慢性阻塞性肺疾病合并冠心病患者組胺、可溶性髓樣細胞觸發受體-1、微小核糖核酸-145、超敏C反應蛋白的表達特征及檢測價值

陳艷蓉, 劉 艷, 王 珊, 張 凈

(首都醫科大學附屬北京友誼醫院 老年科, 北京, 100050)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)為中老年群體多發呼吸系統疾病類型，受肺功能低下及氧化應激反應、炎性反應等諸多因素影響，心血管疾病發生風險顯著增高，其中COPD合并冠心病(CHD)較為常見[1-2]。COPD合并CHD病情復雜，治療及疾病良好轉歸難度較大，故早期對疾病進行準確評估極為重要[3-4]。超敏C反應蛋白(hs-CRP)為臨床常見炎性反應標志物，正常生理狀態下其血清含量較低，若發生感染、組織損傷等則會異常增高，可用于疾病診療評估，但敏感性與特異性欠佳。組胺(HA)屬活性胺化合物，在免疫調節、宿主對病原微生物防御作用、變態反應中具有重要作用，且與心血管疾病密切相關。王澈等[5]研究證實，老年CHD合并COPD血清HA含量異常增高，并與肺功能關系密切，可用于疾病的診斷。可溶性髓樣細胞觸發受體-1(sTREM-1)為嗜中性粒細胞活化受體，其激活后可增加炎性介質生成量，在COPD及心血管疾病中均呈過表達狀態，參與了上述疾病的發病與進展過程。臨床研究[6]證實, COPD患者血清sTREM-1顯著高于正常水平，且與病情嚴重程度關系密切。此外，微小核糖核酸(miRNA)作為新型基因調節分子，可影響靶基因表達，從而對信號通路及炎性反應進行調節，在多種疾病中具有重要作用[7]。趙盼盼等[8]研究證實, 微小核糖核酸-145(miR-145)在炎癥疾病中呈異常表達狀態，可參與炎癥及免疫調節過程，在COPD、CHD中均具有重要調控作用。本研究選取COPD伴CHD患者進行分析，旨在明確HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP的表達特征及檢測價值，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月—2021年12月107例COPD合并CHD的患者為研究組，另選取同期健康體檢者107例為對照組。研究組男59例，女48例; 年齡64～90歲，平均(77.09±11.71)歲; COPD病情嚴重程度為輕度29例，中度39例，重度21例，極重度18例; 紐約心臟病協會(NYHA)心功能分級為Ⅰ級27例, Ⅱ級40例, Ⅲ級23例, Ⅳ級17例; 合并疾病為高血壓病39例，糖尿病21例，高脂血癥37例，其他11例。對照組男63例，女44例; 年齡61～90歲，平均(76.98±13.02)歲。2組年齡、性別比較，差異無統計學意義(P>0.05)。研究組納入標準: ① 符合《慢性阻塞性肺疾病診治指南(2021年修訂版)》[9]中COPD診斷標準，《穩定性冠心病診斷與治療指南》[10]中CHD診斷標準，經冠狀動脈造影檢查確診者; ② 新確診者; ③ 臨床資料完整者; ④ 知曉本研究，簽署同意書者。排除標準: ① 存在其他心腦血管及呼吸系統疾病者; ② 存在精神系統疾病者; ③ 存在肝、腎等臟器器質性病變者; ④ 存在免疫系統、血液系統疾病者; ⑤ 存在惡性腫瘤者; ⑥ 既往采取心肺手術治療者; ⑦ 具有良好依從性及理解溝通能力，可配合完成調查研究者。對照組納入標準: ① 體檢健康者; ② 無基礎疾病者; ③ 知情同意本研究者; ④ 具有良好認知功能、理解能力者。

1.2 方法

1.2.1 miR-145檢測方法: 晨起抽取所有受檢者4 mL空腹靜脈血，置于抗凝離心管中，室溫條件下以2 500轉/min離心10 min, 取上層血漿400 μL, 加入提取劑(Trizol)1 mL, 置于-70 ℃環境中儲存待檢。提取總RNA, 經聚合酶鏈式反應(PCR)儀實施實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-PCR), 內參選用U6, miRNA逆轉錄反應體系15 μL。無菌雙餾水4.16 μL, RNase抑制劑0.19 μL(20 U/μL), 10×反轉錄緩沖液1.5 μL, 逆轉錄酶1 μL(50 U/μL), 脫氧核糖核苷酸(dNTPs, 100 mmol/L) 0.15 μL,U6與miRNA特異性莖環引物3 μL, RNA模板5 μL。反應條件: 30 min 16 ℃、30 min 42 ℃、5 min 85 ℃，擴增反應體系20 μL, 雙蒸餾水7.67 μL, 反轉錄產物cDNA 1.33 μL, TaqMan通用混合物溶液(2×)10 μL, 引物與探針Mix(20×)1 μL。擴增條件: 95 ℃條件下實施10 min預變性, 95 ℃下變性15 s, 60 ℃下復性60 s, 共45個循環。各反應體系內熒光信號達到預設閾值經歷的循環數即Ct值，通過2-△△Ct法計算miR-145相對表達量。

1.2.2 HA及sTREM-1、hs-CRP檢測方法: 抽取所有受檢者3 mL外周靜脈血，常溫條件下以3 500轉/min離心10 min, 取上清液，放入-80 ℃環境中儲存待檢; 通過酶聯免疫吸附法檢測HA及sTREM-1、hs-CRP水平，試劑盒購自上海酶聯生物科技有限公司。

1.3 觀察指標

記錄2組HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平，比較研究組不同COPD病情嚴重程度者HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平，比較不同NYHA心功能分級患者HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平，分析HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平與COPD病情嚴重程度、NYHA心功能分級的關聯性。

1.4 統計學分析

2 結 果

2.1 2組各指標水平比較

研究組血清HA、sTREM-1、hs-CRP水平高于對照組, miR-145水平低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05), 見表1。

表1 2組指標水平比較

2.2 不同COPD病情嚴重程度患者指標水平比較

不同COPD病情嚴重程度的COPD合并CHD患者血清HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平比較，差異均有統計學意義(P<0.05); 隨著病情嚴重程度的加劇，血清HA、sTREM-1、hs-CRP水平持續增高，miR-145水平持續降低，差異有統計學意義(P<0.05), 見表2。

表2 不同COPD病情嚴重程度者各指標水平比較

2.3 不同NYHA心功能分級患者指標水平比較

不同NYHA心功能分級的COPD合并CHD患者血清HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平比較，差異均有統計學意義(P<0.05); 隨著NYHA心功能分級的增高，血清HA、sTREM-1、hs-CRP水平持續增高, miR-145水平持續降低，差異有統計學意義(P<0.05), 見表3。

表3 不同NYHA心功能分級患者指標水平比較

2.4 各指標水平與COPD病情嚴重程度、NYHA心功能分級的關聯性分析

經Pearson檢驗可知，血清HA、sTREM-1、hs-CRP水平與COPD合并CHD患者COPD病情嚴重程度、NYHA心功能分級呈正相關(P<0.05), miR-145水平與COPD病情嚴重程度、NYHA心功能分級呈負相關(P<0.05), 見表4。

表4 指標水平與COPD病情嚴重程度、NYHA心功能分級的關聯性分析

3 討 論

CHD為COPD常見合并癥，對患者生命健康及疾病預后轉歸造成了巨大威脅[11-12]。因此，早期對COPD合并CHD進行準確評估具有重要意義。HA為小分子生物胺，在胃酸分泌、過敏反應、免疫調節、機體神經信號傳遞等病理、生理過程中均具有重要作用。同時，HA能調節適應性免疫細胞與固有免疫細胞，引發、加快動脈粥樣硬化，與CHD等疾病均密切關聯[13-14]。此外, HA可引發變應性炎性反應，增加血管通透性及P物質生成量，后者可參與神經活動及免疫調節、炎癥發生與進展。MOYA-GARCA A A等[15]研究表明, HA的代謝是極為復雜的網絡，其可連接多種代謝過程，在呼吸系統疾病中具有重要作用。本研究結果顯示，研究組血清HA水平高于對照組，證實HA可能參與了疾病發病及進展。炎癥反應是COPD合并CHD發病及進展的重要基礎之一, hs-CRP屬急性時相反應蛋白，可在機體發生感染等病變后異常增高，但敏感性及特異性較低，導致其單獨應用存在一定局限性。sTREM-1不僅具備ICAM-1大部分序列，還能結合淋巴細胞功能相關分子，在免疫細胞介導中具有重要作用[16]。SHIBER S等[17]研究證實，心血管疾病患者血漿sTREM-1水平高于健康體檢者，可準確鑒別診斷是否為特異性胸痛，并能評估冠狀動脈病情嚴重程度，預測疾病預后。周榕等[18]研究結果表明, sTREM-1為嗜中性粒細胞活化受體，被激活后能造成炎性介質過度釋放, COPD合并CHD患者血清sTREM-1表達水平異常增高，參與了疾病發生及進展過程。本研究結果也顯示，研究組血清hs-CRP、sTREM-1水平高于對照組，與上述研究結果一致，表明hs-CRP、sTREM-1也參與了COPD及CHD的發病及進展過程，主要是因為hs-CRP、sTREM-1為炎癥反應調節因子，可參與炎性反應、免疫細胞介導過程，引發炎癥反應，對體內血管產生損傷，加劇病情。

隨著臨床研究不斷深入, miRNAs在呼吸系統及心血管疾病中的應用價值引起廣泛關注, miRNAs可參與疾病發生及進展過程，持續性慢性炎性反應可造成部分miRNA表達異常，可造成大小氣道重構、肺氣腫形成、血管重塑[19]。miR-145能靶向調節缺氧所誘導的肺動脈平滑肌細胞遷移及增殖等過程，進而增加炎性介質生成量，誘導上皮細胞凋亡，參與COPD發病及進展[20]。此外, CHD發病與脂質浸潤、免疫機制、炎癥等關系密切，而miR-145可調節血管平滑肌遷移與增殖，也可參與CHD的病理過程。蔡曉航[21]研究顯示，冠心病患者miR-145均呈低表達，檢測其水平可評估冠心病患者病情嚴重程度。本研究中，研究組miR-145水平低于對照組，與其研究結果一致，進一步證實miR-145低表達是導致COPD合并CHD發生及進展的重要因素之一。miR-145可影響血管平滑肌的遷移、增殖，并下調血管緊張素轉換酶含量，通過抑制炎癥保護細胞，若miR-145表達降低，則會引發異常，增大相關疾病發生風險。本研究對不同病情嚴重程度的COPD合并CHD患者的HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP表達情況進行探討，結果顯示，不同COPD病情及NYHA心功能分級患者血清HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平存在顯著差異，提示HA、sTREM-1、hs-CRP高表達及miR-145低表達是導致COPD合并CHD患者病情加劇及進展的重要因素。主要原因為: ① COPD合并CHD患者受病情等影響可出現免疫活動，致使淋巴細胞呈異常高表達狀態，且病情越嚴重，上述現象越顯著，體內炎性反應及免疫反應更加強烈，故血清HA、sTREM-1、hs-CRP水平越高。② miR-145可控制信號通路，其表達異常可活化促炎細胞因子，引發氣道反復炎性反應與重塑; miR-145為血管內皮上特殊miRNA, 其靶基因Ephrin-A3為血管內皮生長因子(VEGF)所介導血管新生信號通路重要信號分子，在Hif-1a-VEGF信號通路的調節中具有重要作用，能促使內皮細胞形成血管，有助于血管再生，故COPD及CHD者病情越嚴重, miR-145表達越低。

綜上所述, COPD合并CHD患者的HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP表達呈異常狀態，且增高或降低程度與COPD病情嚴重程度、NYHA心功能分級密切相關，因此臨床可通過檢測上述指標水平對疾病進行評估，并根據其表達情況制訂或調整干預方案，以保證疾病干預效果及預后的良好轉歸。