四川省涼山地區高風險人乳頭瘤病毒亞型分布研究

陳華秋，陳興友，王光明

（1.西昌市人民醫院檢驗科，四川西昌 615000；2.西昌市人民醫院病理科，四川西昌 615000；3.大理大學第一附屬醫院基因檢測中心，云南大理 671000）

宮頸癌是一種常見的婦科惡性腫瘤〔1〕，嚴重威脅著女性的健康。宮頸癌每年確診病例多達50 多萬例，死于宮頸癌人數超過30 萬人〔2〕。據報道，近年來宮頸癌的發病率有所下降，但仍然是導致發展中國家婦女癌癥病死的主要原因〔3〕，中國和印度患者數量占全球宮頸癌患者的三分之一以上〔4〕。宮頸癌的形成是一個長期的過程，在發展成為浸潤性宮頸癌之前很難被發現〔5〕。宮頸癌早期及時應用手術治療，病情能得到有效控制，但到了中晚期則只能以放療和化療為主，且治療效果并不理想〔6-7〕。人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）的感染與宮頸癌的發生密切相關〔8〕，根據其與宮頸癌和癌前病變的關系，分為高風險人乳頭瘤病毒（high riskhuman papilloma virus，HR-HPV）和低風險人乳頭瘤病毒（low risk-human papilloma virus，LR-HPV），不同HPV 亞型對宮頸組織損傷不同，宮頸癌的發生與HR-HPV 感染具有相關性，LR-HPV 與宮頸細胞的良性或低級別變化相關〔9-10〕。宮頸癌是唯一一種可以通過篩查來預防的惡性腫瘤，近年來，許多發達國家宮頸癌的發病率和病死率得到改善，這都歸功于宮頸癌篩查和HPV 疫苗的普及。與歐洲國家相比，中國人群對HPV 疫苗的認識度相對較低〔8〕。研究〔11〕證明，年輕女性接種HPV 疫苗，益處可能比以前了解的還要多。HR-HPV 流行特點在不同的地理位置、經濟水平和種族之間存在較為顯著的差異〔12〕，因此研究四川省涼山地區的HR-HPV 感染特點，利于有針對性地開發該地區的HPV 疫苗，對宮頸癌的有效預防具有重要意義。本研究對四川省涼山地區7 445 例女性患者HR-HPV 的感染情況進行分析，總結該地區女性HR-HPV 感染特點，為該地區HR-HPV 疫苗的開發和宮頸癌的預防提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象選取2018 年11 月14 日至2020年12 月30 日在西昌市人民醫院體檢中心和婦產科門診就診的7 445 例女性為研究對象，年齡16～86 歲，對各年齡段HR-HPV 感染情況、感染特點和亞型感染分布情況進行分析。本研究經西昌市人民醫院醫學倫理委員會審批通過，所有納入研究者均簽署知情同意書。

1.2 標本采集檢查前要求：檢查應在非月經期，48 h 內不應有性行為，3 d 內不應進行陰道沖洗或使用避孕藥膏等陰道內用藥。樣本采集：使用一次性宮頸細胞采集器進行樣本采集，采樣前用棉拭子拭去宮頸口過多的分泌物，將宮頸刷置于宮頸口，輕輕搓動宮頸刷使其順時針旋轉3～4 圈，慢慢取出宮頸刷，將其放入裝有細胞保存液的無菌樣本管中，在管口處將多余的刷柄折斷，密閉送檢。標本保存和運送：采集樣本的檢測時限為室溫（20 ℃）放置不超過24 h，4 ℃環境下放置不超過120 h，-20 ℃環境下放置不超過7 個月（反復凍融不超過7 次）；標本運送采用冰壺加冰或泡沫箱加冰密封運輸。

1.3 儀器和試劑熒光定量PCR 儀（SLAN-96P，上海宏石）；高風險人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒（PCR-熒光探針法，湖南圣湘生物科技有限公司），該試劑盒用于體外定性檢測女性宮頸脫落上皮細胞樣本中的15 種HR-HPV 核酸DNA，并鑒別其基因亞型，分別為HPV 16 型、18 型、31 型、33型、35 型、39 型、45 型、51 型、52 型、53 型、56 型、58型、59 型、66 型和68 型。

1.4 檢測原理高風險人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒采用核酸釋放劑快速裂解、釋放樣本中HPV 的DNA，采用HPV 中15 種型別的特異性熒光引物及熒光探針，應用聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）結合Taqman 技術，分別對HPV 中15 種型別的特異性DNA 片段進行分型檢測。整個實驗過程無須單獨提取樣本中的DNA，只需將樣本洗脫液直接與核酸釋放劑充分混合即可作為PCR 擴增模板，可有效避免常規核酸提取過程中的環境污染。

1.5 檢測流程嚴格按照試劑盒說明書進行操作，試劑準備：取出試劑盒中的各個組分，室溫放置，待其溫度平衡至室溫，混勻后備用；取4 種HPV 的PCR 反應液n×38 μL 分別與4 份n×2 μL 酶混合液（n=待檢樣本數+質控品數，本研究中質控品為2個），充分混勻制成PCR-混合液，瞬時離心后備用。待測樣本處理：1 mL 樣本瞬時離心后吸取25 μL 至1.5 mL 滅菌離心管中，加入25 μL 核酸釋放劑，充分混勻后作待測樣本備用；將陰性對照和陽性對照分別進行稀釋，取對照試劑25 μL 與核酸釋放劑25 μL 混勻待用。加樣：每個PCR 反應管中加入上述處理后的待測樣本和稀釋后的陰性對照、陽性對照各10 μL，間隔10 min 以上分別加入40 μL 上述已配制好的4 種PCR-混合液。PCR 擴增：將PCR反應管放入擴增儀樣品槽，選擇熒光檢測通道、設定循環參數進行檢測，并分析和判讀檢測結果。

1.6 統計分析采用SPSS 26.0 軟件對數據進行統計分析，計數資料用［n（%）］表示，使用χ2檢驗進行差異分析，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 總體情況共有受檢者7 445 例，其中HRHPV 陽性者1 027 例，陽性率為13.79%，HPV 16 型、18 型、31 型、33 型、35 型、39 型、45 型、51 型、52 型、53 型、56 型、58 型、59 型、66 型和68 型均有檢出。

2.2 各年齡段HR-HPV 感染情況在7 445 例受檢者中，以年齡≥61 歲的受檢者HR-HPV 陽性率最高，其次為21～30 歲和51～60 歲的受檢者，年齡≤20 歲的受檢者HR-HPV 陽性率最低，不同年齡段受檢者之間HR-HPV 陽性率比較差異有統計學意義（χ2=19.116，P=0.02＜0.05）。見表1。

表1 各年齡段HR-HPV 感染情況

2.3 單一感染與多重感染情況單一感染者818例（占79.65%），多重感染者209 例（占20.35%），差異有統計學意義（χ2=387.884，P＜0.01），由此可知，目前HPV 感染者中以單一感染情況為主。在多重感染者中，以感染2 個亞型的感染率最高，為15.00%（154/1 027），感染3 個亞型的感染率為4.19%（43/1 027），感染4 個亞型的感染率為0.97%（10/1 027），感染6 個亞型的感染率為0.19%（2/1 027）。

2.4 HR-HPV 亞型感染分布高危型單一感染比例最高的是HPV 52 型，陽性率為20.45%；其次為HPV 16 型，陽性率為8.28%；再次為HPV 53 型，陽性率為7.59%。結果發現，除了感染HPV 52 型與多重感染無關聯外（P ＞0.05），其余單個亞型均與多重感染有關聯（P＜0.05）。見表2。

表2 HR-HPV 亞型感染分布（n=1 027）

3 討論

流行病學研究表明，持續HR-HPV 感染與發生高級別的宮頸上皮內癌變的風險呈正相關〔2，13〕，陽性者的風險是陰性者的100 多倍〔14〕。HPV 的陽性率從非典型鱗狀細胞增生、低級別鱗狀上皮細胞內瘤變、高級別鱗狀上皮細胞內瘤變到浸潤性宮頸癌呈上升趨勢〔15〕。四川省涼山地區關于HPV 感染的報道較少，因此，本研究有助于豐富該地區HPV 感染的流行病學數據，使該地區的HPV 篩查和宮頸癌預防方案更有針對性。

本次研究中，HR-HPV 的陽性率為13.79%，陽性率最高的年齡段為≥61 歲（占22.39%）和21～30歲（占15.86%），陽性率最低的年齡段為≤20 歲（占9.52%）；單一感染者818 例（占79.65%），多重感染者209 例（占20.35%）；單一HR-HPV 感染中陽性率排名前3 的感染亞型分別為HPV 52 型（占20.45%）、16 型（占8.28%）、53 型（占7.59%）。在本研究中，年齡≤20 歲和年齡≥61 歲的病例數相對較少，不能真實反映該年齡段HR-HPV 感染的真實情況，因此，應加大四川省涼山地區這2 個年齡段女性HR-HPV 篩查的宣傳力度。本研究結果表明，該地區HR-HPV 仍以單一感染為主，多重感染是否更容易引起宮頸病變以及對病變嚴重程度的影響仍存在爭議，還有待進一步研究。

國內外關于HR-HPV 流行病學的報道中，陽性率最高的亞型和年齡段不盡相同。HPV 16 型、18 型是印度陽性率最高的亞型〔16〕，其中印度中央邦阿努普爾區HPV 16 型檢出率高達到70.0%，隨著年齡的增長其陽性率顯著下降，排在前兩位的年齡段分別為15～29 歲和30～54 歲，陽性率分別為86.4%和13.3%〔17〕；在墨西哥HR-HPV 陽性率排名前三的亞型分別為HPV 16 型、59 型和66 型，感染的高峰年齡為36～55 歲〔18〕；巴基斯坦最常見的HRHPV 亞型為HPV 16 型、18 型和45 型，HPV 陽性率高達57.0%，單一型HR-HPV 陽性率高達25.0%〔19〕。在我國，佛山市最常見的HR-HPV 亞型分別為HPV 16 型、52 型和58 型〔20〕；北京地區感染陽性率排名前三的HR-HPV 亞型依次為HPV 16 型、52 型和58 型，陽性率最高的年齡段為30～40 歲和45～55歲〔21〕；重慶市HR-HPV 感染陽性率排名前三的亞型分別為HPV 52 型、16 型和58 型，感染的高峰分別在20 歲以下和50 歲以上〔22〕；山西省感染陽性率排名前三的HR-HPV 亞型分別為HPV 16 型、58型和52 型，HR-HPV 的陽性率隨著宮頸細胞學的嚴重程度呈上升趨勢〔23〕；四川省HR-HPV 感染陽性率排名前三的亞型分別為HPV 52 型、58 型和16型〔24〕；全國HR-HPV 感染陽性率排名前三的亞型分別為HPV 52 型、53 型和58 型〔25〕。在本研究中，四川省涼山地區HPV 流行特點與很多地區不盡相同，可能與涼山地區是少數民族聚居地有關，本研究還發現50 歲以上女性的HR-HPV 陽性率很高，分析原因可能與此階段女性處于絕經期，其雌性激素水平降低，陰道內環境發生改變有關。

綜上所述，四川省涼山地區HR-HPV 感染的特殊性可能與該地區的地理位置和民族差異有關，本次研究豐富了HR-HPV 感染的流行病學研究，為該地區HPV 疫苗的開發，宮頸癌的預防提供有價值的數據支持。