鹽酸二甲雙胍片體外溶出一致性評價

房 靜，李志萬

(1.天津生物工程職業技術學院，天津 300462；2.天津藥業研究院股份有限公司,天津 300384)

降糖藥鹽酸二甲雙胍，最初由百時美施貴寶開發，于1957年在法國首次上市，并將“格華止”作為其商品名。在此后的60余年里，二甲雙胍始終作為治療Ⅱ型糖尿病的經典用藥。隨著研究的不斷深入，后續又研發出多種二甲雙胍復方制劑，并在糖尿病的臨床治療上發揮著確切療效。同時，二甲雙胍還有一系列其他的治療作用，如抗癌細胞增殖、改善記憶障礙、治療DENV等[1-3]。20世紀90年代二甲雙胍開始國產，目前國內廠家眾多，有100多個批號，但產品質量參差不齊。本文建立了二甲雙胍的體外溶出測定方法，采用 f2 相似因子法考察了自制鹽酸二甲雙胍片于參比制劑在不同 pH值溶出介質中的溶出行為，評價了二者的體外溶出一致性。

1 儀器與材料

1.1 儀器

LC-10AT型 、LC-2010A型、LC-20A型高效液相色譜儀(均為日本島津)；Shimadzu LC solution色譜工作站(日本島津)；Thermo BioBasic SCX 250×φ4.6 mm 色譜柱(Welch vitimate)，4.6 mm×150 mm 的C18硅膠柱，5 μm；RD12AD溶出儀(天大天發);Tision?Elite 8 TM溶出儀(美國Hanson);UV-2401紫外分光光度計(日本島津)； AE240電子天平(梅特勒-托利)；PHS-3E pH酸度計(上海奧豪斯)

1.2 材料

磷酸二氫銨、磷酸(分析純，天津市風船化學試劑)，十二烷基硫酸鈉(化學純，天津市永大化學試劑)，乙腈(色譜純，天津市康科德科)，鹽酸二甲雙胍仿制片(規格：250 mg，天津康瑞藥業有限公司提供)，純化水，鹽酸二甲雙胍片參比制劑(規格：250 mg，日本新藥株式會社)。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

對照品溶液制備：取鹽酸二甲雙胍的對照品，精密稱定后，用溶出介質溶解并定量稀釋制成 30 μg/mL 的溶液。

供試品溶液制備:取自制片，按照制定的溶出方法，經 15 min 后，取適量溶液，過濾，棄去初濾液 10 mL,精密量取續濾液適量，定量稀釋制成 5 μg/mL 的溶液。

空白溶液制備:取不同 pH 值溶出介質的相應樣品溶液作為空白溶液。

2.2 溶出條件選擇

2.2.1 測定方法選擇

參考日本橙皮書《普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導原則》中鹽酸二甲雙胍片的溶出度方法和中國藥典2020版中鹽酸二甲雙胍片項下溶出度的方法，結合本品的特點進行方法學試驗。

任取各批片劑12片，取溶出介質 1000 mL，設轉速為 50 r/min，依法操作，經5、10、15、20、30、45 min 分別取樣 10 mL，過濾，取續濾液備用，同時向溶出杯中補充 10 mL 溶劑。精密量取續濾液適量，用溶出介質定量稀釋制成 5 μg/mL 的溶液，采用紫外-可見分光光度法，在 233 nm 的波長處測定吸光度；另取對照品，精密稱定，加溶出介質制成 5 μg/mL 的溶液，同法測定，計算每片在各點溶出量[4-6]。

2.2.2 溶出方法選擇

對比《中國藥典》2020年版溶出度與釋放度測定的第一法和第二法，采用 1000 mL pH4.0 醋酸緩沖液為溶出介質，轉速：槳法 50 r/min，籃法 100 r/min。取樣點為:5、10、15、30 min;籃法和漿法在各取樣點的溶出度分別如表1所示。參考上述結果，同時考慮參比制劑也是采用槳法，所以采用槳法能更好地控制質量[5-7]。

表1 不同溶出方法的釋放度測定結果 %

2.2.3 溶出介質的選擇

參考日本溶出度橙皮書中的方法，分別以鹽酸溶液(pH1.2)、醋酸鹽緩沖液(pH4.0)、磷酸鹽緩沖液(pH6.8)，以及水為介質進行比較，轉速設為 50 r/min，溶劑 1000 mL 進行試驗。結果見表2。

表2 4種不同pH介質中的溶出度測定結果 %

綜上，4種溶出介質都可以在 15 min 達到溶出度在85%以上，故采用檢測成本比較低的水比較合適。

2.3 方法學考察

線性關系考察:以pH4.0、pH6.8兩種緩沖液和水為溶出介質，稱取對照品約 5 mg，置于 100 mL 容量瓶中，超聲溶解稀釋搖勻得對照品溶液。分別量取1、1、1、1、2 mL 溶液至100、50、25、10、10 mL 的容量瓶中，加溶出介質稀釋定容，在 233 nm 紫外測定，記錄譜圖，以樣品的質量濃度為橫坐標(X，μg/mL)，峰面積為縱坐標(Y)做線性回歸，分別得到回歸方程Y=0.078X-0.004，r=0.9995(n=5)，Y=0.080x+0.003，R=0.9995(n=5)和Y=0.080X+0.005，r=0.9995。結果表明，在0.553～11.06 μg/mL 之間，鹽酸二甲雙胍的質量濃度與峰面積二者之間線性關系良好。

當溶出介質為pH1.2鹽酸緩沖液時，稱取對照品約 10 mg，置 100 mL 容量瓶中，制成對照品溶液。分別量取1、1、1、3、5 mL 至100、25、10、10、10 mL 的容量瓶中，同法操作，得到回歸方程為Y=0.017X+0.009，r=0.9995(n=5)。由結果可知，在1.099～54.95 μg/mL 之間，鹽酸二甲雙胍質量濃度與峰面積二者之間線性關系良好。

2.4 穩定性試驗

分別以水、pH1.2、pH4.0、pH6.8的4種溶出介質，取溶出度測定項下的樣品溶液分別放置 24 h，定時取樣測定，RSD分別為0.38%、0.326%、0.99%和1.16%。由結果可知，溶液在 24 h 內穩定。

2.5 加樣回收試驗

精密稱取質量62.5、100和 125 mg 的原料(標示量50%、80%和100%)，分別置于 500 mL 容量瓶之中，加入 18 mg 處方輔料藥，加水超聲溶解并稀釋搖勻、濾過，精密量取續濾液 1 mL 置 50 mL 的容量瓶之中稀釋搖勻，經 0.45 μm 濾膜過濾，233 nm 紫外測定。在四種溶出介質中測得的回收率(RSD)分別為99.70%(0.79%)、99.32%(0.36%)、100.17%(0.50%)、100.22%(0.92%)，表明該方法回收率符合要求。

2. 6 溶出一致性評價

仿制和原研藥溶出曲線相似性的比較本文采用相似因子(f2)法。將兩者平均溶出量與進行比較，當f2值高于50，或受試與參比制劑在 15 min 內的溶出量≥85%時，可判定為兩者溶出行為相似。平均溶出量為12片(粒)的均值，結果如表3所示。

表3 仿制制劑與參比制劑溶出曲線相似性比較結果

從表3可知，在4種不同pH值溶出介質中，三批次仿制片與參比制劑的溶出量RSD在第一個取樣時間點均≤20%，在其余取樣時間點均≤10%，且兩者在 15 min 內的溶出量均≥85%，可以做出兩者溶出行為相似的判斷，兩者具有體外溶出曲線一致性[10-12]。4種溶出介質中的溶出曲線比較如圖1所示。

圖1 仿制制劑和原研制劑在4種溶出介質中的溶出曲線

2.7 有關物質檢查

有關物質的測定根據中國藥典2020版鹽酸二甲雙胍片項下關物質的色譜條件和系統適應性試驗進行。利用高效液相色譜法分別測定三批參比制劑及自制制劑的有關物質，結果如表4。表4表明，有關物質測定結果符合規定，其分離度和理論塔板數均能達到要求[13-15]。

表4 鹽酸二甲雙胍仿制藥與原研藥有關物質含量測定結果

2.8 含量測定

參考日本藥局方2017版鹽酸二甲雙胍項下含量測定的方法，采用HPLC法對樣品進行含量測定。測定結果如表5所示，均符合質量標準的要求。

表5 含量測定結果

3 結論

溶出曲線的相似性并不能代表仿制與原研藥之間一定生物等效，但能降低臨床療效差異出現的風險，為二甲雙胍片的安全性、有效性提供一定保證。本文選擇了3批原研鹽酸二甲雙胍片和三批仿制片， 在pH1.2、pH4.0、pH 6.8和水4種不同溶出介質進行溶出試驗，并考察建立適合的溶出曲線測定方法，從相似性評價結果得出，仿制藥鹽酸二甲雙胍片樣品(0.25 g)與日本新藥株式會社生產的鹽酸二甲雙胍片(250 mg)具有體外質量一致性。