麝香壯骨膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的探究

蔡亞婷，雷王嘯，于金燕

（東阿阿華醫(yī)療科技有限公司，山東 聊城 252000）

0 引言

麝香壯骨膏能夠起到活血、止痛和消炎的作用。早期，該藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)主要被收錄在衛(wèi)健委所頒布的藥品標(biāo)準(zhǔn)中。2006 年，食品藥品監(jiān)管局頒布了全新標(biāo)準(zhǔn)，新標(biāo)準(zhǔn)對原處方進(jìn)行了調(diào)整，同時(shí)新增了包括薄層檢查在內(nèi)的內(nèi)容。考慮到新標(biāo)準(zhǔn)仍存在一定的缺陷，有關(guān)人員決定對該藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行更加系統(tǒng)且深入的探究，希望能夠使質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)得到完善，為藥品功效與質(zhì)量提供保障。

1 研究背景

作為以當(dāng)歸、白芷和蒼術(shù)為原藥材，加入樟腦、冰片等藥物所制備橡膠貼膏，麝香壯骨膏具有消炎和鎮(zhèn)痛的效果，可用來緩解扭傷、挫傷和關(guān)節(jié)痛，還有其他原因引起的肌肉酸痛[1]。關(guān)于該藥物的標(biāo)準(zhǔn)主要有兩個(gè)，一個(gè)是由衛(wèi)健委所頒布的藥品標(biāo)準(zhǔn)，另一個(gè)是由食品藥品監(jiān)管局所頒布的藥品標(biāo)準(zhǔn)。其中，前者只寫明了藥物性狀鑒別依據(jù)、貼膏劑檢查項(xiàng)目，后者在此基礎(chǔ)上新增了薄層檢查、氣相色譜鑒別和成分含量測定等內(nèi)容。在本項(xiàng)目中，研究人員計(jì)劃通過TLC 鑒別蒼術(shù)、白芷還有當(dāng)歸，通過GC 測定冰片及樟腦含量，通過HPLC 確定鹽酸苯海拉明濃度。

2 實(shí)驗(yàn)方案

2.1 前期準(zhǔn)備

2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器研究開始前，先要準(zhǔn)備以下儀器：梅特勒公司生產(chǎn)的電子天平、氣相色譜儀、對流烘干箱、超純水儀。

2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

本項(xiàng)目需要用到以下試劑：白芷藥材、蒼術(shù)素對照品、當(dāng)歸藥材、歐前胡素、萘、冰片、樟腦、鹽酸苯海拉明、色譜純的甲醇和乙酸乙酯、超純水、由不同供貨商所提供麝香壯骨膏10 份。

2.2 鑒別TLC

2.2.1 TLC 介紹

TLC 要求先將固定相均勻涂抹在塑料、鋁基片或是玻璃板的表面，等到固定相點(diǎn)樣并展開，再對不同物質(zhì)的比移植進(jìn)行分析，從而確定藥物成分和雜質(zhì)含量[2]。作為能夠快速分離成分并進(jìn)行定量分析的技術(shù)，TLC已在藥物測定等領(lǐng)域得到廣泛運(yùn)用，其優(yōu)點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下方面：首先，操作難度低，可快速顯色。其次，展開速度快，通常能夠在15～20min 內(nèi)完成展開。最后，分辨率高，既能夠分離0.01μg 左右的樣品，又可以分離500mg 以上的樣品。當(dāng)然，該方法也存在著明顯的不足，即無法被用來分離生物高分子，這點(diǎn)需要有所了解。

2.2.2 鑒別方法

（1）白芷。

實(shí)驗(yàn)開始前，需要制備供試品溶液，做法如下：取2片樣品，將蓋襯去除并剪成小塊，將樣品放入50mL 的甲醇溶液中，進(jìn)行1h 的水浴回流，過濾并蒸干濾液，向盛有殘?jiān)娜萜鲀?nèi)倒入1mL 甲醇溶液，殘?jiān)耆芙夂髠溆谩Ｈ∵m量對照品，加入甲醇溶液，獲得對照品溶液，保證溶液所含對照品濃度為0.5mg/mL[3]。再取1g 白芷對照藥材，并將其轉(zhuǎn)移到提前準(zhǔn)備好的容器內(nèi)，向容器中倒入20mL 甲醇溶液，進(jìn)行30min 的超聲處理，隨后，過濾并蒸干濾液，加入1mL 的甲醇溶液，確保殘?jiān)耆芙狻Ｗ詈笠徊剑瑢φ仗幏街苽潢幮匀芤杭皹悠贰＠帽由V法測定樣品，吸取提前制備的3 種溶液，將溶液滴加到硅膠G 板表面，加入由乙酸乙酯和正己烷所制備的展開劑（二者質(zhì)量比為1:3），待其完全展開，盡快取出并晾干，通過365nm 的紫外光燈進(jìn)行檢視，發(fā)現(xiàn)供試品所出現(xiàn)熒光斑點(diǎn)的顏色、位置和對照藥材、對照品完全相同，另外，陰性對照未受到干擾。

（2）蒼術(shù)。

先制備供試品溶液，再取適量蒼術(shù)素對照品并加入甲醇溶液，獲得濃度為1mg/mL 的對照品溶液，隨后，嚴(yán)格按照處方要求制備陰性溶液及樣品，通過薄層色譜法進(jìn)行測定，晾干樣品后，在其表面均勻噴10%濃度的硫酸乙醇，均勻加熱樣品，直至樣品表面出現(xiàn)清晰的斑點(diǎn)，再利用紫外光燈觀察樣品。檢視發(fā)現(xiàn)，供試品熒光斑點(diǎn)顏色、位置和對照品完全相同，且陰性對照未受到干擾。

（3）當(dāng)歸。

先制備供試品溶液，再取1g 對照藥材，將藥材浸入20mL 的甲醇溶液中，進(jìn)行30min 的加熱回流，隨后，過濾并蒸干濾液，用1mL 的甲醇溶液溶解殘?jiān)@得對照溶液。嚴(yán)格按照處方要求制備陰性溶液及樣品。通過薄層色譜法對當(dāng)歸含量進(jìn)行測定，具體測定步驟如下：①吸取提前制備的3 種溶液，保證每種溶液的吸取量均為5μL。②將不同溶液滴到同一塊硅膠G 板的表面。③加入由甲酸、乙醚和石油醚所制備的展開劑（三者質(zhì)量比為0.1:1:5），待其展開盡快取出并晾干。④利用紫外光燈進(jìn)行檢視。檢視結(jié)果表明，供試品所出現(xiàn)熒光斑點(diǎn)的顏色、位置和對照藥材完全一致，同時(shí)陰性對照沒有受到干擾，測定結(jié)果具有實(shí)際意義。

2.3 測定含量

2.3.1 GC 介紹

GC 法是指以氣體為移動(dòng)相對指定物質(zhì)進(jìn)行測定的方法，按照固定相可將其分成氣液色譜法、氣固色譜法。該方法的優(yōu)勢和不足均十分明顯，優(yōu)勢為分離及分析速度快，可將分析樣品的時(shí)長控制在20min 以內(nèi)。僅需要用到少量樣品，便能夠得出相應(yīng)的結(jié)論，且測定靈敏性良好。具有理想的分離性與選擇性。適用范圍廣，既能夠分析揮發(fā)有機(jī)物、氣體，還可以分析固體和沸點(diǎn)較高的物質(zhì)。其不足則體現(xiàn)為在定性分析過程中，通常需要先對比已知數(shù)據(jù)和色譜峰，才能得出相應(yīng)的結(jié)論。定量分析期間，往往要校正測定所輸出信號，才能確保最終結(jié)果與實(shí)際情況相符。

在本項(xiàng)目中，研究人員決定通過GC 法測定產(chǎn)品所含冰片及樟腦的濃度。其中，色譜柱為毛細(xì)管柱，進(jìn)樣溫度始終維持在220℃左右，23min 內(nèi)，柱溫可控制在150℃左右，流速能夠達(dá)到1mL/min 以上。檢測器選用FID，運(yùn)行溫度為250℃。除特殊情況外，進(jìn)樣量均為2μL，對應(yīng)分流比則為15:1[4]。

2.3.2 制備不同溶液

（1）內(nèi)標(biāo)溶液。

稱取適量萘，加入一定量乙酸乙酯，確保所制備溶液的萘濃度為5mg/mL。

（2）供試品溶液。

稱取170cm2產(chǎn)品，將蓋襯去除并剪成長條，將條狀樣品轉(zhuǎn)移到燒瓶內(nèi)（燒瓶容量為250mL），向燒瓶內(nèi)倒入100mL 潔凈水，利用揮發(fā)油測定法進(jìn)行測定，測定期間向測定器內(nèi)勻速傾倒?jié)崈羲芤阂缌鞯綗績?nèi)，盡快加入2mL 甲苯，隨后，進(jìn)行為期3h 的加熱回流，溶液徹底冷卻后，再將測定器內(nèi)溶液轉(zhuǎn)移到提前準(zhǔn)備好的分液漏斗內(nèi)，確保有機(jī)溶劑層完全分離。向容量為25mL 的量瓶內(nèi)倒入5mL 預(yù)制內(nèi)標(biāo)溶液，使用乙酸乙酯充分沖洗測定器、分液漏斗還有冷凝管，將洗滌液統(tǒng)一轉(zhuǎn)移到量瓶內(nèi)并加入適量乙酸乙酯進(jìn)行定容，量瓶內(nèi)溶液達(dá)到25mL 后，將其充分搖勻即可。

（3）對照品貯備液。

稱取適量冰片和樟腦，將對照品放入乙酸乙酯中，確保其能夠完全溶解，且所得到混合液的濃度分別是5.27mg/mL 及5.47mg/mL。

2.3.3 開展相關(guān)實(shí)驗(yàn)

（1）適用性。

稱取適量內(nèi)標(biāo)溶液、對照品貯備液，向溶液內(nèi)加入一定量的乙酸乙酯，確保稀釋后溶液濃度滿足研究要求。隨后，吸取適量供試品溶液、稀釋后溶液并進(jìn)樣，如實(shí)記錄樣品色譜。分析色譜圖能夠發(fā)現(xiàn)，樣品所含冰片等成分均滿足基線分離的要求，同時(shí)各成分的分離度都能夠達(dá)到1.5 以上，由此可見，上述方法具備良好的適用性，利用該方法進(jìn)行檢測所得出結(jié)果與實(shí)際情況相符。

（2）精密性。

隨機(jī)取1 組對照品溶液并進(jìn)行6 次進(jìn)樣處理，記錄每次進(jìn)樣后的內(nèi)標(biāo)峰、其他峰面積，計(jì)算其比值。結(jié)果表明，本項(xiàng)目所采取研究方法具有良好的精密性。

（3）穩(wěn)定性。

先確定測定所用供試品溶液，在12h 時(shí)間內(nèi)，每隔2h 進(jìn)行一次進(jìn)樣，如實(shí)記錄每次進(jìn)樣后的峰面積。結(jié)果表明，12h 內(nèi)供試品溶液具有良好的穩(wěn)定性。

（4）重復(fù)性。

取3 份樣品，制備供試品溶液并完成進(jìn)樣測定，對內(nèi)標(biāo)峰、其他峰面積的比值進(jìn)行計(jì)算。

（5）回收性。

取3 份平行樣品，每份樣品均為90cm2，將蓋襯去除并剪成長條，隨后，將條狀樣品轉(zhuǎn)移到燒瓶內(nèi)（燒瓶容量為250mL），確保所制備溶液的冰片、樟腦濃度分別是10.85mg/mL 以及8.95mg/mL。待上述工作告一段落，盡快對供試品溶液進(jìn)行制備并測定不同成分含量，具體做法如下：取2 份平行樣品，按照上述方法對實(shí)驗(yàn)所需供試品溶液進(jìn)行制備，計(jì)算樣品冰片和樟腦的含量，并根據(jù)測定結(jié)果確定回收率。

3 結(jié)果討論

3.1 鑒別TLC

市面上常見的蒼術(shù)主要分為北蒼術(shù)、茅蒼術(shù)兩類，雖然兩種蒼術(shù)均含有蒼術(shù)酮以及蒼術(shù)素，但蒼術(shù)素濃度偏低，極易出現(xiàn)檢測結(jié)果為零的情況。分析薄層色譜可知，本次抽檢樣品中，共有7 組樣品有明顯的蒼術(shù)素斑點(diǎn)，而剩余樣品并沒有出現(xiàn)斑點(diǎn)，為解決該問題，研究人員決定調(diào)整點(diǎn)樣量，將點(diǎn)樣量增加到10μL，對比經(jīng)過調(diào)整的樣品和蒼術(shù)樣品能夠發(fā)現(xiàn)，增加點(diǎn)樣量后，仍有2 組樣品沒有出現(xiàn)斑點(diǎn)，剩余1 組樣品則出現(xiàn)了和偽品蒼術(shù)相同的蒼術(shù)素斑點(diǎn)，由此可見，蒼術(shù)素斑點(diǎn)顏色主要取決于投料量、飲片質(zhì)量和生產(chǎn)工藝[5]。

分析白芷薄層可知，僅有1 組樣品沒有出現(xiàn)和對照組相同的斑點(diǎn)，剩余樣品均有黃色斑點(diǎn)，這表示本次抽檢樣品中有9 組樣品滿足生產(chǎn)要求。在這9 組樣品中，有1 組樣品和其他樣品存在明顯區(qū)別，還有2 組樣品存在斑點(diǎn)顏色偏淺的情況，導(dǎo)致該情況出現(xiàn)的原因是不同供貨商的原料質(zhì)量、投料標(biāo)準(zhǔn)以及所采用生產(chǎn)工藝均有所不同。

3.2 測定含量

3.2.1 鹽酸苯海拉明

麝香壯骨膏產(chǎn)品所含鹽酸苯海拉明能夠抑制患者的過敏反應(yīng)[6]。本項(xiàng)目中，研究人員選擇按照法定標(biāo)準(zhǔn)，對不同樣品所含該物質(zhì)濃度進(jìn)行測定，測定所用方法為HPLC，即將液體作為流動(dòng)相，通過輸液系統(tǒng)將不同流動(dòng)相注入對應(yīng)色譜柱，待柱內(nèi)成分完全分離，再利用檢測器完成后續(xù)檢測。該方法具有一廣四高的特點(diǎn)，一廣是指適用范圍廣，四高則是指效能高、靈敏性高、高壓以及高速。結(jié)果表明，研究所抽取樣品該成分的濃度均在0.0013～0.101mg/cm2，平均濃度是0.051mg/cm2。由此可見，不同供貨商所提供產(chǎn)品的鹽酸苯拉海明濃度均有所不同，少數(shù)供貨商所提供產(chǎn)品成分并不符合處方要求。考慮到該物質(zhì)極易受到外界因素影響，長期處在熱、光和濕的環(huán)境下，有較大概率發(fā)生氧化降解反應(yīng)，進(jìn)而析出二苯酮，在生產(chǎn)期間，供貨商應(yīng)嚴(yán)格控制該成分的用量，除特殊情況外，其濃度均處在0.048～0.07mg/cm2。本次抽檢樣品中，共有6 組樣品不符合該要求。

3.2.2 揮發(fā)成分

麝香壯骨膏含有多種揮發(fā)油類成分，既包括本文所討論的冰片、樟腦，同時(shí)還有水楊酸甲酯和薄荷腦，上述成分均能夠起到消炎、鎮(zhèn)痛的作用。本文所提出方法可同時(shí)測定不同揮發(fā)成分濃度，其中，樣品冰片濃度處于0.091～0.334mg/cm2，平均濃度是0.193mg/cm2，樣品樟腦濃度則處在0.075～0.307mg/cm2，對應(yīng)平均值是0.166mg/cm2。

由此可見，不同供貨商所提供產(chǎn)品的揮發(fā)成分含量不盡相同，產(chǎn)品功效和質(zhì)量也存在明顯差別。生產(chǎn)期間，應(yīng)對投料量嚴(yán)格控制，根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整生產(chǎn)工藝，盡量避免揮發(fā)成分由于加熱而隨著溶媒蒸發(fā)。如果條件允許，應(yīng)加大對揮發(fā)成分加以控制的力度，在改善產(chǎn)品質(zhì)量的同時(shí)，使各供貨商所提供產(chǎn)品所表現(xiàn)出穩(wěn)定性及均一性達(dá)到預(yù)期[7]。法定標(biāo)準(zhǔn)明確指出，樟腦含量不得低于0.12mg/cm2，其含量限度值能夠達(dá)到投料的40%左右，對應(yīng)冰片含量同樣應(yīng)當(dāng)達(dá)到0.12mg/cm2或以上。本次抽檢樣品中，共有2 組樣品的樟腦含量不符合要求，1 組樣品的冰片含量不符合要求。

4 結(jié)語

麝香壯骨膏所采取檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)相對簡單，既無法達(dá)到檢驗(yàn)要求，又無法起到控制產(chǎn)品質(zhì)量的作用。鑒于此，研究人員決定參考現(xiàn)行檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，對產(chǎn)品所含蒼術(shù)、鹽酸苯拉海明等成分進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明，該方法能夠有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，確保產(chǎn)品發(fā)揮出應(yīng)有功效，可以大范圍推廣。