海洋真菌Aspergillus candidus HM5-4次生代謝產物的研究

王世榮 暢文軍 陳惠琴 戴好富 曾艷波

摘要：目的 對海綿共附生真菌Aspergillus candidus HM5-4的次生代謝產物及其生物活性進行研究。方法 綜合運用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜以及半制備型高效液相色譜等分離技術對該菌株的大米發酵產物進行分離純化；通過波譜數據和理化常數分析，并結合文獻數據比對，鑒定化合物的結構；分別采用濾紙片法和MTT法對所分離鑒定的化合物進行抗菌和細胞毒活性測試。結果 從A. candidus HM5-4的發酵產物中共分離鑒定10個化合物，其結構分別為：氯黃菌素（1）、4"-deoxyterphenyllin（2）、薊黃素（3）、asperterphenyllin（4）、prenylcandidusin（5）、2，4-二甲氧基-1，10-二羥基對聯三苯（6）、（±）-2-羥基-3-苯基丁酸（7）、candidusin A（8）、candidusin B（9）和aspergivone（10），其中化合物7為新的天然產物。生物活性測試結果顯示，化合物1對火龍果潰瘍病原菌有很強的抑制作用，當供試濃度為10.0 ?g/disc時，其抑菌圈直徑為（41.67±2.36） mm；化合物8對白血病細胞K562、肝癌細胞BEL-7402、胃癌細胞SGC-7901、肺癌細胞A549和宮頸癌細胞Hela有一定的細胞毒活性，其IC50分別為（17.51±0.11）、（31.45±0.11）、（32.27±0.20）、（77.43±0.26）和（68.88±0.57） ?mol/L，化合物2對白血病細胞K562具有細胞毒活性，其IC50為（94.58±1.21） ?mol/L。結論 海綿共附生真菌A. candidus HM5-4具有生產抗菌、細胞毒活性先導化合物的潛在研究價值。

關鍵詞：海洋真菌；Aspergillus candidus；次生代謝產物；抑菌活性；細胞毒活性

中圖分類號：R9文獻標志碼：A

Study on secondary metabolites from marine-derived fungus

Aspergillus candidus HM5-4

Wang Shirong1，2， Chang Wenjun2， Chen Huiqin2， Dai Haofu2， and Zeng Yanbo1，2

（1 Ocean College of Hebei Agricultural University， Qinhuangdao 066000; 2 Hainan Provincial Key Laboratory for Functional Components Research and Utilization of Marine Bio-resources， Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology， Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences， Haikou 571101）

Abstract Objective To investigate secondary metabolites and their biological activities from marine-derived fungus A. candidus HM5-4 from an unidentified sponge collected in the coast of Lingao， Hainan， China. MethodsComprehensive chromatography methods of silica gel column， Sephadex LH-20 gel column， and high-performance liquid chromatography were used to isolate and purify secondary metabolites from fermentation cultures of the marine-derived fungus A. candidus. Their structures were elucidated based on spectroscopic methods， physicochemical constants， as well as by comparison with published data. Bioactivities of compounds were tested by the filter paper method and the MTT assay. Results? ?Ten compounds were isolated and identified from fermentation cultures of A. candidus HM5-4， which were identified as chlorflavonin （1）， 4''-deoxyterphenyllin （2）， cirsimaritin （3）， asperterphenyllin （4）， prenylcandidusin （5）， 2，4-dimethoxy-1，10-dihydroxy-p-terphenyl （6）， （±）-2-hydroxy-3-phenylbutyric acid （7）， candidusin A （8）， candidusin B （9）， and aspergivone （10）， respectively. Compound 7 was a new natural product. Compound 1 showed a strong inhibitory effect on Neoscytalidium dimidiatum with an inhibition circle diameter of （41.67±2.36） mm at a concentration of 10.0 ?g/disc. Compound 8 displayed cytotoxic activity against human chronic myeloid leukemia cell line K562， human liver cancer line BEL-7402， human gastric cancer cell line SGC-7901， human lung cancer cell line A549， and human cervical cancer cell line Hela with IC50 values of （17.51±0.11）， （31.45±0.11）， （32.27±0.20）， （77.43±0.26）， and （68.88±0.57） ?mol/L， respectively. Compound 2 displayed cytotoxic activity against human chronic myeloid leukemia cell line K562 with an IC50 value of （94.58±1.21） ?mol/L. Conclusion? ? The secondary metabolites from sponge-derived fungus A. candidus HM5-4 have potential research values in fungicides and anti-cancer drugs.

Key words Marine fungus; Aspergillus candidus; Secondary metabolites; Antibacterial activity; Cytotoxic activity

海洋約占地球總面積的71%，其中包含著世界上80%以上的物種，是目前為止保存最完整且生物資源最豐富的天然寶庫[1]。與陸地相比，海洋具有非常特殊的生態環境，如高壓、高鹽、低溫、低含氧量以及寡營養等特點，因而海洋微生物的代謝方式和防御體系與陸地微生物相比有著明顯的區別，這使得其具有生產結構新穎、活性顯著先導化合物的潛力[2-4]。……