血清可溶性CD25在原發性膽汁性膽管炎臨床診療中的價值*

龔燕萍,曹 磊,成翠娥,陸芬英,王 斌,張志成,蔣廷旺△

1.常熟市醫學檢驗所，江蘇常熟 215500；2.蘇州大學附屬第一醫院免疫研究所，江蘇蘇州 215006；3.常熟市第二人民醫院消化科，江蘇常熟 215500；4.常熟市第二人民醫院重點專科實驗室，江蘇常熟 215500

原發性膽汁性膽管炎(PBC)是一種以自身免疫介導的肝內中小膽管的破壞損傷、肝臟門靜脈管道的淋巴細胞浸潤為主要特征自身免疫性肝病(AILD)[1-2]。該病好發于中老年女性(40～60歲)，其早期臨床表現為輕度乏力和間歇性瘙癢，半數患者出現輕度肝大，將近1/4患者有脾大的現象[3-4]。血清學主要表現為堿性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰胺轉肽酶(GGT)異常升高，自身免疫性抗線粒體抗體(AMA)或特異性抗核抗體(GP210、SP100)、抗早幼粒細胞白血病蛋白(PML)出現陽性[5-8]。目前為止，治療PBC常用的藥物仍然為熊去氧膽酸(UDCA)，但經過UDCA治療后，仍有30%～40%的患者沒有達到理想效果[9-10]，而PBC晚期患者除進行肝移植外，尚無有效治療方法，而且移植術后復發率較高。目前，PBC發病機制尚不明確，可能是遺傳易感性和環境觸發等多因素共同作用引起自身免疫功能紊亂，導致T淋巴細胞特異性攻擊膽管上皮細胞[11]。可溶性CD25(sCD25)由白細胞介素(IL)2受體α鏈(CD25)在免疫激活時脫落形成。因此sCD25水平升高被認為是持續免疫反應的標志，可用于監測免疫介導的疾病。在噬血細胞性淋巴組織細胞增生癥(HLH)和T細胞淋巴瘤等疾病中，sCD25水平顯著增高，并且分別與診斷和預后相關[12-13]。在結節病等肉芽腫病中，sCD25也可用作監測疾病活動的生物標志物[14]。但在PBC患者中sCD25的表達水平鮮有文獻報道，因此，本研究通過分析sCD25和IL-6在PBC患者血清中的水平及與疾病相關性，探討sCD25在PBC臨床診療中的作用及其潛在價值。

1 資料與材料

1.1一般資料 將2021年2月至2021年6月常熟市第二人民醫院收治的37例初治PBC患者納入研究作為PBC組，其中女性患者30例，年齡40～87歲，平均62歲；男性患者7例，年齡38～72歲，平均60歲。體檢健康者50例作為對照組，其中女性35例，年齡47～78歲，平均63歲；男性15人，年齡34～71歲，平均57歲。兩組間性別構成比、年齡差異無統計學意義(P>0.05)。PBC患者納入標準[15]：同時具備下列3條中的2條者可診斷為PBC。(1)血清ALP、GGT升高；(2)免疫熒光法AMA≥1∶40或者酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測AMA呈陽性；(3)肝活檢組織病理學顯示典型的肉芽腫性膽管炎、匯管區淋巴細胞聚集、小葉間膽管破壞、數目減少，細小膽管增生，可伴有纖維化和肝硬化。排除標準：有病毒性肝炎、藥物誘導性肝炎、酒精性肝病、自身免疫性肝炎、原發性硬化性膽管炎者。所有研究對象均簽署知情同意書。本研究取得常熟市第二人民醫院倫理委員會批準。

1.2試劑與儀器 -80 ℃超低溫冰箱(美國賽默飛公司),離心機(中國香港基因公司),酶標儀(美國賽默飛公司),全自動生化免疫分析儀(德國西門子公司),人源IL-6試劑盒(中國和銳公司),印跡法抗核抗體譜檢測試劑盒(德國歐蒙公司),多重微珠流式熒光抗核抗體譜檢測試劑盒(美國宙斯科技公司),人sCD25檢測試劑盒(蘇州旭光科星抗體生物科技有限公司),ALT、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)、GGT檢測試劑(日本世諾公司)、總膽紅素(T-Bil)檢測試劑盒(中國伊普諾康公司)、ALP(中國九強)。生化試劑均有對應的校準品。

1.3方法

1.3.1血清標本采集 清晨患者空腹時，采集5 mL外周靜脈血，3 000 r/min，離心10 min，收集上層血清并分裝，于-80 ℃超低溫冰箱中保存。

1.3.2ELISA檢測血清中sCD25和IL-6水平 收集所有受試對象的外周血血清，用雙抗體夾心法進行人sCD25和IL-6的ELISA檢測，操作過程均按照ELISA試劑盒說明書進行檢測。最后依據標準品的水平和對應的吸光值建立標準曲線，帶入樣品的吸光值，計算sCD25和IL-6的水平。

1.3.3血清自身抗體和肝功能檢測 血清自身抗體和肝功能參考課題組之前采用的方法進行分析[16]。其中自身抗體AMA采用多重微球流式熒光法和間接免疫熒光法進行檢測，抗核抗體GP210和SP100采用免疫印跡法進行檢測，速率法檢測ALT、AST和GGT，NPP底物-AMP緩沖液法檢測ALP，氧化法測定T-Bil。

2 結 果

2.1所有受試者的自身抗體及肝功能指標檢測結果 PBC患者組及對照組的臨床生化檢測標志物水平見表1。所有患者的血清ALP、GGT的水均顯著性升高(P<0.001)，且免疫熒光法檢測PBC患者的AMA均大于1∶40，ELISA定量檢測AMA也均呈陽性(弱陽性)，同時滿足診斷標準的兩點。患者中呈抗核抗體GP210陽性者15例，抗核抗體SP100陽性者6例。PBC患者的其余肝功能指標(AST、ALT、T-Bil)與對照組比較差異有統計學意義(P<0.001)。

表1 PBC患者組及對照組血清生化檢測指標比較

2.2PBC組與對照組血清sCD25和IL-6水平比較 與對照組相比，PBC組血清中的sCD25水平顯著上升，差異有統計學意義[(920.6±78.6)pg/mLvs.(166 6.7±107.2)pg/mL，P<0.001]。PBC組血清IL-6水平較對照組明顯升高，差異有統計學意義[(11.96±0.30)U/Lvs.(10.71±0.35)U/L，P=0.008]。

2.3血清中sCD25和IL-6與PBC相關核抗體間的關系 PBC組抗-GP210陰性和陽性患者的血清sCD25水平均值分別為1 389.6 pg/mL和2 073.1 pg/mL，差異有統計學意義(P<0.001)；抗-SP100陰性和陽性組血清sCD25水平均值分別為1 590.0 pg/mL和2 063.1 pg/mL，差異無統計學意義(P=0.104)。PBC組抗-GP210陰性和陽性患者的IL-6血清水平均值分別為11.62 U/L和12.45 U/L，差異無統計學意義(P=0.170)；抗-SP100陰性和陽性組血清IL-6水平均值分別11.87 U/L和12.86 U/L，差異無統計學意義(P=0.199)。

2.4PBC患者血清sCD25、IL-6與肝功能指標的相關性分析 進一步對PBC患者血清sCD25以及IL-6水平與肝功能各指標進行相關性分析，結果顯示，血清sCD25的水平與ALT(r=0.459，P=0.028)、AST(r=0.492，P=0.020)、T-Bil(r=0.442，P=0.039)呈正相關，而血清IL-6的水平也與ALT(r=0.540，P=0.006)、AST(r=0.431，P=0.045)、ALP(r=0.506，P=0.012)、T-Bil(r=0.593，P=0.004)呈正相關，見表2。

表2 PBC患者血清sCD25、IL-6與肝功能指標相關性

2.5ROC曲線分析 sCD25取截斷值1 104 pg/mL時，靈敏度為91.89%，特異度為85.19%；IL-6取截斷值10.26 U/L時，靈敏度為91.43%，特異度為52.38%，見表3、圖1。由此可見，sCD25水平對PBC組和對照組具有良好的區分能力，而IL-6對PBC組和對照組的區分能力則較弱。

表3 sCD25、IL-6 ROC曲線分析結果

圖1 sCD25、IL-6的ROC曲線分析

3 討 論

PBC是一種比較常見的膽汁淤積性肝病，以慢性、進行性、自身免疫為典型特點，其病因和發病機制尚不明確，機體內免疫功能失調可能是引起該病的原因之一[17-18]。研究報道證明多種Th1、Th2相關細胞參與了PBC的發生、發展[19]。IL-6常被用作炎癥疾病的一種血清標志物，但事實上IL-6屬于Th2型細胞因子，它可參與調節Th1/Th2平衡，在很多自身免疫性疾病中也具有重要的臨床意義[20-21]。CD25是IL-2的受體α鏈(IL-2Rα)，表達于健康人靜止的T淋巴細胞表面，誘導T細胞的增殖和分化[22]。由于IL-2兼有免疫激活和免疫耐受的功能，sCD25也可以通過調控傳統T細胞或者調節性T細胞來實現免疫激活以及免疫耐受的不同效應[23]。由于自身免疫性疾病患者中sCD25水平的增加被認為反映了持續的疾病活動，因此可以預期sCD25通過反式激活效應細胞來參與PBC的發病過程。本研究發現，PBC患者血清中sCD25、IL-6水平顯著性升高，與對照組相比，差異有統計學意義(P<0.05)。將sCD25和IL-6與PBC患者肝功能指標進行Pearson相關分析發現，均與ALT、AST和T-Bil呈正相關(P<0.05)，這提示著sCD25和IL-6可能與肝臟病變的進展存在相關性。楊瓊等[17]研究了40例PBC患者中IL-6水平與UDCA療效的相關性，結果證明，PBC患者的血清IL-6水平顯著升高，而且發現IL-6可能參與了PBC的發病過程，與本文研究結果一致。

抗-SP100和抗-GP210是PBC兩個重要的特異性抗核抗體，因而本研究還對sCD25與IL-6的血清學水平與自身抗體之間的關系進行了初步探討。結果發現，抗-GP210陽性組的sCD25水平較陰性組顯著升高(P<0.05)，但抗-SP100陽性組的sCD25水平較陰性組有增加，但增加無統計學意義(P>0.05)，原因很可能是由于抗-SP100陽性組入組患者過少(n=6)導致；抗-GP210和抗-SP100陽性組的IL-6水平與陰性組相比差異均統計學意義(P>0.05)，說明相較于IL-6，sCD25在臨床診斷PBC中有更高的價值且與PBC的臨床預后可能存在一定的相關性。ROC曲線分析發現sCD25在PBC中曲線下面積為0.893，高于IL-6的0.761，也提示在PBC中sCD25比IL-6更具有潛在應用價值。

綜上所述，PBC患者sCD25水平顯著高于對照組，sCD25與自身抗體抗-GP210以及患者肝功能指標存在顯著的相關性。提示sCD25在PBC實驗室篩查中具有潛在的應用價值。