逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性研究進(jìn)展

廖燕科 藍(lán)素桂 蘇愛秋 彭燕鴻 譚強(qiáng)

摘要：細(xì)菌耐藥性是治療細(xì)菌感染類疾病失敗的主要原因，尋找高效、低毒的逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性策略成為了治療細(xì)菌感染的研究熱點(diǎn)。本文就逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性機(jī)制與策略等進(jìn)行綜述，為解決細(xì)菌耐藥性問題、開發(fā)新型抗生素提供研究方法與思路。

關(guān)鍵詞：細(xì)菌耐藥性；逆轉(zhuǎn)耐藥；細(xì)菌感染；機(jī)制與策略

中圖分類號：R978.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Abstract The bacterial resistance is the main cause of failure in the treatment of bacterial infection. Effective and low-toxicity strategies to reverse the bacterial resistance have become a popular research field. In this paper， the mechanisms and strategies of reversing the bacterial resistance were reviewed to provide the research methods and ideas for solving the bacterial resistance problem.

Key words Bacterial resistance; Reverse drug resistance; Bacterial infection; Mechanisms and strategies

細(xì)菌耐藥性是指在常規(guī)治療劑量下細(xì)菌對藥物的敏感性下降甚至消失，導(dǎo)致藥物對病原菌的療效降低或者無效 [1]。細(xì)菌耐藥性分為固有耐藥性和獲得性耐藥，固有耐藥性即天然耐藥性或通過突變產(chǎn)生的耐藥性，是細(xì)菌染色體遺傳基因介導(dǎo)的耐藥性；而獲得性耐藥是指細(xì)菌與抗菌藥物接觸后，自身代謝途徑發(fā)生改變，使其不易被抗菌藥物殺滅或抑制，是細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的主要原因[2]，可通過接合、轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)等方式使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性 [3]。

1928年青霉素首次發(fā)現(xiàn)以來[1]，各種抗生素相繼被開發(fā)出來。大量抗生素被用于治療細(xì)菌感染，導(dǎo)致細(xì)菌對抗生素產(chǎn)生耐藥性[4]。1959年首次發(fā)現(xiàn)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）以及2010年發(fā)現(xiàn)的新德里“超級細(xì)菌”，都能抵抗當(dāng)前人類大部分抗生素[5]。

MRSA和新德里“超級細(xì)菌”從發(fā)現(xiàn)至今已幾乎傳播遍及全球，成為院內(nèi)和社區(qū)感染的危險病原菌，嚴(yán)重威脅人類的健康。世界衛(wèi)生組織（WHO）全球抗生素耐藥報告顯示，細(xì)菌耐藥性每年導(dǎo)致70萬人死亡；預(yù)計到2050年，全球因細(xì)菌耐藥性感染問題所消耗的醫(yī)療成本將達(dá)100萬億美元，每年死亡人數(shù)將達(dá)1000萬[6]，這將給人類健康和經(jīng)濟(jì)發(fā)展造成嚴(yán)重威脅。

細(xì)菌耐藥性的發(fā)展速度越來越快，新型抗生素的研發(fā)速度已跟不上細(xì)菌耐藥性的發(fā)展速度[7]。為解決不斷出現(xiàn)的細(xì)菌耐藥性問題，科學(xué)家們致力于尋找高效、低毒的細(xì)菌耐藥性逆轉(zhuǎn)策略，恢復(fù)菌株對抗生素的敏感性。在20世紀(jì)80年代國內(nèi)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)某些中草藥提取物具有恢復(fù)菌株對抗菌藥物的敏感性，從此中草藥作為細(xì)菌耐藥逆轉(zhuǎn)劑被廣泛研究和臨床使用[8]。在2012年日本科學(xué)家Hiramatsu等[9]在研究尼博霉素對Mu50（一株耐喹諾酮類的MRSA菌株）的作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)尼博霉素能恢復(fù)菌株對喹諾酮類抗生素的敏感性，提出了逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性可能是解決細(xì)菌耐藥性問題的關(guān)鍵措施。除此之外，某類吲哚信號分子也被證實(shí)具有逆轉(zhuǎn)細(xì)菌固有耐藥性的潛力，這一發(fā)現(xiàn)為消除細(xì)菌耐藥性提供新的思路[10]。

1 耐藥逆轉(zhuǎn)機(jī)制

逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性的機(jī)制主要是通過阻斷或抑制細(xì)菌耐藥性機(jī)制。不同微生物對不同抗生素產(chǎn)生的耐藥機(jī)制不同，因此逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性的機(jī)制也不盡相同。逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性的機(jī)制主要包括消除耐藥質(zhì)粒、抑制主動外排泵、抑制生物被膜形成和抑制耐藥基因表達(dá)等（圖1）。

1.1 消除耐藥質(zhì)粒

細(xì)菌對抗生素產(chǎn)生耐藥性，可以通過獲得耐藥性質(zhì)粒實(shí)現(xiàn)的。質(zhì)粒介導(dǎo)的抗生素耐藥性基因可通過接合、轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)等方式在不同種屬細(xì)菌間迅速傳播，使得細(xì)菌耐藥性迅速發(fā)展[12]。研究表明，可通過藥物消除劑或基因編輯技術(shù)抑制耐藥質(zhì)粒復(fù)制，從而消除部分或全部耐藥質(zhì)粒，恢復(fù)細(xì)菌對抗生素的敏感性[11-13]。十二烷基磺硫酸鈉（SDS）是常用的質(zhì)粒消除劑，其消除機(jī)制為SDS溶解菌株內(nèi)膜蛋白，破環(huán)細(xì)胞膜完整性，改變質(zhì)粒在細(xì)胞膜上的結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致耐藥質(zhì)粒不能完成復(fù)制而達(dá)到消除目的；藥物消除劑還可以通過水解質(zhì)粒復(fù)制所需的酶來達(dá)到消除質(zhì)粒的目的[12]（圖1a）。SDS具有消除細(xì)菌耐藥質(zhì)粒的作用，但由于其本身對動物機(jī)體有較強(qiáng)的毒副作用，故不適于體內(nèi)應(yīng)用。

1.2 抑制主動外排泵

外排泵耐藥機(jī)制是當(dāng)抗菌藥物進(jìn)入細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)，會激活細(xì)菌內(nèi)膜的外排蛋白，將藥物排出，降低胞內(nèi)藥物濃度[14]。外排泵家族的組成主要包括多藥及毒性化合物外排家族（MATE）、易化子超家族（MFS）、小多重耐藥家族（SMR）、耐藥結(jié)節(jié)化細(xì)胞分化家族（RND）和ATP結(jié)合盒超家族（ABC）等。其中，ABC類外排泵是利用ATP水解釋放的能量排出膜內(nèi)藥物，其余4類均通過質(zhì)子進(jìn)入膜內(nèi)形成濃度差所產(chǎn)生的勢能提供質(zhì)子驅(qū)動力為能量，從而將藥物外排至膜外[15]。抑制主動外排泵可通過干擾外排泵的表達(dá)和組裝、阻斷能量來源以及阻礙底物通過外排通道等機(jī)制發(fā)揮作用[16]（圖1b）。若主動外排泵作用減弱，細(xì)菌對抗生素的敏感性也隨之而增加[16]。

1.3 抑制生物被膜形成

生物被膜是細(xì)菌生長繁殖過程中分泌的胞外多糖、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)等物質(zhì)，使抗菌藥物不能穿透胞外基質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)菌對抗菌藥物的敏感性降低，是細(xì)菌耐藥的重要機(jī)制[17]。抑制生物被膜形成，對逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性有極大的增強(qiáng)作用[18]；生物被膜的生命周期包含4個階段：①初始黏附；②形成微菌落；③生長和成熟：刺激群體感應(yīng)（QS）系統(tǒng)產(chǎn)生群體感應(yīng)信號分子；④釋放：呈浮游菌狀態(tài)。抑制生物膜的形成機(jī)制包括阻斷浮游菌的附著、阻斷QS系統(tǒng)和降低胞外多聚糖（EPS）基質(zhì)等（圖1c）。浮游菌可通過絨毛或鞭毛使細(xì)菌移動到一個新的位置，再次形成生物被膜引起感染；因此，清除細(xì)菌絨毛或鞭毛可阻斷浮游菌的附著，減少生物被膜的形成[18]。細(xì)菌生物被膜形成、細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生和毒力因子都受QS系統(tǒng)的調(diào)控，可通過QS抑制劑干擾或抑制該現(xiàn)象。QS抑制劑主要通過抑制QS自體誘導(dǎo)物信號分子的產(chǎn)生、降解QS自體誘導(dǎo)信號分子與QS自體誘導(dǎo)物信號分子競爭受體[19]。EPS基質(zhì)在生物被膜的形成中發(fā)揮重要作用，降低EPS生物被膜基質(zhì)可通過降解多種分子包括胞外多糖、胞外蛋白質(zhì)、胞外DNA和脂類等[20]。

1.4 抑制耐藥基因表達(dá)

耐藥基因是編碼細(xì)菌耐藥性的一段核苷酸序列，是細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的重要因素。耐藥基因位于細(xì)菌染色體上或位于染色體外的質(zhì)粒。通過抑制耐藥基因表達(dá)，可以恢復(fù)耐藥細(xì)菌對相應(yīng)抗生素的敏感性。另外，通過抑制耐藥基因的表達(dá)可以達(dá)到消除耐藥質(zhì)粒、抑制主動外排泵和生物被膜形成的作用，從而恢復(fù)細(xì)菌對抗菌藥物的敏感性[21]。利用SDS從耐藥E. coli中消除質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥基因mcr，消除耐藥基因后的菌株對多黏菌素敏感，證明消除耐藥基因可以恢復(fù)耐藥菌株對相應(yīng)抗生素的敏感性[12]。

除了以上4種逆轉(zhuǎn)耐藥機(jī)制外，還可通過改變細(xì)胞膜通透性、抑制β-內(nèi)酰胺酶活性、破壞細(xì)胞質(zhì)膜的形成等機(jī)制提高細(xì)菌對抗生素的敏感性，但對于其逆轉(zhuǎn)機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

2 耐藥逆轉(zhuǎn)策略研究

細(xì)菌耐藥性現(xiàn)象已成為全球面臨的一大公共衛(wèi)生難題，研究人員在研究細(xì)菌耐藥機(jī)制的同時，也聚焦于如何恢復(fù)耐藥菌對抗菌藥物的敏感性。本文總結(jié)了逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥的策略，主要包括聯(lián)合用藥、反義療法、外排泵抑制劑（EPI）和基因敲除等。

2.1 聯(lián)合用藥

通過兩種或兩種以上的藥物聯(lián)合使用，發(fā)揮藥物間的協(xié)同或相加作用，從而提高細(xì)菌對抗菌藥物的敏感性。在臨床治療細(xì)菌感染時，聯(lián)合用藥往往優(yōu)于單方治療，能夠有效地抑制細(xì)菌耐藥性，增強(qiáng)抗菌藥物的抑菌效果。聯(lián)合用藥見表1～2。

抗生素聯(lián)合治療是一種用于限制抗生素耐藥性傳播的有效策略。同時使用兩種或兩種以上抗生素，由于藥物的作用機(jī)制，一般會出現(xiàn)3種聯(lián)合效益：協(xié)同、相加和拮抗[27]。協(xié)同和相加作用的用藥組合會產(chǎn)生以下的用藥優(yōu)勢：擴(kuò)大抗菌譜、增強(qiáng)抗菌作用、減少抗菌藥物的用量和降低藥物的不良反應(yīng)等，所以聯(lián)合用藥應(yīng)選擇具有協(xié)同作用或相加作用的藥物組合[23]。

由表2可知，某些抗菌中藥提取物或單體單用時具有抑菌作用，如裸麥角堿、千金藤提取物、芹菜素和黃芩素等，可通過下調(diào)外排泵基因、破壞細(xì)胞壁合成或抑制生物被膜形成等機(jī)制，增強(qiáng)抗生素的抗菌作用。目前，抗菌肽被認(rèn)為是抗生素類藥物的理想替代品，單用或聯(lián)合抗生素都能很好地殺滅病原體和多重耐藥菌，而與利福平或阿奇霉素聯(lián)用時，能破環(huán)細(xì)胞壁和抑制細(xì)菌生物被膜形成，恢復(fù)多重耐藥菌對相應(yīng)抗生素的敏感性[34]。值得注意的是，富馬酸單用無抗菌作用，但與妥布霉素聯(lián)用時，能增強(qiáng)妥布霉素對細(xì)胞的殺傷力，其增敏作用機(jī)制是通過三羧酸循環(huán)激活細(xì)胞呼吸并刺激質(zhì)子動力，而妥布霉素需要依賴質(zhì)子動力的轉(zhuǎn)運(yùn)才能穿透細(xì)胞并作用于細(xì)胞 [25]。

由表1～2可知，不管是抗生素之間的聯(lián)合用藥還是抗生素與其他藥物的聯(lián)合用藥，其抗菌作用都比單一抗生素強(qiáng)，這也將成為未來治療細(xì)菌耐藥性的一個發(fā)展趨勢。對于聯(lián)合用藥的未來發(fā)展方向，可更多地關(guān)注抗菌中藥，挖掘更多的中藥單體；還可以開發(fā)一些增效劑，增強(qiáng)細(xì)菌對抗生素的敏感性。聯(lián)合用藥雖能提高抗菌效果，但在使用過程中也應(yīng)注意藥物合理配伍和使用，減少藥物間相互作用引起的不良反應(yīng)或產(chǎn)生新的耐藥性。

2.2 反義療法

反義療法有望成為逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性的一種新方法，通過設(shè)計反義寡核苷酸的序列，破環(huán)脫氧核糖核酸到核糖核酸再到蛋白質(zhì)的信息流，使細(xì)菌部分基因無法表達(dá)，恢復(fù)菌株對抗生素的敏感性[35]。反義抗菌劑是一類通過堿基互補(bǔ)配對原則識別靶基因mRNA，調(diào)控靶基因表達(dá)的化學(xué)合成類藥物。反義抗菌劑的核苷酸序列特異性強(qiáng)、長度短，對人類基因表達(dá)的影響風(fēng)險低。設(shè)計反義抗菌劑抑制耐藥基因的表達(dá)有兩種機(jī)制（圖2所示）[36]。

1997年，White等[37]通過設(shè)計反義序列抑制耐藥菌E. coli的marRAB操縱子，成功地提高了諾氟沙星對耐藥菌的殺菌活性，恢復(fù)耐藥菌對諾氟沙星的敏感性，首次證實(shí)通過設(shè)計反義序列能抑制耐藥基因表達(dá)。使用反義寡核苷酸作為抗菌劑最大障礙即是在沒有合適載體的情況下細(xì)菌對抗菌劑的攝取有限，特別是在具有藥物外排機(jī)制的多藥耐藥菌中。DNA納米結(jié)構(gòu)（TDN）已被開發(fā)為反義寡核苷酸的遞送載體，將靶向基因ftsZ的反義肽核酸通過TDN有效運(yùn)送到MRSA細(xì)胞中，能有效抑制細(xì)菌基因ftsZ表達(dá)[38]。另外，抑制細(xì)菌生長的一種方法是阻斷保守基因的表達(dá)，mecA基因在MRSA中高度保守，這使其成為反義抗菌劑的理想靶點(diǎn)。在mecA的mRNA編碼區(qū)發(fā)現(xiàn)一段對反義抑制劑特別敏感的靶序列，將反義寡核苷酸封裝在陰離子脂質(zhì)體中，經(jīng)反義序列處理后的MRSA臨床耐藥菌株表現(xiàn)出對β-內(nèi)酰胺類抗生素敏感[39]。除了設(shè)計反義DNA序列外，還可通過設(shè)計反義RNA序列，抑制必要基因的表達(dá)。acpP（酰基載體蛋白P）是目前最為常用的抗菌反義靶點(diǎn)，對脂肪酸的生物合成至關(guān)重要。通過設(shè)計acpP基因的反義RNA序列，可導(dǎo)致E. coli的AcpP蛋白表達(dá)減少，從而抑制E. coli的生長，降低細(xì)胞活力[40]。

以上研究結(jié)果表明，通過反義療法能中斷必要基因的表達(dá)，恢復(fù)耐藥菌對相應(yīng)抗生素的敏感性和延長現(xiàn)有抗生素的藥效。反義抗菌劑幾乎針對任何微生物，而且具有靶向性，可通過快速設(shè)計和合成，能為藥物的開發(fā)提供靈活性，這可能是逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性的一種有前途策略。

2.3 外排泵抑制劑（EPI）

EPI是近年來興起的研究熱點(diǎn)。EPI主要是通過不同的機(jī)制失活或抑制細(xì)菌的外排泵活性，阻止藥物外排，從而增強(qiáng)抗生素的抗菌作用[17]，達(dá)到逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性的效果。常見EPI種類見表3。

EPI已廣泛在臨床上用于逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性，包括CCCP、維拉帕米、利血平等。CCCP主要通過作用于NorA外排泵的能量源-質(zhì)子動力，并阻斷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的能量供應(yīng)，間接提高細(xì)菌對黏菌素的敏感性[41]。維拉帕米屬于ABC外排泵抑制劑，主要是通過抑制ATP結(jié)合膜糖蛋白[42]。有研究表明，利血平能顯著抑制外排基因mefA的mRNA轉(zhuǎn)錄水平及其編碼蛋白MefA的表達(dá)水平，推測利血平可能是通過影響外排蛋白MefA的表達(dá)，從而發(fā)揮抑制MefA外排泵的形成[43]。溴化乙啶的積累和外排是檢測藥物作用于外排泵良好指標(biāo)，當(dāng)辣椒素作用于SA-1199（野生型）和SA-1199B（過表達(dá)的NorA）時，細(xì)胞內(nèi)的溴化乙啶流出量減少，表明辣椒素能抑制NorA外排泵的形成，增加SA對環(huán)丙沙星的敏感性[45]。

抑制劑是一種具有阻滯或降低細(xì)菌耐藥性的物質(zhì)，除了上述綜述的EPI外，可以根據(jù)不同細(xì)菌耐藥性機(jī)制開發(fā)不同的抑制劑，比如β-內(nèi)酰胺酶抑制劑、丙氨酸消旋酶抑制劑或QS抑制劑等。因外排泵是細(xì)菌正常的生理所需，所以在開發(fā)時，應(yīng)注意避免對正常的生理代謝產(chǎn)生影響。

2.4 基因敲除

基因敲除是自80年代后半期發(fā)展起來的一種分子生物學(xué)技術(shù)[48]，目前已廣泛應(yīng)用于細(xì)菌基因功能等相關(guān)領(lǐng)域研究。基因敲除技術(shù)從傳統(tǒng)的同源重組技術(shù)逐漸發(fā)展出許多的新技術(shù)，如λRed同源重組系統(tǒng)、Cre/LoxP位點(diǎn)特異性重組、插入突變、CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)等[49]。利用基因敲除技術(shù)能有效去除細(xì)菌部分耐藥基因，使其恢復(fù)對抗菌藥物的敏感性見表4[50-56]。

采用同源重組方法從嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌菌株中敲除phop基因，可增加細(xì)菌細(xì)胞膜通透性，恢復(fù)耐藥菌對氨基糖苷類抗生素的敏感性；在進(jìn)一步研究中，強(qiáng)調(diào)以phop基因?yàn)榘悬c(diǎn)，開發(fā)抗多藥耐藥藥物的可能性[51]。包膜多糖輸出蛋白（WZA）對耐碳青霉烯類AB莢膜具有一定的毒力作用，通過同源重組方法清除耐藥菌上的wza基因；結(jié)果顯示，wza基因敲除后，細(xì)菌莢膜缺陷，細(xì)胞壁厚度減少，細(xì)胞粘附力和生物被膜形成能力減弱，從而能增強(qiáng)碳青霉烯類抗生素的抗菌能力以及能降低耐藥菌莢膜的毒力，恢復(fù)細(xì)菌對碳青霉烯類抗生素的敏感性[52]。自2016年首次報道質(zhì)粒攜帶的黏菌素耐藥基因mcr-1以來，mcr-1質(zhì)粒清除和恢復(fù)黏菌素敏感性成為了當(dāng)前的研究熱點(diǎn)[12]。利用CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)技術(shù)能成功敲除E. coli上的耐藥基因mcr-1，后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)，敲除菌株能恢復(fù)對多黏菌素的敏感性[53]。以上研究表明，敲除細(xì)菌部分耐藥基因可抑制或阻斷細(xì)菌耐藥性的表達(dá)，從而恢復(fù)細(xì)菌對相應(yīng)抗生素的敏感性。

基因敲除手段種類繁多，CRISPR/Cas9作為現(xiàn)在常用的基因編輯技術(shù)，具有高效、便捷、精確等優(yōu)點(diǎn)。通過基因敲除技術(shù)，敲除相應(yīng)的耐藥基因，深入探討其耐藥機(jī)制，從而開發(fā)抑制細(xì)菌耐藥性和增強(qiáng)抗菌作用的藥物，達(dá)到逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性目的。

3 結(jié)語與展望

細(xì)菌耐藥性問題是治療細(xì)菌感染的主要障礙，逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性是克服此類難題的有效方法。致力于尋找療效好、毒副作用小與成本低的逆轉(zhuǎn)策略，從而達(dá)到解決細(xì)菌耐藥性的目的是當(dāng)前研究熱點(diǎn)。逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性機(jī)制主要包括消除耐藥質(zhì)粒、抑制主動外排泵、抑制生物被膜形成和抑制耐藥基因表達(dá)等。逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥的策略主要包括聯(lián)合用藥、反義療法、EPI和基因敲除等，以上部分策略在逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性的治療中取得了可喜的成果。

在未來的工作中，可通過分子生物學(xué)等技術(shù)去研究逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性的機(jī)制，深入探討逆轉(zhuǎn)機(jī)制與耐藥機(jī)制之間的聯(lián)系；通過結(jié)合逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性靶點(diǎn)篩選的研究工作，尋找新的藥物作用靶點(diǎn)，開發(fā)新的細(xì)菌耐藥逆轉(zhuǎn)劑，同時避免細(xì)菌對新的逆轉(zhuǎn)藥物產(chǎn)生耐藥性；中藥作為細(xì)菌耐藥逆轉(zhuǎn)劑，具有很大的開發(fā)潛力，因此篩選具有逆轉(zhuǎn)耐藥的中藥也將是一種有效途徑；還可以尋找新的細(xì)菌耐藥逆轉(zhuǎn)策略與思路等。

逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性是控制細(xì)菌耐藥性快速發(fā)展的有效策略，但由于部分策略方法缺乏臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支撐。因此，我們?nèi)匀恍枰钊胩接懩孓D(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性機(jī)制與策略等相關(guān)問題，爭取早日為抑制細(xì)菌耐藥性的發(fā)展和新型逆轉(zhuǎn)劑的研發(fā)提供理論依據(jù)。

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基金項(xiàng)目：廣西區(qū)自然資金項(xiàng)目（No. 2014GXNSFAA118176）

作者簡介：廖燕科，女，生于1996年，在讀碩士研究生，主要研究方向?yàn)樗幬镄聞┬汀⑿轮苿┑难芯颗c開發(fā)，E-mail： 2895824900@qq.com