高效液相色譜—串聯質譜法測定茉莉花茶中農藥多殘留

摘要：采用快速凈化柱（MPFC）凈化組合的QuEChERS優化前處理技術，結合高效液相色譜—串聯質譜法（HPLC-MS/MS）測定茉莉花茶中34種農藥及其代謝物殘留。結果顯示：34種農藥及其代謝物分別在濃度范圍內線性關系良好，相關系數（R）在0.994～0.999之間，定量限（LOQ，S/N≥10）為0.06～2.54 μg/kg；在2、50、100 μg/kg 3個加標水平下，34種農藥及其代謝物的平均回收率為71.65%～118.23%，相對標準偏差（RSD）為0.45%～11.63%。該方法操作簡單高效，穩定性強，靈敏度高，適用于茉莉花茶中多種農藥殘留的快速檢測。

關鍵詞：QuEChERS；茉莉花茶；高效液相色譜—串聯質譜；農藥殘留

中圖分類號：O657.63;TS272.7 文獻標志碼：A

Pesticide Residues Determination in Jasmine Tea by High-performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

FAN Xing1， LIN Fangmao1， LU Yanyan1， MO Ying2*

（1Guangxi Vocational and Technical College， Nanning， Guangxi 530226， China; 2Guangxi Vocational University of Agricultural， Nanning， Guangxi 530009， China）

Abstract： Thirty-four pesticides and their metabolites residues in jasmine tea were determined by high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （HPLC-MS/MS）， with optimized pretreatment prepared through QuEChERS technology of rapid purification column （MPFC）.The results showed that the linearity of the 34 pesticides and their metabolites was good in the concentration range with the correlation coefficient （R） in the range of 0.994-0.999， whose limits of quantification （LOQ， S/N≥10） were in the range of 0.06-2.54 μg/kg; the mean recoveries of the 34 pesticides and their metabolites at 3 spiked levels of 2， 50 and 100 μg/kg were in the range of 71.65%-118.23%， with the relative standard deviation （RSD） of 0.45%-11.63%.The method is simple， efficient， stable and sensitive， and is suitable for the rapid determination of various pesticide residues in jasmine tea.

Key words： QuEChERS; jasmine tea; high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; pesticide residues

廣西溫暖濕潤的氣候非常適合種植茉莉花，廣西茉莉花茶以其獨特的清香和甘甜口感而聞名，深受各地茶葉愛好者的喜愛[1]，19世紀末20世紀初，廣西茉莉花茶遠銷歐洲和世界各地[2]，成為廣西重要的出口商品。時至今日，茉莉花茶不僅是經濟的重要組成部分，也是廣西文化遺產的重要組成部分[3-4]，如廣西橫縣茉莉花茶已經成為地理標志產品[5]。然而農藥殘留問題一直是茉莉花茶重要的質量安全隱患[6]，國內外茉莉花茶的消費者也越來越關注茶葉質量安全，進口國對茶葉農藥殘留的監測也相對嚴格[7]。廣西茉莉花茶產值名列國內外同類產品前茅[8]，因此有必要加強對廣西茉莉花茶農藥殘留的檢測，同時不斷優化檢測技術和方法，防止因農藥殘留問題阻礙茉莉花茶出口。

目前檢測茶葉中農藥殘留常用高效液相色譜法（HPLC）[9]、氣相色譜法（GC）[10]、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）[11]和質譜分析（MS）與HPLC[12]或GC[13-16]聯合使用等方法。但由于樣品中存在某些極性化合物或在高溫下易發生反應，使得氣相色譜分析檢測極性農藥的靈敏度降低，與酶聯免疫吸附試驗一樣在特異性方面不如其他方法。高效液相色譜—串聯質譜法（HPLC-MS/MS）是一種高靈敏度、高選擇性、高效的農藥殘留檢測技術，檢測速度快和樣品制備要求低等優點使其成為許多實驗室檢測茶葉產品農藥殘留的優先選擇[17-19]。因此，本研究也采用HPLC-MS/MS建立廣西茉莉花茶中34種農藥及其代謝物殘留的檢測方法，用QuEChERS前處理技術，并優化凈化組合，即在常規吸附劑中加入多壁碳納米管的快速凈化柱對樣品進行凈化，從而減少色素及基質效應干擾[20]，使檢測茉莉花茶中的農藥多殘留的方法更精確。

1 試驗材料與方法

1.1 儀器

1290高效液相色譜（美國安捷倫科技公司）聯用Triple Quad 5500三重四極桿串聯質譜儀（美國AB SCIEX科技有限公司）配電噴霧離子源、CPA225D電子天平（德國賽多利斯公司）、Thermo Micro17R高速冷凍離心機（美國賽默飛世爾科技有限公司）、ShakerSA320振蕩器（日本雅馬拓科技公司）和Milli-Q超純水儀（美國密理博公司）。

1.2 試劑與材料

德國默克公司：甲酸、乙酸、乙腈（色譜純）。國藥集團化學試劑有限公司：無水乙酸鈉、無水硫酸鎂、乙酸銨（分析純）。北京綠綿科技有限公司：吸附劑，多壁碳納米管的快速凈化柱MPFC-MWCNTs（填料：MWCNTs：45mg，PSA：45mg，無水硫酸鎂：120mg）。

農藥標準品：甲霜靈等共35種化合物標準品（德國Dr. Ehrenstorfer公司，純度均≥98.0%）。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品處理

將茉莉花茶樣品粉碎，稱取樣品2.00 g，放入50 mL聚丙烯離心管中，在15 mL 1%乙酸乙腈和10 mL超純水中浸泡35 min，搖晃5 min，加入脫鹽劑（6 g無水硫酸鎂，1.5 g乙酸鈉），充分搖晃后置于振蕩器上振蕩2 min（500次/min），隨后冰浴冷卻3 min，以8000 r/min離心3 min，吸取1.5 mL上清液到MPFC復雜基質凈化柱上，凈化液用濾膜（0.22 μm有機濾膜）過濾，收集續濾液待檢測。

1.3.2 農藥標準液制備

分別稱取每種化合物標準品100 mg，用乙腈定容于100 mL容量瓶中，制備成1 mg/mL的標準儲備溶液，儲存于-20 ℃冰箱中。分別移取一定體積的各標準儲備液放入100 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容，制備成1 μg/mL的混合標準溶液。

1.3.3 基質匹配工作曲線的配制和繪制

稱取空白基質樣品，按上述1.3.1樣品處理后，制備得空白基質溶液，加入適量上述已配制好的混合標準溶液，配制成質量濃度分別為2、5、10、20、50、80、100 ng/mL的基質標準工作曲線溶液，用儀器定量，繪制出各目標化合物的標準工作曲線。

1.4 分析條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱為SHISEIDOCapcell Pak BB-HC18（3.0 μm，2.1 mm×150 mm），柱溫35 ℃，流速為0.30 mL/min。進樣體積為2.0 μL。流動相A為" " " " " " " "5 mmo/L乙酸銨（含0.1%甲酸），流動相B為甲醇。梯度洗脫程序：［0～2.0］ min，90% A；（2～10］ min，90%→60% A；（10～20］ min，60%→5% A；（20～25］ min，5% A；（25～25.1］ min，5%→90% A；（25.1～30］ min，90% A。

1.4.2 質譜條件

ESI電噴霧離子源，選擇正離子掃描和多反應監測模式。正離子掃描模式：針電壓4500 V，離子源溫度為550 ℃；霧化氣壓力為60.0 psi；輔助氣壓力為60.0 psi；氣簾氣壓力均為30.0 psi；碰撞氣壓力均為7.0 psi。各目標化合物的參考保留時間、監測離子對、去簇電壓（DP）、碰撞電壓（CE）等質譜采集參數詳見表1。

1.5 數據處理

采用MutiQuant 3.0.2軟件（AB SCIEX）和Excel 2022完成數據采集和分析。

2 結果與討論

2.1 質譜條件優化

分別制備每種化合物的標準品（0.1 μg/mL），并使用電噴霧質譜蠕動泵對樣品進行進樣，在正離子模式下，通過優化去簇電壓（DP）值來獲得母離子的最高響應；然后掃描子離子，通過優化碰撞能量CE找出特征離子（最高響應強度）。根據歐盟的法案（2002/657/EC），在低分辨質譜法中，通過確認的鑒定點的數量至少為4個[21]。因此，本實驗中每個化合物選擇1個母離子和2個子離子，鑒定點符合檢測要求，具體質譜參數見表1。

2.2 色譜條件優化

本實驗比較了Waters Atlantis T3（3μm，" " " " " " "2.1 mm×150 mm），SHISEIDOCapcell Pak BB-HC18（3.0 μm，2.1 mm×150 mm），Thermo Hypersil GOLD（1.9μm ，2.1 mm×100 mm）3種不同的色譜柱的分離效果和保留時間，同時比較了甲醇－水、乙腈－水、甲醇－5 mmol/L乙酸銨溶液（0.05% 甲酸）、乙腈－5 mmol/L乙酸銨溶液（0.05% 甲酸）等幾種含有目標化合物的流動相對各流動相的分離性能。結果顯示，甲醇比乙腈離子對響應強度及峰型上的效果更好，而甲酸的加入提高了離子化效率，乙酸銨的加入有效地解決了峰的拖尾和偏差問題，增強了信號響應。且在選擇使用SHISEIDOCapcell Pak BB－HC18色譜柱搭配甲醇－水體系〔5 mmol/L乙酸銨（0.05% 甲酸）〕流動相時，峰型更尖銳，保留時間區分明顯，分辨率高，分離效果好（見圖1）。

2.3 凈化條件

本研究在吸附劑PSA基礎上增加新型的多壁碳納米管（MWCNTs），優化后的凈化組合在凈化茶葉樣品方面具有以下優點：具有高的比表面積，可以有效地吸附和去除茶葉樣品中的雜質。具有良好的穩定性和選擇性， MWCNTs具有化學穩定性和耐降解性同時可以通過特定的化學基團功能化，選擇性地吸附茶葉樣品中的某些化合物，從而實現更精確的純化。因此優化后的凈化組合為消除雜質干擾提供高效的方法，保證各農藥的回收率從而提高檢測準確度。

2.4 線性范圍、檢出限與定量限

制備了7個濃度水平的基質匹配混合標準工作溶液，并用儀器定量，形成標準工作曲線。在2.0～100.0 μg/L的濃度范圍內，34種農藥及其代謝物均表現出良好的線性關系，相關系數（R）在0.994～0.999之間，均大于0.99。以定量離子信噪比S/N≥10計算出35種目標化合物的定量限（LOQ）為0.06～2.54 μg/kg，各目標化合物的定量限均小于標準定量限（見表2），故本實驗方法能滿足茉莉花茶中農藥殘留的實際檢測要求。

2.5 加標回收率與精密度試驗結果

對空白基質樣品進行加標回收實驗，選擇2.0、50.0、100.0 μg/kg的3個水平濃度， 每個濃度水平完成3次平行實驗，獲得的實驗結果表明35種目標化合物的平均回收率為71.65%～118.23%， 精密度RSD為0.45%～11.63%（見表3），均能達到農藥殘留的檢測要求。

2.6 實際樣品檢測

采用本實驗方法，對抽樣于廣西本地市場的36個批次的茉莉花茶樣品進行農藥殘留檢測分析，檢出了甲霜靈和噻蟲胺，檢出農藥的含量均小于GB 23200.13—2016規定的最大殘留限量值。

3 結論

本文利用新型吸附劑多壁碳納米管優化了凈化組合，改良了QuEChERS的預處理方法，建立了HPLC-MS/MS同時快速檢測茉莉花中34種農藥殘留的方法。該方法簡單高效、線性好、穩定性好且回收率和靈敏度都較高，適用于茉莉花茶中農藥多殘留的檢測分析，為茉莉花茶中農藥多殘留的快速檢測和風險篩查等方面的研究提供一種可靠的檢測方法。

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責任編輯：李菊馨

基金項目：廣西高校中青年教師科研能力提升項目（2021KY0983）；2021年廣西職業技術學院項目“基于高分辨質譜對茶葉安全評估的研究”（桂職院〔2021〕121號211201）。

第一作者：范興（1988—），男，碩士研究生，工程師，主要研究方向為食品分析與檢測。

*通信作者：莫迎（1970—），女，碩士研究生，主任藥師，主要研究方向為食品藥品質量分析與檢測，E-mail：941977969@qq.com。

收稿日期：2023-04-18