cHNSCC患者PD-L1、MMP1表達分析及與術后復發(fā)的關系*

靳書濱，劉曉燕，耿文華，焦建軍

邯鄲市中心醫(yī)院口腔頜面外科，河北邯鄲 056001

頭頸部皮膚鱗狀細胞癌(cHNSCC)發(fā)病率居惡性腫瘤第6位，有報道指出，2000年至2016年cHNSCC各個部位發(fā)病率均有所增加[1]。手術是治療cHNSCC患者的主要方案，但部分患者由于術后復發(fā)而導致治療失敗，生存率降低。目前臨床主要通過手術切緣病理性檢查評估cHNSCC患者術后復發(fā)風險，具有一定價值，但cHNSCC病理機制復雜，仍有部分患者手術切緣病理檢查陰性卻術后復發(fā)，尋找新的客觀指標評估患者術后復發(fā)風險具有重要價值。程序性細胞死亡蛋白配體-1(PD-L1)是近年來靶向免疫治療研究熱點，其免疫抑制作用與腫瘤轉移密切相關[2]，其陽性表達可能為術后復發(fā)的影響因素，但目前相關報道較少。基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP1)具有降解細胞外基質(zhì)作用[3]，可直接影響腫瘤細胞轉移、浸潤、增殖，對腫瘤惡性進展有促進作用，但關于其對術后復發(fā)的影響報道較少。基于此，本研究將本院cHNSCC患者納入研究，分析PD-L1、MMP1表達情況及對術后復發(fā)的影響，以期為臨床提供借鑒，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2020年5月至2021年8月該院收治的cHNSCC患者173例納入研究，男94例、女79例；年齡53～68歲、平均(60.43±3.52)歲。納入標準：符合cHNSCC的診斷標準[4]；首次發(fā)病；為原發(fā)性腫瘤且經(jīng)病理組織活檢確診；預估生存期>6個月；年齡>18歲；行手術治療；術后隨訪資料完整。排除標準：合并嚴重心肺疾病；有放化療史；骨髓造血功能異常；合并全身系統(tǒng)性疾病。

1.2方法

1.2.1PD-L1、MMP1檢測 均以免疫組織化學染色法進行檢測，活檢組織標本經(jīng)乙醇脫水、二甲苯透明、浸蠟處理，所有操作在組織處理機中進行。然后進行石蠟包埋、切片。對制備好的石蠟切片按常規(guī)免疫組織化學染色的步驟進行操作，最后用中性樹膠封片，顯微鏡下進行觀察。判定標準：隨機選取5個背景清晰、染色明確的視野，計算陽性細胞占全部細胞的百分比，若陽性細胞比例超過10%，則表明結果為陽性表達。

1.2.2術后復發(fā)觀察 患者均行cHNSCC根治術，術后根據(jù)患者實際情況決定是否進行靶向治療或放化療，隨訪6個月，以出現(xiàn)術后復發(fā)或遠處轉移為終點事件。

1.3觀察指標 (1)比較cHNSCC患者腫瘤組織與癌旁組織PD-L1、MMP1陽性表達情況。(2)比較不同臨床分期cHNSCC患者PD-L1、MMP1表達情況。(3)比較不同術后復發(fā)情況cHNSCC患者的一般資料，包括性別、年齡、臨床分期、合并癥、腫瘤部位、術后是否放化療、腫瘤浸潤深度及分化程度、淋巴結受累數(shù)目，PD-L1、MMP1陽性表達情況。(4)對cHNSCC患者復發(fā)的影響因素進行分析。(5)PD-L1、MMP1表達用于評估cHNSCC患者術后復發(fā)的價值。

1.4統(tǒng)計學處理 采用SPSS22.0軟件進行數(shù)據(jù)處理。計數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Logistic回歸分析cHNSCC患者術后復發(fā)的影響因素。計算PD-L1、MMP1陽性表達情況用于預測cHNSCC患者術后復發(fā)的靈敏度、特異度。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1cHNSCC患者PD-L1、MMP1陽性表達情況 cHNSCC患者腫瘤組織PD-L1、MMP1陽性表達率高于癌旁組織(P<0.05)，見表1。

表1 cHNSCC患者不同組織PD-L1、MMP1陽性表達情況比較[n(%)]

2.2不同臨床分期cHNSCC患者PD-L1、MMP1陽性表達情況比較 不同臨床分期cHNSCC患者腫瘤組織PD-L1、MMP1陽性表達率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床分期cHNSCC患者腫瘤組織PD-L1、MMP1陽性表達情況比較[n(%)]

2.3不同術后復發(fā)情況的cHNSCC患者臨床病理資料比較 隨訪6個月，173例cHNSCC患者中，術后復發(fā)49例作為復發(fā)組，未復發(fā)124例作為未復發(fā)組。復發(fā)組臨床分期、術后放化療、分化程度及PD-L1和MMP1的陽性表達情況與未復發(fā)組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 不同術后復發(fā)情況cHNSCC患者臨床病理資料比較[n(%)]

2.4cHNSCC患者術后復發(fā)的影響因素分析 將臨床分期、術后放化療、分化程度，PD-L1、MMP1陽性表達情況進行多重共線性檢驗，發(fā)現(xiàn)臨床分期、術后放化療存在多重共線性(VIF>10)，手動移除術后放化療。以cHNSCC患者術后是否復發(fā)為因變量，以臨床分期、分化程度，PD-L1、MMP1陽性表達情況作為自變量，根據(jù)表4進行賦值，以Logistic回歸進行多因素分析，結果顯示，PD-L1、MMP1陽性表達情況是cHNSCC患者術后復發(fā)的危險因素(P<0.05)，見表5。

表4 cHNSCC患者術后復發(fā)影響因素分析賦值方案

表5 cHNSCC患者術后復發(fā)影響因素分析

2.5PD-L1、MMP1表達情況用于評估cHNSCC患者術后復發(fā)的價值 PD-L1陽性表達用于預測cHNSCC患者術后復發(fā)的靈敏度、特異度分別為93.55%、51.02%，MMP1陽性表達用于預測cHNSCC患者術后復發(fā)的靈敏度、特異度分別為94.35%、44.90%，二者聯(lián)合預測cHNSCC患者術后復發(fā)的靈敏度、特異度分別為87.90%、79.59%。

3 討 論

cHNSCC是常見惡性腫瘤，世界范圍內(nèi)每年新增患者約50萬人，嚴重威脅患者健康。目前臨床治療cHNSCC的方案仍以手術切除為主。雖然手術技術發(fā)展迅速，但患者遠期生存率卻未得到明顯提高，其原因主要在于術后的局部復發(fā)。有研究顯示，cHNSCC患者術后復發(fā)率可達17.61%[5]。因此，預防術后復發(fā)對改善患者遠期生存結局有重要價值，而尋找評估術后復發(fā)風險的客觀指標對臨床盡早干預有積極作用。

近年來，程序性細胞死亡蛋白-1(PD-1)抑制劑是腫瘤免疫療法研究的熱點，作為免疫哨點單抗藥物，在應答廣度、深度、持久性方面均具有明顯優(yōu)勢，其主要通過抑制PD-1、PD-L1進行靶向治療，具有較強抗腫瘤效果[6-7]。腫瘤進展時，腫瘤微環(huán)境誘導T細胞高表達并提高PD-1分子活性，腫瘤細胞則可通過傳遞負性調(diào)控信號激活PD-1/PD-L1信號通路，抑制T細胞對腫瘤細胞的殺滅作用，從而促進腫瘤進展[8-9]。因此，以PD-1/PD-L1為靶點的免疫療法治療cHNSCC具有良好效果，而且已在部分臨床研究中得到證實[10-11]。另有研究證實，cHNSCC患者PD-L1 2級染色更有可能發(fā)生腫瘤轉移，而且與局部復發(fā)顯著相關[12-13]。本研究發(fā)現(xiàn)，cHNSCC患者腫瘤組織PD-L1表達陽性率明顯高于癌旁組織且晚期患者PD-L1陽性表達率更高，提示PD-L1與cHNSCC患者預后有關。這與相關研究結果基本一致[14]。本研究結果顯示，術后復發(fā)患者的PD-L1陽性表達率明顯高于未復發(fā)患者，PD-L1陽性表達是cHNSCC患者術后復發(fā)的獨立危險因素，提示其可作為反映cHNSCC患者術后復發(fā)風險的指標。

MMP1是基質(zhì)金屬蛋白酶家族第一個被定性的成員，在多種器官、細胞培養(yǎng)液、組織提取物中均可發(fā)現(xiàn)，有報道指出，MMP1可作為良性腫瘤向惡性進展的標志物[15]。MMP1在cHNSCC、肺癌、卵巢癌、乳腺癌、直腸癌等多種腫瘤細胞中均有表達，具有降解明膠及膠原的作用。相關研究指出，間質(zhì)細胞對促進腫瘤增殖、侵襲、遷移有重要作用，而細胞外基質(zhì)中大量存在的膠原蛋白是角質(zhì)形成細胞遷移的必要條件[16]。細胞外基質(zhì)是細胞與細胞間自分泌調(diào)節(jié)、旁分泌調(diào)節(jié)的緩沖，對細胞生存有直接影響，其水平變化受MMP1影響。MMP1可通過誘導基質(zhì)重塑、血管形成、細胞黏附等作用降解細胞外基質(zhì)，降低細胞外基質(zhì)對惡性腫瘤浸潤、轉移的阻礙，從而促進腫瘤轉移、惡化[17]。陳艷丹等[18]研究指出，通過miR-134靶向MMP1蛋白表達可直接影響喉癌細胞的侵襲、增殖，證實MMP1在喉癌中具有促進腫瘤侵襲、轉移的作用。本研究結果顯示，cHNSCC患者腫瘤組織細胞MMP1陽性表達率高，其高表達提示患者術后存在較高復發(fā)風險。

既往臨床評估腫瘤患者術后復發(fā)風險主要依據(jù)為手術切緣組織病理學檢查，但其效果并不理想，有研究指出存在部分手術切緣陰性的患者術后出現(xiàn)局部復發(fā)或淋巴結轉移[19-20]。這說明傳統(tǒng)組織病理學檢查具有一定局限性，而在病理學檢查基礎上聯(lián)合免疫組織化學檢測，可一定程度上提高診斷準確率。本研究中PD-L1、MMP1陽性表達對預測cHNSCC患者術后復發(fā)均有較高價值，二者聯(lián)合預測cHNSCC患者術后復發(fā)的靈敏度、特異度分別為87.90%、79.59%，提示PD-L1、MMP1陽性表達情況可作為評估cHNSCC患者術后復發(fā)風險的參考指標。

綜上所述，cHNSCC患者術后腫瘤組織PD-L1、MMP1陽性表達率較高，而且與患者術后復發(fā)存在密切關系，通過檢測PD-L1、MMP1陽性表達情況有助于評估術后復發(fā)風險，有助于臨床盡早干預以降低復發(fā)率。本研究不足之處在于僅探究了PD-L1、MMP1與術后復發(fā)的關系，受限于現(xiàn)有條件未分析其表達情況是否對遠期生存有影響，這可作為下一步研究的方向。