動態(tài)監(jiān)測循環(huán)腫瘤細胞聯合腫瘤標志物的變化對肺癌術后復發(fā)轉移的預測研究

袁 琳

（建湖縣人民醫(yī)院腫瘤科，江蘇 鹽城 224700）

肺癌作為世界上最常見的腫瘤之一，其在世界上的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，而且通過統計5 年存活率分析，其態(tài)勢不容樂觀[1]。肺癌從組織學上分為小細胞型和非小細胞型，小細胞肺癌在肺癌中占小部分，大部分為非小細胞肺癌（nonsmall-cell lung cancer，NSCLC），非小細胞肺癌可具體化劃分為鱗狀細胞癌、腺癌、大細胞和未分化的肺癌。近年來，液體活檢技術受到了廣泛關注，其代表方法為外周血循環(huán)腫瘤細胞（CTC）檢測。CTC 檢測在肺癌術后復發(fā)轉移預測中，相比血清腫瘤標志物的檢測敏感度較高。但是在特異度方面，CTC 檢測在某些方面不如血清腫瘤標志物，如CTC 比神經元特異度烯醇化酶（NSE）、糖類抗原125（CA125）、糖類抗原153（CA153）、細胞角蛋白19 片段（CYFRA21）和鱗狀細胞癌抗原（SCCA）的特異度好，但是低于癌胚抗原（CEA）的特異度。結合兩種檢測技術的優(yōu)點，聯合檢測不但提高了檢測的敏感度，而且提高了特異度。故而開展本次研究，以期將CTC 和CEA、CA199、CA125、CYFRA-21 等經典肺癌相關腫瘤標志物與肺癌之間的關系進一步明確下來，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2021 年10 月至2022 年8 月建湖縣人民醫(yī)院收治的60 例符合標準的NSCLC 患者。根據檢測方法分為A、B、C 組，各20 例。A 組患者男性11 例，女性9 例；年齡44～86 歲，平均年齡（65.23±9.42）歲；腺癌13 例，鱗癌及其他類型7 例。B 組患者男性12 例，女性8 例；年齡45～87 歲，平均年齡（65.85±9.23）歲；腺癌10 例，鱗癌及其他類型10 例。C 組患者男性10 例，女性10 例；年齡44～87 歲，平均年齡（65.28±9.24）歲；腺癌10 例，鱗癌及其他類型10 例。以上3 組患者的一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。本研究經建湖縣人民醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，患者及其家屬均簽署知情同意書。納入標準：①60例患者均已進行病理學檢查并且確診；②血清腫瘤標志物指標異常；③未接受其他腫瘤治療方法；④無其他腫瘤史；⑤無其他器官病變。排除標準：①血樣采集過程中出現凝結血塊者；②精神異常或無法正常溝通者。

1.2 檢測方法

1.2.1 循環(huán)腫瘤細胞檢測 對本研究中3 組患者進行外周血CTC 檢測，采集患者空腹靜脈血5 mL 裝于真空采血管中，使用自動化檢測系統（青島博亞澤自動化系統有限公司，型號：LG-11）對其進行檢測，采用免疫磁珠陰性富集技術分離CTC，利用熒光原位雜交和免疫熒光染色鑒別CTC（熒光原位雜交樣品處理試劑），在熒光顯微鏡下觀察并統計CTC 的數量。CTC≥4 個為陽性，CTC<4 個為陰性[2]。

1.2.2 血清腫瘤標志物檢測 對本研究中3 組患者進行血清腫瘤標志物檢測，采集患者空腹靜脈血5 mL 裝于真空采血管中，離心10 min 后進行血清分離，針對CEA、糖類抗原199（CA199）、CA125、CYFRA-21 水平的檢測所使用的儀器為全自動化學發(fā)光免疫分析儀（成都斯馬特科技有限公司，型號：SMT-680）及其配套試劑，具體的操作步驟和注意事項按照儀器的使用說明和試劑的說明進行操作。針對血清瘤標志物的正常值范圍參考以下值：CEA 為0～5 ng/mL、CA125 為0～35 ng/mL、CA199 為0～37 ng/mL、CYFRA-21 為0～3.3 ng/mL，陽性標準為結果以高于上限值[3]。

1.3 觀察指標①比較3 組患者術后1 周后的循環(huán)腫瘤細胞數量、4 種血清腫瘤標志物的含量水平。②比較3 組患者術后1 周后的循環(huán)腫瘤細胞數量、4 種血清腫瘤標志物檢出陽性率。陽性率=陽性例數/總例數×100%。③3組診斷效能。以病理學檢查為金標準，以受試者操作特征（ROC）曲線及曲線下面積將血清腫瘤標志物、CTC、血清腫瘤標志物聯合CTC 檢測的敏感度、特異度計算出來。敏感度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%；特異度=真陰性/（真陰性+假陽性）×100%；準確度=（真陽性+真陰性）/總數×100%。

1.4 統計學分析采用SPSS 20.0 統計學軟件進行數據分析，計量資料以() 表示，多組間計量資料比較用F檢驗；計數資料采用[例(%)]表示，行χ2檢驗；以受試者工作特征（ROC）曲線及曲線下面積將CTC、腫瘤標志物（CEA、CA199、CA125、CYFRA-21）在復發(fā)預測的敏感度、特異度進行計算。P<0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3 組患者術后1 周后的循環(huán)腫瘤細胞數量、4 種血清腫瘤標志物的含量水平比較C 組患者的CTC、CEA、CA199、CA125、CYFRA-21 含量水平均高于A 組、B 組，但A 組、B 組患者的CTC、CEA、CA199、CA125、CYFRA-21 含量水平之間的差異均無統計學意義，3 組間比較，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

表1 3 組患者術后1 周后的循環(huán)腫瘤細胞數量、4 種血清腫瘤標志物的含量水平比較（）

表1 3 組患者術后1 周后的循環(huán)腫瘤細胞數量、4 種血清腫瘤標志物的含量水平比較（）

2.2 3 組患者術后1 周后的循環(huán)腫瘤細胞數量、4 種血清腫瘤標志物檢出陽性率比較C 組患者的CTC、CEA、CA199、CA125、CYFRA-21 檢出陽性率均高于A 組、B 組，但A 組、B 組患者的CTC、CEA、CA199、CA125、CYFRA-21 檢出陽性率之間的差異均不顯著，3 組間比較，差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

表2 3 組患者術后1 周后的循環(huán)腫瘤細胞、4 種血清腫瘤標志物檢出陽性率比較[例(%)]

2.3 3 組診斷效能比較ROC 曲線結果顯示：C 組診斷敏感度、特異度均高于A 組、B 組，差異有統計學意義（P<0.05），但A 組、B 組診斷敏感度、特異度比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表3、圖1。

表3 3 組診斷效能比較

圖1 3 組診斷效能的ROC 曲線

3 討論

CTC 一般產生于腫瘤原發(fā)灶或轉移灶，在腫瘤早期的診斷過程中具有很重要的意義。有學者對CTC 的檢測進行了研究[4]，發(fā)現原發(fā)性肺癌及良性肺病的患者CTC 陽性率分別為84%和4.2%，通過這項研究也提出了CTC 在肺癌診斷中具有的價值意義。有學者在NSCLC 的患者中進行研究[5]，其中NSCLC 患者中以肺腺癌為主，而且伴有少數的肺鱗癌患者，通過研究發(fā)現，其中CEA 含量升高的患者占總數的63.6%，而CYFRA-21 主要在復層腫瘤上皮細胞的細胞質中分布，在細胞死亡的情況下會在血中溶解，從而提升血液中CYFRA-21 含量。另有文獻報道[6]，CYFRA-21 能夠將患者機體內腫瘤的負荷量反映出來，在病情嚴重程度的評定中可作為參考指標。有學者也有報道，CEA、CA125、NSE、CYFRA-21 經化療后降低，在療效評估中可作為可靠指標[7]。

外周血中能夠檢測到CTC 的NSCLC 患者占總數的68%左右，同時，CTC 數量隨著疾病進展不斷增加，而患者預后隨著CTC 數量的增加而惡化[8]。另外，CTC 的數量與肺癌的發(fā)生時期及轉移都有一定的關聯性，通過監(jiān)測CTC 的數量，能夠提高對肺癌患者術后復發(fā)轉移判斷的準確性。隨著患者病情的發(fā)展，對其血清腫瘤物進行監(jiān)測，并沒有達到循環(huán)腫瘤細胞的監(jiān)測效果。

常見CTC 捕獲檢測技術，超過50 種CTC 檢測技術已經被報道，不依賴于細胞表面標記的富集技術或多種富集技術的融合逐漸成為CTC 富集技術的主流。國內首家CTC活細胞捕獲儀器Nextctc，主要通過納米微流控系統技術進行非抗體依賴的循環(huán)腫瘤活細胞捕獲，利用CTC 核質比和電荷特性（負電性）等生物特性，采用納米微流控技術，不依賴于抗體的自動捕獲CTC 活細胞技術。Nextctc 可以有效分離出包括EpCAM+/CK+陽性上皮來源、間質類、干細胞來源的CTC，與現有商業(yè)化儀器相比，具有更高敏感度和特異度。在惡性腫瘤治療方面，盡早發(fā)現、盡早診斷、盡早治療十分重要，對病情的控制與治療效果至關重要，手術作為治療惡性腫瘤方面最常用且最基礎的手段，治療效果較好，一般運用多種輔助手段，包括生物治療、放療、化療、靶向治療等，雖然能夠減輕疼痛、延長壽命、改善生活質量，使一部分患者從中獲益，但是也帶來了一些副作用。如存在術后癌細胞轉移的現象，轉移的病患概率約為50%，對患者的生命安全產生極大的威脅。因此，在惡性腫瘤患者進行手術后，應及時監(jiān)測原腫瘤部位，及時發(fā)現和治療復發(fā)轉移情況，盡早進行干預治療，降低術后復發(fā)和轉移的風險。

有研究表明[9]，CEA、NSE、CA125、CA153、CYFRA21-1、SCCA 聯合檢測的敏感度為94.3%，高于CTC 檢測的敏感度77.1%。本研究結果表明，C 組患者的CTC、CEA、CA199、CA125、CYFRA-21 含量水平及檢出陽性率均高于A 組、B 組，C 組診斷敏感度、特異度均高于A 組、B組（P<0.05），和上述研究結果一致。通過本研究應用動態(tài)監(jiān)測循環(huán)腫瘤細胞聯合腫瘤標志物的變化對肺癌術后復發(fā)轉移預測的檢測方式，更有效和準確地預測肺癌患者的術后癌細胞轉移的問題，為廣大肺癌患者樹立了治療的信心，并且通過減少其他檢查項目，降低了患者的費用，對社會和患者有重要的影響作用。

綜上所述，腫瘤患者術后發(fā)生復發(fā)或轉移的預測中CTC聯合血清腫瘤標志物檢測的評估效能高于單獨CTC、血清腫瘤標志物檢測。