不同背膘厚度對(duì)松遼黑豬豬肉品質(zhì)及脂肪相關(guān)基因表達(dá)的影響

陳少康，陳 沛，席鈺菲，鄭美麗，郭 峰，邢 凱，王曉鳳*

1.北京市畜牧總站，北京 100107；2.甘肅省定西市通渭縣平襄鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，甘肅定西 743300；3.北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京 102206

豬肉是人類膳食結(jié)構(gòu)中重要的肉食品之一，生豬養(yǎng)殖在我國(guó)畜牧業(yè)生產(chǎn)中占有舉足輕重的地位，豬肉產(chǎn)品的特性與國(guó)家所處的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)環(huán)境密切相關(guān)[1]。20 世紀(jì)以來(lái)，為了提高生產(chǎn)效率，豬的目標(biāo)性狀主要是生長(zhǎng)速度、飼料轉(zhuǎn)化率和胴體瘦肉率。憑借背膘厚度與胴體瘦肉率之間存在著很高的遺傳相關(guān)（rA=-0.6 ～-0.7），以及超聲波掃描儀地應(yīng)用，加速了胴體瘦肉率的遺傳進(jìn)展，使得肉豬生產(chǎn)水平得到了提高。由于生長(zhǎng)速度與肉質(zhì)性狀間存在拮抗，生長(zhǎng)速度提高的同時(shí)，也導(dǎo)致肉質(zhì)適口性差，缺少風(fēng)味，降低了消費(fèi)者對(duì)肉質(zhì)的滿意度。隨著人民生活水平的提高及對(duì)優(yōu)質(zhì)豬肉的追求，豬育種目標(biāo)也發(fā)生了變化。影響豬肉品質(zhì)的肌內(nèi)脂肪含量（IMF）性狀已相繼被各國(guó)列入育種目標(biāo)，成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)。

脂肪組織中的強(qiáng)脂肪酸合成能力是影響背膘厚度的最關(guān)鍵因素，同時(shí)其在脂肪組織和肝臟組織中的代謝也有一定的調(diào)節(jié)作用。在之前的研究中，基本上所有的從頭合成脂肪酸發(fā)生在脂肪組織。其中FASN 基因編碼脂肪酸合成酶[2]、ACACA 基因編碼乙酰輔酶A 羧化酶和ME1 基因編碼的蘋(píng)果酸酶，均被發(fā)現(xiàn)在脂肪酸和不飽和脂肪酸的合成過(guò)程[3]，都是直接參與脂肪酸的從頭合成過(guò)程。

本研究旨在分析肉質(zhì)性狀的背膘厚度效應(yīng)，即不同背膘厚度對(duì)豬肉品質(zhì)性狀的影響，以達(dá)到根據(jù)活體背膘厚度選育具有更優(yōu)肉品質(zhì)的豬種的目的。同時(shí)對(duì)相關(guān)脂肪合成基因的表達(dá)分析，找到與肌內(nèi)脂肪生產(chǎn)相關(guān)的候選基因，并在后續(xù)的優(yōu)質(zhì)豬肉品種（系）選育中提供分子育種素材，加快選育、培育進(jìn)展。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)群體

本研究所用的試驗(yàn)群體來(lái)自天津市寧河原種豬場(chǎng)，松遼黑豬共52 頭，相同條件下同批飼養(yǎng)至100 kg 左右進(jìn)行屠宰。

1.2 極端群體選擇

使用HONGDA HS-1500 型獸用B 超儀在豬倒數(shù)第3、4 肋間距背中線5 cm 處進(jìn)行背膘厚度的測(cè)定，校正后選出背膘厚度極端高與極端低的個(gè)體各6頭，分別作為松遼黑豬背膘厚度高組（BH）和低組（BL）。

1.3 屠宰與取樣

屠宰在符合生豬屠宰操作規(guī)程（GB/T 17236-2008）下進(jìn)行。屠宰后，對(duì)左側(cè)胴體進(jìn)行胴體背膘厚度的測(cè)定，并截取在倒數(shù)3、4 肋至最后肋的背最長(zhǎng)肌進(jìn)行肉質(zhì)測(cè)定。

1.4 背膘厚度與肉質(zhì)性狀測(cè)定

背膘厚度：在豬左側(cè)胴體背中線上，用數(shù)顯游標(biāo)卡尺測(cè)量耆甲部、胸腰結(jié)合部、腰薦結(jié)合部三點(diǎn)不含皮的脂肪厚度，取平均值；肉色與pH 值：屠宰24 h 后，利用CR-410 色彩色差計(jì)和pH-STAR 測(cè)定儀在倒數(shù)3、4 肋的背最長(zhǎng)肌橫截面處分別進(jìn)行肉色和pH 值的測(cè)定；剪切力：取倒數(shù)3、4 肋處的背最長(zhǎng)肌，利用C-LM4 數(shù)顯式肌肉嫩度儀對(duì)樣品的剪切力進(jìn)行測(cè)定，作為豬肉嫩度的指標(biāo)；滴水損失：將樣品測(cè)重后放入密封容器中至于4 ℃冰箱中，分別測(cè)定24 h 和48 h 的重量，計(jì)算滴水損失。

1.5 PCR 反應(yīng)體系

用Oligo 6 軟件根據(jù)GenBank 中提供的檢測(cè)基因的mRNA 序列設(shè)計(jì)定量引物。熒光定量PCR 反應(yīng)體 系：SYBR Rremix Ex Taq(2×)10.4 μL， 上、下游引物0.4 nmol/L，cDNA 模板1.0 μL，總體積20.0 μL。反應(yīng)條件是：95 ℃預(yù)變性10 s，95 ℃變性5 min，60 ℃復(fù)性34 s，共40 個(gè)循環(huán)。以GAPDH 為內(nèi)參，采用 2-△△Ct法計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 8.0 軟件T-test 過(guò)程對(duì)兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 極端個(gè)體的選擇及校正背膘厚度的比較

本研究共測(cè)定了松遼黑豬52 頭,每組極端個(gè)體選出了6 頭，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明：兩組的個(gè)體背膘厚度、體重和校正到100 kg 體重背膘厚度差異極顯著（p＜0.01），見(jiàn)表1。

表1 不同背膘厚度性狀的比較

2.2 肉質(zhì)性狀比較

不同背膘厚度松遼黑豬肉品質(zhì)性狀之間的比較發(fā)現(xiàn)，只有肌內(nèi)脂肪含量達(dá)到了顯著水平（p＜0.05），其它性狀在2 個(gè)分組中沒(méi)有差異（p＞0.05）。背膘厚度高組的肌內(nèi)脂肪（3.60±1.23）顯著高于背膘厚度低組（2.09±0.84）。不同背膘厚度分組之間的豬肉品質(zhì)性狀差異見(jiàn)表2。

表2 不同背膘厚度松遼黑豬之間肉品質(zhì)性狀測(cè)定結(jié)果

2.3 脂肪生成關(guān)鍵基因的表達(dá)

對(duì)兩組背最長(zhǎng)肌組織的脂肪生成相關(guān)基因表達(dá)水平分析表明，F(xiàn)ASN 基因在厚背膘組中顯著升高（p＜0.05）。ME1 基因和ACACA 基因在兩組中的表達(dá)水平?jīng)]有差異性（p＞0.05）。

3 討論

研究表明，豬的背膘厚度與瘦肉率呈負(fù)相關(guān)。過(guò)去的幾十年里，豬育種的目的主要是降低背膘厚度，進(jìn)而提高瘦肉率，而背膘厚度的降低被認(rèn)為是豬肉質(zhì)變差的主要原因。在本研究中，高背膘厚度組與低背膘厚度組的肉質(zhì)性狀除肌內(nèi)脂肪含量外，其它所測(cè)指標(biāo)并沒(méi)有顯著差異。由此可知，肌內(nèi)脂肪含量可以作為評(píng)價(jià)肉質(zhì)的最主要標(biāo)準(zhǔn)之一。

脂肪酸合成酶、乙酰輔酶A 羧化酶是機(jī)體脂肪合成路徑中的限速酶，決定脂肪合成能力的強(qiáng)弱，影響體脂沉積量；蘋(píng)果酸酶是提供脂肪合成的NADPH，參與脂肪酸生物合成代謝過(guò)程。在高背膘厚組的松遼黑豬的脂肪組中，F(xiàn)ASN、ACACA 和ME1的表達(dá)均高于低背膘厚度組，但只有FASN 的表達(dá)水平在兩組間達(dá)到顯著水平。FASN 參與脂肪沉積，F(xiàn)SAN基因多態(tài)性位點(diǎn)對(duì)豬脂肪酸沉積有顯著影響。研究表明，F(xiàn)ASN 的表達(dá)水平與IMF 呈顯著正相關(guān)，F(xiàn)ASN 在高IMF 含量豬中的表達(dá)水平顯著高于低IMF 含量的豬,這與本研究結(jié)果一致。本研究中，ACACA 基因和ME1 基因表達(dá)水平在不同組之間差異并不顯著，可能與后期脂肪細(xì)胞肥大、脂肪沉積準(zhǔn)備過(guò)程并不活躍相關(guān)。

4 結(jié)論

兩個(gè)極端背膘厚度組的肉質(zhì)比較結(jié)果顯示，肌內(nèi)脂肪含量有著顯著的差異，F(xiàn)ASN 基因的表達(dá)水平在兩組之間存在顯著差異。以上研究結(jié)果不僅為了解不同活體背膘厚度對(duì)豬肉品質(zhì)的影響提供了參考，而且也為優(yōu)質(zhì)豬肉品種（系）的分子育種提供技術(shù)支撐。