)菌培養(yǎng)為陰性；(5)兩組研究對(duì)象家長(zhǎng)均對(duì)本研究知情并簽署同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)危重病例；(2)易過(guò)敏體質(zhì)；(3)存在其他精神疾?。?4)有家族哮喘病史；(5)吸煙或被動(dòng)吸煙；(6)近期有呼吸道感染病史或服用過(guò)糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物。EA和NEA分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)：參考文獻(xiàn)[7]，以痰液EOS%≥2%作為痰液EOS增高的判斷標(biāo)準(zhǔn)，痰液EOS≥2%劃分為EA，痰液EOS<2%劃分為NEA。

1.2方法

1.2.1血清CKLF-1、COX-2水平檢測(cè) 疾病組在治療前、健康組在體檢當(dāng)天均于早晨空腹采集外周靜脈血4 mL置于無(wú)菌EDTA-K2抗凝采血管中，在4 h內(nèi)將血液標(biāo)本放入TD4K-Z離心機(jī)(上海舜制儀器制造有限公司) 以4 000 r/min離心5 min分離血清，取上清液統(tǒng)一置于-80 ℃冰箱中保存待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)疾病組和健康組的血清CKLF-1、COX-2水平，使用SpectraMax iD5-多功能酶標(biāo)檢測(cè)儀[美谷分子儀器(上海)有限公司]設(shè)置雙孔測(cè)定，于450 nm波長(zhǎng)位置處測(cè)定吸光度(A)值。CKLF-1試劑盒由上海江萊生物科技有限公司生產(chǎn)，COX-2試劑盒由上海雅吉生物科技有限公司生產(chǎn)，所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.2.2細(xì)胞學(xué)分析與分型 誘導(dǎo)痰液并在2 h內(nèi)處理完成，涂片染色后，在光學(xué)顯微鏡(上海豫光儀器有限公司)下觀察，進(jìn)行炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類(lèi)，主要包括EOS、中性粒細(xì)胞(NEU)、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞、單核細(xì)胞等，以百分比計(jì)算。根據(jù)結(jié)果進(jìn)行EA和NEA分類(lèi)，將疾病組患兒進(jìn)一步分為EA組和NEA組。

1.2.3收集不同亞型患兒一般資料 收集患兒年齡、性別及病程等資料，并用全自動(dòng)肺功能測(cè)試儀檢測(cè)肺功能，計(jì)算肺功能1秒率。

1.3觀察指標(biāo) (1)對(duì)比疾病組、健康組血清CKLF-1、COX-2水平。(2)對(duì)比疾病組EA型與NEA型一般資料和血清CKLF-1、COX-2水平。(3)血清CKLF-1、COX-2水平對(duì)支氣管哮喘患兒臨床分型的評(píng)估價(jià)值：記錄最佳臨界值(cut-off值)、靈敏度、特異度、曲線下面積(AUC)和95%置信區(qū)間(95%CI)。

2 結(jié) 果

2.1疾病組、健康組血清CKLF-1、COX-2水平比較 疾病組血清CKLF-1、COX-2水平明顯高于健康組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 疾病組、健康組血清CKLF-1、COX-2水平

2.2疾病組EA型與NEA型一般資料及檢測(cè)指標(biāo)水平比較 結(jié)果顯示102例支氣管哮喘患兒中EA型為52例，占總數(shù)的50.98%，NEA型為50例，占總數(shù)的49.02%；而EA型的年齡、性別、病程、肺功能1秒率與NEA型比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；EA型的血清CKLF-1、COX-2水平均高于NEA型(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 疾病組EA型與NEA型一般資料及檢測(cè)指標(biāo)水平比較或n(%)]

2.3血清CKLF-1、COX-2水平對(duì)支氣管哮喘患兒EA型的診斷價(jià)值 血清CKLF-1、COX-2水平聯(lián)合用于支氣管哮喘EA型評(píng)估的靈敏度均高于兩指標(biāo)單獨(dú)使用(χ2=6.310，P=0.012；χ2=5.283，P=0.022)，AUC也均高于兩指標(biāo)單獨(dú)使用(Z=2.297，P=0.022；Z=2.661，P=0.008)，特異度均與兩指標(biāo)單獨(dú)使用差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.709，P=0.400；χ2=0.154，P=0.695)，見(jiàn)圖1、表3。

表3 各指標(biāo)對(duì)支氣管哮喘患兒EA型診斷的效能

圖1 血清CKLF-1、COX-2水平用于EA型診斷的ROC曲線

3 討 論

氣道慢性炎癥是引起小兒支氣管哮喘反復(fù)發(fā)作的原因，主要由多種炎癥細(xì)胞在氣道內(nèi)浸潤(rùn)、聚集，分泌出多種炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子，炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子相互作用使氣道炎癥持續(xù)存在[8]。在機(jī)體碰到誘發(fā)因素時(shí)，這些細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)可以引起支氣管平滑肌收縮、氣道黏膜水腫，形成氣道阻塞性病變，因此小兒支氣管哮喘防治的重點(diǎn)在于控制氣道炎癥[9-10]。目前可根據(jù)臨床癥狀、肺功能檢查來(lái)判斷疾病發(fā)展程度，間接反映氣道炎癥情況，而直接體現(xiàn)炎癥存在的細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)成為目前臨床分型鑒別診斷的研究重點(diǎn)[11-12]。血清檢查高效省時(shí)、操作簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確度和靈敏度高，是目前醫(yī)院最常用的一種檢測(cè)方法。

本研究結(jié)果顯示，疾病組血清CKLF-1、COX-2水平明顯高于健康組，提示血清CKLF-1、COX-2水平可能與支氣管哮喘發(fā)病相關(guān)。CKLF-1是一種新的具有廣譜趨化效應(yīng)的細(xì)胞因子，參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖分化和免疫調(diào)節(jié)[13]。有研究表明，CKLF-1在支氣管哮喘發(fā)作過(guò)程中發(fā)揮重要作用，其在小鼠體內(nèi)高表達(dá)可以引起肺組織發(fā)生明顯的炎癥反應(yīng)，主要表現(xiàn)為小鼠肺組織內(nèi)炎癥細(xì)胞大量聚集，肺泡隔充血水腫，膠原纖維大量沉積，與支氣管哮喘的病理變化十分相似[14]。另有研究報(bào)道，兒童支氣管哮喘血清CKLF-1水平經(jīng)積極治療后明顯降低[15]，表明CKLF-1水平變化與支氣管哮喘病情進(jìn)展具有一定的關(guān)系，可能參與了疾病的發(fā)生。COX-2是前列腺素(PGI)合成過(guò)程中的一個(gè)重要誘導(dǎo)性限速酶，可將花生四烯酸代謝成各種PGI產(chǎn)物，引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生各種病理變化，造成氣道痙攣和氣道高反應(yīng)等，從而誘發(fā)哮喘[16]。支氣管哮喘患兒氣道黏膜中存在EOS等多種炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，激活后產(chǎn)生COX-2，COX-2在炎癥反應(yīng)中被大量誘導(dǎo)和表達(dá)，又可誘導(dǎo)氣道黏膜中EOS等炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)并分泌PGI等其他炎癥介質(zhì)，從而導(dǎo)致氣道炎癥反應(yīng)加強(qiáng)，誘發(fā)或加重支氣管哮喘[17]。

根據(jù)痰液指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果將疾病組分為EA型和NEA型兩類(lèi)，結(jié)果顯示EA型占50.98%，NEA型占49.02%，與國(guó)外EA型占哮喘54%的研究數(shù)據(jù)相近[18]。EA型的年齡、性別、病程、肺功能1秒率與NEA型比較具有可比性，而EA型的血清CKLF-1、COX-2水平均高于NEA型，提示血清CKLF-1、COX-2水平可能與支氣管哮喘臨床EA型存在一定的關(guān)系。本研究通過(guò)ROC曲線進(jìn)一步分析顯示血清CKLF-1、COX-2水平對(duì)支氣管哮喘臨床EA型、NEA型均具有一定的評(píng)估價(jià)值，但聯(lián)合評(píng)估EA型的靈敏度和AUC均高于單獨(dú)評(píng)估，而特異度與單獨(dú)評(píng)估相近，表明血清CKLF-1、COX-2水平聯(lián)合檢測(cè)對(duì)EA型的評(píng)估效能更高。EOS是支氣管哮喘發(fā)作過(guò)程中起主要作用的炎癥細(xì)胞，不僅可以分泌血小板活化因子和白三烯等炎癥因子，引起氣道黏膜水腫、支氣管平滑肌痙攣等炎癥反應(yīng)，并且釋放的EOS神經(jīng)毒素和EOS過(guò)氧化酶可以對(duì)上皮細(xì)胞產(chǎn)生明顯的細(xì)胞毒作用，引起氣道上皮細(xì)胞壞死并脫落，支氣管變形，進(jìn)而發(fā)生氣道高反應(yīng)性[19-20]。而EOS引起的炎癥反應(yīng)可導(dǎo)致血清CKLF-1水平升高，且EOS經(jīng)過(guò)浸潤(rùn)、激活后可產(chǎn)生大量COX-2。因此，臨床上通過(guò)檢測(cè)血清CKLF-1、COX-2水平可幫助了解支氣管哮喘患兒氣道炎癥反應(yīng)情況，進(jìn)一步判斷疾病臨床分型，為治療方案的制訂提供參考依據(jù)。

綜上所述，血清CKLF-1、COX-2水平均是評(píng)估支氣管哮喘患兒臨床分型的有效指標(biāo)，但二者聯(lián)合評(píng)估效能更高。